本文關(guān)鍵詞：紅色熒光蛋白標記的鼠李糖乳樣菌在小鼠腸道內(nèi)運動及定植情況研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：隨著人們對飲食及健康之間關(guān)系的日益關(guān)注,研究和開發(fā)出健康和功能性食品已經(jīng)成為目前食品科學研究的一個重要趨勢。據(jù)報道,攝入益生菌會調(diào)節(jié)腸道菌群,增強宿主的免疫力。益生菌發(fā)揮其有益作用的前提是可以順利通過消化道并黏附或定植在腸道粘液或上皮細胞。這需要該菌株具有對胃液中酸性環(huán)境的耐受性及對小腸中膽鹽的抵抗力。鼠李糖乳桿菌是分離自健康人體腸道,現(xiàn)已被世界所了解,屬于第三代益生菌。該菌株的優(yōu)勢主要表現(xiàn)在對膽汁和胃酸的耐受性,能在人體內(nèi)長時間定殖及較穩(wěn)定的存在于乳制品中。鑒于鼠李糖乳桿菌的重要益生作用與特點,對其在腸道內(nèi)定植機理的研究顯得至關(guān)重要。而低聚糖作為研究較多益生元,是公認的雙歧因子,它不能被宿主吸收消化和被病原菌利用,僅能被益生菌利用,因此低聚糖類可促進益生菌大量繁殖,增強益生菌的競爭優(yōu)勢。本試驗以低聚糖類益生元為試驗材料,鼠李糖乳桿菌05-28為受試菌株,首先用紅色熒光蛋白dsred2標記鼠李糖乳桿菌05-28,將該重組菌株灌胃小鼠,觀察該菌在小鼠腸道各部位定植規(guī)律,然后在體外篩選出對重組鼠李糖乳桿菌增殖能力較強的低聚糖,進一步研究低聚糖在小鼠體內(nèi)對重組菌株的影響。本研究首先將重組質(zhì)粒p MG36e-dsred2電轉(zhuǎn)化到鼠李糖乳桿菌05-28后,經(jīng)過菌液PCR及提取質(zhì)粒驗證,質(zhì)粒p MG36e-dsred2成功轉(zhuǎn)入試驗菌株中。用熒光顯微鏡觀察重組鼠李糖乳桿菌可看到明顯紅色熒光,dsred2基因在受試菌株中表達。隨后檢測鼠李糖乳桿菌05-28及重組鼠李糖乳桿菌對人工胃液胃腸液的耐受能力。經(jīng)人工胃腸液消化后兩株菌存活率均無明顯差異�？捎弥亟M鼠李糖乳桿菌進行后續(xù)小鼠腸道內(nèi)定植情況的探究試驗。將重組鼠李乳桿菌灌胃BALB/c小鼠,取其各腸道制作石蠟切片,利用熒光顯微鏡觀察重組菌株在小鼠腸道黏附情況,圖片顯示重組菌株能黏附于小鼠腸道絨毛。然后檢測其在腸道內(nèi)的定植規(guī)律,在口服3 h后小鼠腸道各部位均能檢測到重組菌株,4天后達到定植的高峰,第7天留在小鼠腸道粘膜表面的重組菌株十二指腸占第1天的14.10%、空腸為14.35%、回腸為36.01%、結(jié)腸為27.3%,第15天小鼠各腸道均未檢測到重組菌株,定植規(guī)律為回腸結(jié)腸空場十二指腸。本試驗采用比濁法研究了低聚果糖、低聚木糖、低聚異麥芽糖及菊粉在體外對重組鼠李糖乳桿菌生長情況的影響。篩選出兩種對重組菌株具有較好的增菌作用的低聚糖。即低聚果糖在添加量為2.4%,低聚木糖添加量為1.2%時,對重組菌株增值效果最好。因此,進一步研究低聚果糖及低聚木糖在小鼠腸道內(nèi)對重組菌株的影響。將BALB/c雄性小鼠隨機分為7組,對照組給予的重組菌及PBS,試驗組分別給予重組菌及低、中、高劑量的低聚果糖及低聚木糖,連續(xù)給予14天。在連續(xù)給予小鼠低聚果糖7天后,與對照組相比低、中、高劑量組重組菌的數(shù)量均無明顯變化。連續(xù)給予14天除低劑量組無明顯變化外,中、高劑量組均能顯著的增殖重組鼠李糖乳桿菌。連續(xù)灌胃小鼠低聚木糖7天,與對照組相比低、中劑量組重組鼠李糖乳桿菌的數(shù)量無明顯變化,高劑量組有明顯增加。連續(xù)灌胃14天低、中、高劑量組均能顯著的增殖重組鼠李糖乳桿菌,但中、高劑量組無明顯差異。停止灌胃后16天各腸道仍能檢測到少量重組菌株。且結(jié)腸最多,回腸次之,十二指腸最少,說明低聚糖主要作用在回腸及結(jié)腸部位。本研究在探索鼠李乳桿菌在腸道內(nèi)定植的基礎(chǔ)上,研究了益生元與重組菌株定植能力的關(guān)系,加深了對該菌的了解,為其進一步的應用奠定了基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：鼠李糖乳桿菌 紅色熒光蛋白 定植 低聚果糖 低聚木糖
【學位授予單位】：河北農(nóng)業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R151
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• abstract6-10
• 1 引言10-19
