【摘要】：一、研究背景近年來(lái),隨著蚊媒染病的不斷擴(kuò)散,蚊媒防治已成為公共衛(wèi)生領(lǐng)域的熱點(diǎn)問(wèn)題。化學(xué)防制是目前防蚊控蚊的主要策略。隨著化學(xué)殺蟲(chóng)劑的頻繁使用,蚊蟲(chóng)抗藥性呈不斷增強(qiáng)的趨勢(shì)。目前,研究發(fā)現(xiàn):在蚊蟲(chóng)抗性產(chǎn)生機(jī)制中代謝抗性與靶標(biāo)抗性的作用機(jī)理與氨基酸水平的改變具有潛在相關(guān)性。本課題組前期工作發(fā)現(xiàn):實(shí)驗(yàn)室抗性品系與敏感品系幼蟲(chóng)體內(nèi)代謝物存在顯著差異,多種氨基酸差異可能與抗性的產(chǎn)生相關(guān)。本研究利用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜建立白紋伊蚊幼蟲(chóng)氨基酸代謝物的檢測(cè)方法,探索白紋伊蚊幼蟲(chóng)體內(nèi)與溴氰菊酯抗性形成及毒性相關(guān)的氨基酸標(biāo)志物。二、研究目的1.建立白紋伊蚊氨基酸的液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用檢測(cè)方法;2.比較溴氰菊酯抗性品系與敏感品系白紋伊蚊幼蟲(chóng)氨基酸的水平差異,為白紋伊蚊溴氰菊酯抗性標(biāo)志物篩選提供參考;3.觀察溴氰菊酯暴露前后抗性白紋伊蚊幼蟲(chóng)氨基酸水平差異,探索溴氰菊酯毒性相關(guān)氨基酸標(biāo)志物。三、研究方法1.液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用檢測(cè)方法的建立參考文獻(xiàn)[1-2]建立液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用(LC-MS/MS)檢測(cè)方法,通過(guò)預(yù)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行參數(shù)校正。加入內(nèi)標(biāo)控制系統(tǒng)誤差,設(shè)置6個(gè)平行樣品控制隨機(jī)誤差,采用6種質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)濃度氨基酸檢測(cè)樣本回收率。2.種群抗性測(cè)定采用WHO推薦的幼蟲(chóng)浸潰法檢測(cè)白紋伊蚊種群的半數(shù)致死濃度(lethal concentration 50,LC50),根據(jù)待測(cè)樣本與實(shí)驗(yàn)室敏感品系樣本LC50的比值計(jì)算出抗性倍數(shù)確定抗性程度。3.野外蚊蟲(chóng)的采集與飼養(yǎng)根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道[7]及課題組現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè),分別從廣州市城區(qū)和郊區(qū)采集不同抗性程度的白紋伊蚊幼蟲(chóng),帶回實(shí)驗(yàn)室飼養(yǎng)至F1代供實(shí)驗(yàn)用。4.抗性種群藥物暴露實(shí)驗(yàn)參照WHO推薦的幼蟲(chóng)浸漬法,對(duì)確定為抗性種群的F1代白紋伊蚊幼蟲(chóng)進(jìn)行溴氰菊酯暴露實(shí)驗(yàn),分為藥物暴露組、丙酮暴露組和空白對(duì)照組;暴露24h后回收各組幼蟲(chóng)樣本,用于氨基酸檢測(cè)。5.幼蟲(chóng)氨基酸水平的檢測(cè)利用LC-MS/MS檢測(cè)白紋伊蚊幼蟲(chóng)氨基酸信號(hào),將信號(hào)峰導(dǎo)入Chemview軟件進(jìn)行定量分析,得到各組幼蟲(chóng)體內(nèi)17種氨基酸濃度水平。6.統(tǒng)計(jì)分析與作圖利用SPSS19.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,不同組別的氨基酸水平比較采用單因素方差分析,以p0.05作為統(tǒng)計(jì)學(xué)差異的判斷標(biāo)準(zhǔn),作圖采用R、Graphpad5.01軟件。四、研究結(jié)果1.實(shí)驗(yàn)室抗性品系白紋伊蚊瓜氨酸與脯氨酸這2種氨基酸濃度水平明顯高于實(shí)驗(yàn)室敏感品系(p0.05);2.野生抗性品系與實(shí)驗(yàn)室敏感品系相比,有7種氨基酸水平出現(xiàn)差異(p0.05),其中,抗性品系中的丙氨酸、瓜氨酸和脯氨酸高于敏感品系,谷氨酸、組氨酸和纈氨酸低于敏感品系;3.藥物組幼蟲(chóng)體內(nèi)12種氨基酸(丙氨酸、瓜氨酸、酪氨酸、甘氨酸、亮氨酸、鳥(niǎo)氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、絲氨酸、組氨酸、蘇氨酸、蛋氨酸)與空白對(duì)照組出現(xiàn)差異(p0.05),其中11種氨基酸水平在暴露后降低,而組氨酸水平在暴露后升高;藥物組與丙酮暴露組幼蟲(chóng)體內(nèi)的丙氨酸、瓜氨酸、亮氨酸和苯丙氨酸的變化出現(xiàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p0.05)。五、研究結(jié)論1.LC-MS/MS用于檢測(cè)白紋伊蚊幼蟲(chóng)氨基酸水平檢測(cè),具有快速、簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確的特點(diǎn);2.丙氨酸、瓜氨酸、谷氨酸、組氨酸、脯氨酸、纈氨酸、蛋氨酸7種氨基酸可能與溴氰菊酯抗性相關(guān);3.溴氰菊酯丙酮溶液暴露可導(dǎo)致抗性白紋伊蚊幼蟲(chóng)體內(nèi)12種氨基酸水平發(fā)生改變,其中丙氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸和瓜氨酸僅與溴氰菊酯暴露有關(guān),其余7種氨基酸水平的改變與丙酮溶液相關(guān)。
【圖文】：

