本文關(guān)鍵詞：內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激在十溴聯(lián)苯醚誘導(dǎo)SerW3細(xì)胞系凋亡的研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的體外研究十溴聯(lián)苯醚(decabromodiphenyl ether, BDE-209)暴露對小鼠睪丸支持細(xì)胞系(SerW3)的細(xì)胞凋亡損傷水平,初步討論BDE-209對SerW3細(xì)胞凋亡的影響和誘導(dǎo)凋亡的機(jī)制,為研究BDE-209致SerW3細(xì)胞凋亡的機(jī)制提供科學(xué)依據(jù)。方法培養(yǎng)小鼠睪丸支持細(xì)胞系(SerW3)之后暴露于BDE-209中,總共分為5個(gè)劑量組,分別為對照組(含有1%DMSO的培養(yǎng)基)和劑量組(劑量分別為10μg/ml BDE-209、20μg/ml BDE-209、30μg/ml BDE-209、40μg/ml BDE-209)染毒24h后,每組的細(xì)胞形態(tài)差異用倒置顯微鏡來觀察；MTT比色分析法檢測每組細(xì)胞存活率；乳酸脫氫酶細(xì)胞毒性檢測；Annexin V/PI雙染法和Hoechst染色的方法來檢測細(xì)胞凋亡水平；免疫印跡法檢測內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激發(fā)生中的caspasel2、GRP78和CHOP蛋白的表達(dá)。結(jié)果倒置顯微鏡觀察各處理組的SerW3細(xì)胞形態(tài),對照組的細(xì)胞生長狀態(tài)良好,胞體為寬大的柱狀或不規(guī)則形狀,有多個(gè)突起,胞核為卵圓形或不規(guī)則形,細(xì)胞鋪展成膜狀單層。染毒組中的細(xì)胞形態(tài)發(fā)生了變形現(xiàn)象且細(xì)胞膜有發(fā)泡現(xiàn)象,隨著染毒劑量的增加,突起變短,細(xì)胞空泡增加。在20μg/ml BDE-209、30μg/mlBDE-209、40μg/ml BDE-209染毒組的細(xì)胞發(fā)生了明顯的空泡、皺縮,之后脫落,最后消失。MTT法檢測SerW3細(xì)胞存活率的高低,不同染毒劑量作用24h后與對照組相比,染毒組細(xì)胞存活率有所下降,其中10μg/ml、20μg/ml、30μg/ml、40μg/ml劑量組差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；同一劑量BDE-209染毒,時(shí)間劑量效應(yīng)結(jié)果,與對照組相比,各染毒時(shí)間下(8h、16h、20h、24h、48h)的細(xì)胞存活率均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。乳酸脫氫酶細(xì)胞毒性檢測SerW3細(xì)胞,不同劑量染毒24h與對照組相比,染毒劑量組細(xì)胞乳酸脫氫酶顯著增加,表明隨著染毒劑量的增加,對細(xì)胞產(chǎn)生的毒性也逐漸增加,染毒劑量為10μg/ml、20μg/ml、 30μg/ml、40μg/ml、組與對照組相比,均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05); Annexin V/PI雙染法檢測細(xì)胞凋亡的結(jié)果為BDE-209染毒組(20μg/ml)與空白對照組比較,第二象限的早凋細(xì)胞和第三象限的晚凋細(xì)胞比例逐漸增加,第一象限的正常細(xì)胞比例反應(yīng)出了逐漸降低的趨勢。而BDE-209+4-PBA組與BDE-209染毒組比較,第二象限的早凋細(xì)胞比例減少,第三象限的晚凋細(xì)胞比例也減少,而正常細(xì)胞的比例則逐漸增加,其分布在第一象限中。Hoechst染色結(jié)果中表現(xiàn)為對照組的細(xì)胞核位于胞體的一側(cè),大小正常,呈不對稱分布,核仁清晰可見。而各劑量組中可以看出凋亡細(xì)胞數(shù)量越來越多,各組細(xì)胞空泡化嚴(yán)重,細(xì)胞體積偏小,明亮染色且鮮艷的染色質(zhì)凝聚,固縮和破碎的細(xì)胞核明顯。免疫印跡結(jié)果顯示：與對照組比較來說,40μg/ml劑量組caspase12蛋白表達(dá)增加,caspase 12/p-actin之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。