本文關(guān)鍵詞：二氧化硅刺激的離體A549細(xì)胞AQP-1、AQP-4表達(dá)研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《華北理工大學(xué)》 2015年

二氧化硅刺激的離體A549細(xì)胞AQP-1、AQP-4表達(dá)研究

張芳  

【摘要】：目的研究二氧化硅(Si O2)刺激的人II型肺泡上皮細(xì)胞系A(chǔ)549細(xì)胞所構(gòu)造的矽肺早期急性肺損傷模型中水通道蛋白1(AQP-1)和水通道蛋白4(AQP-4)的表達(dá)及意義。方法1將培養(yǎng)的生長(zhǎng)良好的對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期人II型肺泡上皮細(xì)胞系A(chǔ)549細(xì)胞分為對(duì)照組、0.5、1.0、2.0、4.0、8.0 h染塵組和抑制劑組,各染塵組分別以質(zhì)量濃度為50mg/L的Si O2混懸液刺激0.5、1.0、2.0、4.0、8.0 h,抑制劑組先分別以濃度為200μmol/L的AQP-1抑制劑Hg Cl2孵育3min(即檢測(cè)AQP-1 m RNA相對(duì)表達(dá)水平的抑制劑組)或濃度為100μmol/L的AQP-4抑制劑TGN-020孵育2.0 h(即檢測(cè)AQP-4 m RNA相對(duì)表達(dá)水平的抑制劑組),再以質(zhì)量濃度為50mg/L的Si O2混懸液刺激1.0 h,另設(shè)不予任何處理的對(duì)照組;采用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Real-time PCR)法檢測(cè)AQP-1和AQP-4 m RNA的相對(duì)表達(dá)水平。2將A549細(xì)胞分為對(duì)照組、3.0、6.0、12.0、24.0 h染塵組和抑制劑組,各染塵組分別以質(zhì)量濃度為50mg/L的Si O2混懸液分別刺激3.0、6.0、12.0、24.0 h,抑制劑組先分別以濃度為200μmol/L的AQP-1抑制劑Hg Cl2孵育3min(即檢測(cè)AQP-1蛋白表達(dá)水平的抑制劑組)或濃度為100μmol/L的AQP-4抑制劑TGN-020孵育2.0 h(即檢測(cè)AQP-4蛋白表達(dá)水平的抑制劑組),再以質(zhì)量濃度為50mg/L的Si O2混懸液刺激6.0h,另設(shè)不予任何處理的對(duì)照組;分別采用免疫印跡法和免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測(cè)AQP-1和AQP-4的蛋白表達(dá)。3采用SPSS 19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,計(jì)量資料經(jīng)正態(tài)性檢驗(yàn)符合正態(tài)分布,以xˉ±s表示;多組組間均數(shù)比較采用單因素方差分析(Oneway ANOVA),均數(shù)間兩兩比較采用LSD法;以P0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果1 Real-time PCR法分析結(jié)果顯示:與對(duì)照組相比,Si O2刺激后A549細(xì)胞AQP1和AQP-4 m RNA相對(duì)表達(dá)水平均呈現(xiàn)先升高后逐漸下降的趨勢(shì),均于Si O2刺激1.0h達(dá)高峰(P0.01),于Si O2刺激8.0h趨于正常水平(P0.05)。2免疫細(xì)胞化學(xué)法示AQP-1和AQP-4于A549細(xì)胞的胞漿和胞核中均有表達(dá)。3免疫印跡法和免疫細(xì)胞化學(xué)法定量分析結(jié)果均顯示:與對(duì)照組相比,Si O2刺激后A549細(xì)胞AQP-1和AQP-4蛋白相對(duì)表達(dá)水平均呈現(xiàn)先升高后逐漸下降的趨勢(shì),均于Si O2刺激6.0h達(dá)高峰(P0.01),但于Si O2刺激24.0h后仍未下降至正常水平(P0.01)。4抑制劑組AQP-1和AQP-4 m RNA相對(duì)表達(dá)水平及蛋白表達(dá)水平均高于對(duì)照組,但均低于Si O2刺激相同時(shí)間的染塵組(P0.01)。結(jié)論Si O2刺激使A549細(xì)胞AQP-1和AQP-4的表達(dá)增高,AQP-1和AQP-4的特異性抑制劑可分別減弱Si O2刺激引起的AQP-1和AQP-4的表達(dá)增高,推斷AQP-1和AQP-4可能參與了Si O2刺激引起的矽肺早期急性肺損傷的發(fā)生發(fā)展過(guò)程。

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：華北理工大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R135.2
【目錄】：

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前7條

1 郭亮;唐忠志;張端蓮;劉非凡;陳忠慶;程青;鄔明;;烏司他丁對(duì)急性肺損傷組織中水通道蛋白及Fas表達(dá)的研究[J];重慶醫(yī)學(xué);2009年22期

2 陸月明,孫波;急性肺損傷和急性呼吸窘迫綜合征臨床流行病學(xué)研究進(jìn)展[J];中華急診醫(yī)學(xué)雜志;2003年01期

3 劉錦源;張石江;金宇;王媚;解衛(wèi)平;王虹;;水通道蛋白1在肺腺癌組織中的表達(dá)和分布[J];南京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2008年04期

4 張s

本文編號(hào)：260900