小型基因芯片作為輻射生物劑量計(jì)的探索
本文關(guān)鍵詞:小型基因芯片作為輻射生物劑量計(jì)的探索,由筆耕文化傳播整理發(fā)布。
【摘要】:目的:開(kāi)發(fā)針對(duì)輻射損傷人員的小型基因芯片,對(duì)X射線照射人外周血淋巴細(xì)胞后的基因表達(dá)進(jìn)行了分析和驗(yàn)證,為探究不同劑量輻射的分子作用機(jī)制和優(yōu)化生物劑量計(jì)提供了進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。方法:1.以50種輻射敏感基因作為基礎(chǔ),研制了一種小型基因芯片。2.分別采用輻射劑量為0.1Gy、0.5Gy、2Gy的X射線照射人外周血淋巴細(xì)胞。3.照射后4小時(shí)及20小時(shí),用自主研制的基因芯片檢測(cè)淋巴細(xì)胞基因表達(dá)譜的改變,芯片表達(dá)譜數(shù)據(jù)通過(guò)NimbleScan軟件分析,選擇差異表達(dá)≥1.5倍為輻射誘導(dǎo)反應(yīng)基因。4.利用GO方法分析篩選出的部分輻射反應(yīng)基因的生物學(xué)功能。結(jié)果:1.利用基因芯片技術(shù)研究x射線照射人外周血淋巴細(xì)胞4h后,0.1Gy組基因XPC表達(dá)上調(diào),SSBP2表達(dá)下調(diào);0.5Gy組基因BBC、GADD45A、IER5、XPC表達(dá)上調(diào),SSBP2 CCT5表達(dá)下調(diào);2Gy組基因BBC、CDKNIA、GADD45A、IER5 TP53I3、 XRCC5、XPC表達(dá)上調(diào),CCT5、SSBP2表達(dá)下調(diào)。照射20h后,0.5Gy組BAX、BBC3、 TP53I3、XPC表達(dá)上調(diào),CCT5、PCNA表達(dá)下調(diào);2Gy組BBC3、CDKN1A、TP53I3、 XRCC5、XPC上調(diào),CCT5、PCNA表達(dá)下調(diào)。2.利用GO分析得出,低劑量輻射誘導(dǎo)產(chǎn)生的基因主要參與細(xì)胞間信號(hào)通路、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、細(xì)胞/組織防御、內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定等過(guò)程,而高劑量誘導(dǎo)產(chǎn)生的基因主要參與細(xì)胞凋亡、細(xì)胞增殖、細(xì)胞周期阻滯等過(guò)程。結(jié)論:1.小型基因芯片技術(shù)可作為一種有效的輻射生物劑量計(jì)。2.基因BBC3、CCT5、 CDKNIA、GADD45A、IER5、PCNA表達(dá)呈劑量依賴性,可作為新型生物劑量計(jì)。3.基因DDB2在不同的實(shí)驗(yàn)中表達(dá)為不同的結(jié)果,其是否能作為生物劑量計(jì)需要慎重考慮。
【關(guān)鍵詞】:電離輻射 基因芯片 輻射誘導(dǎo)基因 高低劑量 GO分析
【學(xué)位授予單位】:濟(jì)南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2015
【分類號(hào)】:R144
【目錄】:
- 研究生導(dǎo)師及課題指導(dǎo)小組介紹4-7
- 摘要7-8
- ABSTRACT8-10
- 主要符號(hào)表10-11
- 前言11-13
- 材料與方法13-26
- 1 實(shí)驗(yàn)材料13-18
- 1.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞13
- 1.2 主要試劑13-17
- 1.3 主要實(shí)驗(yàn)設(shè)備及器材17-18
- 2 實(shí)驗(yàn)方法18-26
- 2.1 細(xì)胞培養(yǎng)及照射18
- 2.2 提取細(xì)胞的總RNA18-19
- 2.3 RNA濃度分析和純度19
- 2.4 總RNA純化及質(zhì)檢19-20
- 2.5 變性瓊脂糖凝膠電泳20
- 2.6 cDNA合成20-21
- 2.7 RNA酶去除21-22
- 2.8 cDNA制備22
- 2.9 樣品標(biāo)記22-23
- 2.10 確定輻射敏感基因23
- 2.11 設(shè)計(jì)探針23-24
- 2.12 制備基因芯片24
- 2.13 芯片的雜交與洗滌24-26
- 2.14 掃描26
- 結(jié)果26-46
- 1 RNA質(zhì)控26
- 2 基因芯片熒光掃描結(jié)果26-30
- 3 基因芯片信號(hào)散點(diǎn)圖30-33
- 4 芯片雜交結(jié)果33-41
- 5 PATHWAY分析41-44
- 6 GO分析44-46
- 討論46-52
- 結(jié)語(yǔ)52-53
- 參考文獻(xiàn)53-57
- 綜述57-63
- 參考文獻(xiàn)60-63
- 攻讀碩士學(xué)位期間的研究成果63-64
- 致謝64
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