30μg/ml劑量組與40μg/ml劑量組的CHOP蛋白與對照組比較后,其表達(dá)增加,CHOP/β-actin之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。染毒劑量為30μg/ml組、40μg/ml組與對照組之間GRP78蛋白表達(dá)增加,GRP78/β-actin之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論BDE-209染毒可以誘導(dǎo)SerW3細(xì)胞凋亡,并且會(huì)影響細(xì)胞形態(tài),降低細(xì)胞的存活率,并與染毒劑量呈現(xiàn)一定的時(shí)間和劑量效應(yīng)關(guān)系。而內(nèi)質(zhì)網(wǎng)抑制劑和BDE-209共處理后,凋亡細(xì)胞較BDE-209染毒組減少。目的體外研究中已證實(shí)BDE-209誘導(dǎo)小鼠睪丸支持細(xì)胞系(SerW3)凋亡,現(xiàn)體內(nèi)研究十溴聯(lián)苯醚對小鼠睪丸組織的凋亡情況。包括形態(tài)學(xué)電鏡觀察睪丸組織凋亡情況和Hoechst染色觀察組織凋亡情況。方法體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中,將52只雄性ICR小鼠,適應(yīng)性飼養(yǎng)一周,隨機(jī)方式分為4組,即玉米油組、低劑量組(100 mg/kg BW)、中劑量組(300 mg/kg BW)和高劑量組(500 mg/kg BW),每組13只,經(jīng)灌胃途徑染毒處理6周后脫頸處死,冰浴情況下分離臟器、稱重,然后保存在-80℃。電鏡觀察睪丸組織凋亡情況和Hoechst染色觀察組織凋亡情況。結(jié)果用透射電子顯微鏡觀察到對照組睪丸生精上皮細(xì)胞排列規(guī)則,核膜清晰,核仁明顯,支持細(xì)胞胞體呈寬大的柱狀或不規(guī)則狀,滑面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和線粒體較多,細(xì)胞核呈卵圓形。低劑量組(100μg/ml BDE-209處理組)支持細(xì)胞超微改變不明顯,但能看到輕微核染色質(zhì)濃縮。中劑量組(300μg/ml BDE-209處理組)支持細(xì)胞數(shù)量減少,部分支持細(xì)胞線粒體空泡化、核染色質(zhì)邊集。而高劑量組(500μg/ml BDE-209處理組)變化明顯,部分受損嚴(yán)重的細(xì)胞可見核染色質(zhì)凝聚,核膜溶解,核碎裂等征象。Hoechst染色結(jié)果可看出對照組細(xì)胞核正常大小,位于胞體的一側(cè),呈不對稱分布,核仁清晰可見。各劑量組按照隨著染毒濃度的加深,凋亡細(xì)胞數(shù)量增多,各組細(xì)胞空泡化嚴(yán)重,細(xì)胞體積偏小,明亮染色且鮮艷的染色質(zhì)凝聚,固縮和破碎的細(xì)胞核明顯。結(jié)論BDE-209染毒可以使青春期小鼠的睪丸組織發(fā)生凋亡現(xiàn)象。
【關(guān)鍵詞】：十溴聯(lián)苯醚 SefW3細(xì)胞 細(xì)胞凋亡 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激 十溴聯(lián)苯醚 青春期小鼠 睪丸 凋亡
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R114
【目錄】：

• 英文縮略詞表5-6
• 一、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激在十溴聯(lián)苯醚誘導(dǎo)SerW3細(xì)胞系凋亡的研究6-40
• 摘要6-9
• Abstract9-11
• 前言11-13
• 材料與方法13-22
• 結(jié)果22-32
• 討論32-35
• 參考文獻(xiàn)35-40
• 二、十溴聯(lián)苯醚暴露誘導(dǎo)青春期雄性ICR小鼠睪丸組織凋亡情況的研究40-57
• 摘要40-42
• Abstract42-44
• 前言44-45
• 材料與方法45-48
• 結(jié)果48-51
• 討論51-53
• 結(jié)論53
• 參考文獻(xiàn)53-57
• 附錄57-58
• 致謝58-59
• 綜述59-76
• 參考文獻(xiàn)66-76

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7 管

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