２．４．２氨基酸檢測(cè)結(jié)果逡逑比較實(shí)驗(yàn)室誘導(dǎo)抗性品系與敏感品系白紋伊蚊氨基酸濃度水平，發(fā)現(xiàn)有兩逡逑種氨基酸（瓜氨酸、脯氨酸）濃度水平存在顯著差異（ｐ＜０．０５）（詳見(jiàn)表５，圖１），逡逑其中實(shí)驗(yàn)室敏感品系Ｉ瓜氨酸濃度水平為實(shí)驗(yàn)室抗性品系的７６．１５％邋（ｐ＜０．０５），逡逑而脯氨酸濃度水平為抗性品系的６１．２１％邋（ｐ＜０．０５），即較之敏感品系白紋伊蚊幼逡逑蟲(chóng)，抗性品系白紋伊蚊幼蟲(chóng)體內(nèi)瓜氨酸、脯氨酸均出現(xiàn)了上調(diào)（詳見(jiàn)圖２）。．逡逑表５．實(shí)驗(yàn)室抗性品系與敏感品系白紋伊蚊氨基酸濃度水平逡逑Ｔａｂ．５邋Ｔｈｅ邋ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ邋ｏｆ邋ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ邋ａｍｉｎｏ邋ａｃｉｄｓ邋ｉｎ邋ｒｅｓｉｓｔａｎｔ邋ｓｔｒａｉｎ邋ａｎｄ邋ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ邋ｓｔｒａｉｎ邋ｏｆ逡逑Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ逡逑飛號(hào)￣￣ｍｍ邐實(shí)驗(yàn)室敏感品系ｉ邐實(shí)驗(yàn)室抗性品ｉ邐ｐ－逡逑１邐丙氨酸邐９．８９６７士１．２６０４邐８．５９００土１．４８８５邐０．１３３逡逑２邐［酸邐

３．４．２氨基酸檢測(cè)結(jié)果逡逑在所檢測(cè)的１７種氨基酸中，共發(fā)現(xiàn)１２種氨基酸在藥物暴露后出現(xiàn)差異逡逑（ｐ＜０．０５）（表７，圖６），，其中，丙氨酸、瓜氨酸、酪氨酸、甘氨酸、亮氨酸、逡逑鳥(niǎo)氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、絲氨酸、蘇氨酸和蛋氨酸１１種氨基酸水平在暴露逡逑后降低（ｐ＜０．０５），組l#酸水平在暴露后升高（ｐ＜０．０５）。丙氨酸、瓜氨酸、亮氨逡逑酸和苯丙氨酸４種氨基酸水平在藥物暴露后降低，其中瓜氨酸、亮氦酸和苯丙逡逑２８逡逑
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R184.3

【參考文獻(xiàn)】

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5 程t熛

本文編號(hào)：2641812