發(fā)布時(shí)間：2020-07-10 05:46

【摘要】：中華按蚊是中國(guó)及東南亞國(guó)家最主要的瘧疾等疾病的傳播媒介之一,防控中華按蚊,切斷其傳播途徑,是控制瘧疾的關(guān)鍵。利用殺蟲(chóng)劑控制傳播媒介是抗擊瘧疾的主要方法,擬除蟲(chóng)菊酯類(lèi)殺蟲(chóng)劑是世界衛(wèi)生組織唯一批準(zhǔn)可用于浸漬蚊帳的殺蟲(chóng)劑,其中溴氰菊酯是中國(guó)應(yīng)用最多的一種殺蟲(chóng)劑。在殺蟲(chóng)劑的長(zhǎng)期作用下,蚊蟲(chóng)不僅形成嚴(yán)重的抗藥性,其行為還發(fā)生改變,嚴(yán)重削弱現(xiàn)有防治手段的效果。中華按蚊對(duì)溴氰菊酯的抗性已有大量報(bào)道,但其行為變化還無(wú)相關(guān)研究。本研究以實(shí)驗(yàn)室敏感種群(WX-LS)和云南元陽(yáng)(YY-FR)、重慶璧山(BS-FR)、安徽五河(WH-FR)野外抗性種群為研究對(duì)象,采用WHO區(qū)分劑量標(biāo)準(zhǔn)和方法測(cè)定中華按蚊對(duì)溴氰菊酯的抗性水平,利用分子手段進(jìn)行物種鑒定和檢測(cè)kdr基因突變情況;利用WHO錐形器分別測(cè)定這四個(gè)種群對(duì)溴氰菊酯蚊帳的接觸性應(yīng)激行為;對(duì)云南元陽(yáng)野外和實(shí)驗(yàn)室敏感種群進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組測(cè)序,初步探討及推測(cè)其行為改變的分子機(jī)制。主要研究結(jié)果如下:(1)中華按蚊的抗性水平及kdr突變檢測(cè)通過(guò)接觸筒法對(duì)中華按蚊溴氰菊酯抗藥性進(jìn)行生測(cè),發(fā)現(xiàn)元陽(yáng)、璧山和五河的野外種群對(duì)溴氰菊酯均產(chǎn)生了抗性,其中五河種群的抗性水平最高,其次是元陽(yáng)和璧山種群。Kdr突變檢測(cè)結(jié)果顯示,璧山和五河種群均有3種kdr突變類(lèi)型,分別為L(zhǎng)1014F(TTT和TTC)和L1014C(TGT),元陽(yáng)種群沒(méi)有kdr突變。璧山種群的kdr突變頻率為82.88%,五河種群的突變頻率為100%。(2)不同地理種群對(duì)溴氰菊酯的接觸性應(yīng)激行為測(cè)定采用錐形器測(cè)定方法比較了實(shí)驗(yàn)室敏感蚊蟲(chóng)和野外抗性蚊蟲(chóng)對(duì)溴氰菊酯處理蚊帳(Deltamethrin treated net,DTN)的接觸性應(yīng)激行為,研究結(jié)果發(fā)現(xiàn),敏感種群對(duì)溴氰菊酯有明顯的接觸性應(yīng)激反應(yīng),而野外抗性種群對(duì)溴氰菊酯的應(yīng)激反應(yīng)與實(shí)驗(yàn)室敏感種群相比明顯減弱。元陽(yáng)抗性種群無(wú)kdr突變,其接觸性應(yīng)激行為也明顯減弱,說(shuō)明行為改變與kdr突變無(wú)關(guān)。(3)元陽(yáng)行為弱化種群與實(shí)驗(yàn)室敏感種群的轉(zhuǎn)錄組測(cè)序與表達(dá)譜分析采用錐形器測(cè)定方法篩選應(yīng)激行為弱化的元陽(yáng)種群,通過(guò)轉(zhuǎn)錄組測(cè)序比較元陽(yáng)種群和實(shí)驗(yàn)室敏感種群的差異表達(dá)基因。分析結(jié)果發(fā)現(xiàn)有4101個(gè)基因顯著差異表達(dá),其中,在元陽(yáng)種群中上調(diào)表達(dá)的基因有1843個(gè),下調(diào)表達(dá)的基因有2258個(gè)。GO注釋的差異基因有2494個(gè),主要顯著富集在生物過(guò)程和分子功能兩部分,包括氧化還原過(guò)程、單個(gè)有機(jī)體代謝過(guò)程、有機(jī)循環(huán)化合物結(jié)合和催化活性等類(lèi)別。差異上調(diào)表達(dá)基因的KEGG分析結(jié)果顯示共有10條通路是顯著富集的,分別為真核生物核糖體合成、DNA復(fù)制、錯(cuò)配修復(fù)、RNA聚合酶、核苷酸切除修復(fù)、堿基切除修復(fù)、RNA轉(zhuǎn)運(yùn)等;差異下調(diào)表達(dá)基因的KEGG分析發(fā)現(xiàn)碳代謝、淀粉和蔗糖代謝和丙酮酸代謝等通路是顯著富集的。推測(cè)野外蚊蟲(chóng)接觸性應(yīng)激行為的減弱可能與能量供應(yīng)水平減弱有關(guān)。
【學(xué)位授予單位】：重慶師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類(lèi)號(hào)】：R184.31
【圖文】：

圖 2.1 采樣地圖Figure 2.1 Sampling map陽(yáng)縣是處于云南省南部的紅河州，在哀牢山和紅河的南邊，也因其處元江之南，故得此名。元陽(yáng)縣是低緯度高海拔的地區(qū)，其氣候?qū)賮啛釟夂蝾?lèi)型，具有“一山分四季，隔里不同天”的氣候特點(diǎn)，年平均氣溫 2

圖 2.2 中華按蚊分子鑒定與 kdr 基因擴(kuò)增結(jié)果1：安徽野外樣品；2：重慶野外樣品；3：云南野外樣品olecular identification and kdr gene amplification results of Anoample of Anhui; 2: Field sample of Chongqing; 3: Field sample

13圖 2.3 中華按蚊的 kdr 基因核苷酸序列色譜圖鈉離子通道基因 1014 位點(diǎn)上的密碼子用矩形表示；鑒定出了 8 種基因型，5 種雜合型 (K = G/T;Y = T / C;S = G / C)

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