• 1.1 益生菌10-12
• 1.1.1 益生菌的來源和分類10
• 1.1.2 益生菌應具備的條件10
• 1.1.3 益生菌對人體的生理功能10-12
• 1.1.4 益生菌制品的發(fā)展現(xiàn)狀及存在問題12
• 1.2 鼠李糖乳桿菌12-13
• 1.2.1 鼠李糖乳桿菌簡介12-13
• 1.2.2 鼠李糖乳桿菌的研究現(xiàn)狀13
• 1.3 紅色熒光蛋白的研究進展13-16
• 1.3.1 紅色熒光蛋白的理化性質(zhì)14
• 1.3.2 紅色熒光蛋白的優(yōu)缺點14-15
• 1.3.3 紅色熒光蛋白的修飾改進15
• 1.3.4 紅色熒光蛋白的應用15-16
• 1.4 益生元16-17
• 1.4.1 益生元的概念及物化特性16
• 1.4.2 益生元的生理功能16-17
• 1.4.3 益生元應用現(xiàn)狀17
• 1.5 課題研究的意義及內(nèi)容17-19
• 1.5.1 研究意義17-18
• 1.5.2 課題研究基本內(nèi)容18-19
• 2 材料與方法19-29
• 2.1 菌株及質(zhì)粒19
• 2.2 益生元19
• 2.3 培養(yǎng)基及緩沖液19-20
• 2.3.1 培養(yǎng)基19
• 2.3.2 緩沖液19-20
• 2.4 主要試驗試劑20
• 2.5 主要儀器設(shè)備20-21
• 2.6 試驗試劑及藥品的配制21-22
• 2.7 試驗方法22-29
• 2.7.1 提取大腸桿菌DH5α 中質(zhì)粒pMG36e-dsred2 及定量檢測22-23
• 2.7.2 篩選轉(zhuǎn)化子的紅霉素濃度的確定23
• 2.7.3 鼠李糖乳桿菌 05-28 原生質(zhì)體的制備及電擊轉(zhuǎn)化23-24
• 2.7.4 陽性轉(zhuǎn)化子的篩選24-25
• 2.7.5 菌株體外耐受性檢測25
• 2.7.6 菌株體外黏附性檢測25-26
• 2.7.7 重組鼠李糖乳桿菌在小鼠腸道內(nèi)定植情況研究26-27
• 2.7.8 益生元對重組鼠李糖乳桿菌體外生長的影響27
• 2.7.9 益生元對重組鼠李糖乳桿菌定植的影響27-29
• 3 結(jié)果與分析29-44
• 3.1 轉(zhuǎn)化子鑒定29-31
• 3.1.1 轉(zhuǎn)化子PCR鑒定29
• 3.1.2 乳酸菌提取質(zhì)粒鑒定29-30
• 3.1.3 pMG36e-dsred2 在鼠李糖乳桿菌 05-28 中表達30-31
• 3.2 菌株外耐受性檢測結(jié)果31-32
• 3.3 菌株外黏附性檢測結(jié)果32-33
• 3.4 重組鼠李糖乳桿菌在小鼠腸道內(nèi)定植及黏附情況研究33-37
• 3.4.1 重組鼠李糖乳桿菌在小鼠腸道內(nèi)黏附情況33-34
• 3.4.2 重組鼠李糖乳桿菌在小鼠腸道內(nèi)定植情況34-37
• 3.5 不同益生元對重組鼠李糖乳桿菌體外生長的影響37-39
• 3.5.1 重組鼠李糖乳桿菌在MRS及基礎(chǔ)培養(yǎng)基中生長曲線測定37
• 3.5.2 四種益生元對重組鼠李糖乳桿菌體外生長的影響37-39
• 3.6 低聚果糖及低聚木糖對小鼠腸道內(nèi)重組鼠李糖乳桿菌的影響39-44
• 3.6.1 不同劑量的低聚果糖對小鼠腸道不同部位重組鼠李糖乳桿菌的影響39-41
• 3.6.2 不同劑量的低聚木糖對小鼠腸道不同部位重組鼠李糖乳桿菌的影響41-44
• 4 討論44-47
• 4.1 體外耐受人工胃腸液能力與菌株腸道內(nèi)定植能力的關(guān)系44
• 4.2 體外黏附性與菌株腸道內(nèi)定植能力的關(guān)系44
• 4.3 重組鼠李糖乳桿菌在小鼠腸道內(nèi)定植44-45
• 4.4 益生元對重組鼠李糖乳桿菌體外生長的影響45
• 4.5 益生元對重組鼠李糖乳桿菌的影響45-47
• 5 結(jié)論47-48
• 參考文獻48-53
• 在校期間發(fā)表的學術(shù)論文53-54
• 作者簡介54-55
• 致謝55-56

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 李軍訓;羅學剛;高潔;郝冉;張同存;;益生菌的分類、生理功能與有效性評價研究進展[J];中國農(nóng)業(yè)科技導報;2010年06期

  本文關(guān)鍵詞：紅色熒光蛋白標記的鼠李糖乳樣菌在小鼠腸道內(nèi)運動及定植情況研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：269305