發(fā)布時(shí)間：2020-05-17 01:57

【摘要】：研究背景三氯乙烯(Trichloroethylene TCE)是一種有機(jī)溶劑,具有揮發(fā)性。職業(yè)中TCE長期接觸者出現(xiàn)職業(yè)性三氯乙烯藥疹樣皮炎(occupational dermatitis medicamentosa-like of trichloroethylene,ODMLT)。一般ODMLT被認(rèn)為是T淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng),但無法完全解釋該病的發(fā)病過程。部分臨床ODMLT患者出現(xiàn)了較為嚴(yán)重的腎臟損傷,腎臟損傷是該病臨床病死率高的主要原因之一,這提示ODMLT可能還存在除遲發(fā)性變態(tài)反應(yīng)以外的發(fā)病機(jī)制,腎臟損傷的機(jī)制尤為重要。研究發(fā)現(xiàn)長期的TCE低濃度接觸后,在人和小鼠體內(nèi)均出現(xiàn)氧化應(yīng)激指標(biāo)的升高,提示導(dǎo)致腎臟損傷的原因可能是腎臟出現(xiàn)氧化應(yīng)激狀態(tài)。研究表明氧化應(yīng)激狀態(tài)與內(nèi)皮細(xì)胞相關(guān)黏附分子的表達(dá)異常關(guān)系密切,黏附分子的異常表達(dá)也可加重臟器的損傷。本研究通過腹腔注射四甲基哌啶(4-Hydroxy-TEMPO,Tempol)調(diào)節(jié)致敏小鼠氧化應(yīng)激狀態(tài),嘗試解釋氧化應(yīng)激在TCE致敏小鼠腎血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷中的作用。研究目的本研究在TCE致敏模型基礎(chǔ)上腹腔注射一種超氧化物清除劑Tempol,檢測小鼠腎臟氧化應(yīng)激指標(biāo),以及內(nèi)皮細(xì)胞相關(guān)黏附分子的表達(dá)情況,探討氧化應(yīng)激在TCE致敏小鼠腎血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷中的作用。研究方法雌性6-8周清潔級BALB/c小鼠40只。隨機(jī)分成四組,空白組(5只)、溶劑組(5只)、TCE組(15只)、TCE+Tempol組(15只),采用課題組沿用的TCE小鼠模型建模,末次激發(fā)處理之前30分鐘TCE+Tempol組腹腔注射Tempol。末次激發(fā)處理后24h根據(jù)皮膚反應(yīng)進(jìn)行評分,并劃分致敏組和非致敏組,72小時(shí)眼球取血、無菌取腎臟。檢測血清肌酐(Cre)、尿素氮(BUN);HE染色檢測腎臟病理;組化法檢測腎臟e NOS、VCAM-1、ICAM-1以及E-selectin表達(dá);試劑盒檢測腎臟NOS、NO水平,以及SOD、MDA水平;Western Blot法檢測腎臟VCAM-1、ICAM-1和E-selectin蛋白的表達(dá);RT-PCR檢測ICAM-1、VCAM-1和E-selectin的基因轉(zhuǎn)錄水平。研究結(jié)果1皮膚致敏:空白、溶劑組小鼠背部皮膚未出現(xiàn)水腫和紅斑,TCE組致敏率為40%(6/15),TCE+Tempol組致敏率為33.3%(5/15),差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。2腎功能檢測:血清Cre和BUN在空白組、溶劑組、未致敏組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;與溶劑組相比,TCE致敏組和TCE+Tempol致敏組Cre和BUN升高;TCE致敏組Cre和BUN值相對TCE+Tempol致敏組升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。3腎臟病理:空白、溶劑和非致敏組未發(fā)現(xiàn)明顯的腎臟病理學(xué)變化;TCE致敏組腎小管部位出現(xiàn)細(xì)胞空泡樣改變,上皮細(xì)胞部分發(fā)生溶解;TCE+Tempol致敏組出現(xiàn)少量細(xì)胞空泡樣變性,上皮細(xì)胞溶解,相比TCE致敏組有明顯改善。4腎臟NO/NOS/SOD水平:腎臟NO、NOS和SOD水平在空白組、溶劑組、未致敏組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;與溶劑組相比,TCE致敏組和TCE+Tempol致敏組NO、NOS和SOD水平降低;TCE致敏組NO、NOS和SOD水平相對TCE+Tempol致敏組降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。5腎臟MDA水平:MDA在空白組、溶劑組、未致敏組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;與溶劑組相比,TCE致敏組和TCE+Tempol致敏組MDA水平升高;TCE致敏組MDA值相對TCE+Tempol致敏組升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。6腎臟e NOS沉積水平:空白、溶劑和非致敏組e NOS大量表達(dá),而TCE致敏組僅腎小管有少量表達(dá),TCE+Tempol致敏組腎小球和腎小管均有少量表達(dá)。7腎臟E-selectin、VCAM-1、ICAM-1蛋白水平:檢測發(fā)現(xiàn)空白組、溶劑組、未致敏組可見少量的E-selectin、VCAM-1和ICAM-1表達(dá),TCE致敏組和TCE+Tempol致敏組表達(dá)均明顯升高,TCE致敏組相對TCE+Tempol致敏組表達(dá)較高。8腎臟E-selectin、VCAM-1和ICAM-1轉(zhuǎn)錄水平:腎臟E-selectin、VCAM-1以及ICAM-1轉(zhuǎn)錄水平在空白組、溶劑組以及未致敏組之間差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;與溶劑組相比,TCE致敏組和TCE+Tempol致敏組E-selectin、VCAM-1、ICAM-1轉(zhuǎn)錄水平升高,TCE致敏組E-selectin轉(zhuǎn)錄水平較TCE+Tempol致敏組升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。TCE致敏組和TCE+Tempol致敏組VCAM-1、ICAM-1轉(zhuǎn)錄水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論1 TCE致敏組腎臟出現(xiàn)氧化應(yīng)激相關(guān)指標(biāo)的升高,TCE介導(dǎo)的腎損傷與氧化應(yīng)激有關(guān)。2腹腔注射Tempol可通過降低腎臟氧化應(yīng)激水平減輕TCE介導(dǎo)的腎損傷。3 TCE+Tempol致敏組相對TCE致敏組黏附分子表達(dá)有所下降,說明氧化應(yīng)激狀態(tài)改善可減輕腎臟內(nèi)皮細(xì)胞損傷。4 ICAM-1和VCAM-1在致敏組轉(zhuǎn)錄水平無差異,提示Tempol降低兩種蛋白的表達(dá)水平,并不依賴于ICAM-1和VCAM-1轉(zhuǎn)錄水平的下降。
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R135

【參考文獻(xiàn)】

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