本文關(guān)鍵詞：焦?fàn)t逸散物有機(jī)提取物對(duì)支氣管上皮細(xì)胞損傷的實(shí)驗(yàn)研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《華北理工大學(xué)》 2015年

焦?fàn)t逸散物有機(jī)提取物對(duì)支氣管上皮細(xì)胞損傷的實(shí)驗(yàn)研究

李紅麗  

【摘要】：目的焦?fàn)t逸散物(coke oven emission,COE)是在焦化生產(chǎn)過(guò)程中釋放的主要環(huán)境污染物,除顆粒物外,具有多種致突變和致癌性的多環(huán)芳烴。長(zhǎng)期暴露于COE容易引發(fā)機(jī)體產(chǎn)生慢性炎癥和腫瘤,而炎癥又可以促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)化、生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移。本研究應(yīng)用不同染毒劑量的焦?fàn)t逸散物有機(jī)提取物作用于16HBE細(xì)胞建立24h和5d細(xì)胞染毒模型。初步探討焦?fàn)t逸散物有機(jī)提取物對(duì)支氣管上皮細(xì)胞的損傷情況。為后續(xù)COE暴露人群的效應(yīng)性生物標(biāo)志物分析提供依據(jù)和線索。方法1 COE有機(jī)提取物作用于16HBE細(xì)胞建立24h染毒模型:將人支氣管上皮細(xì)胞系16HBE接種在含有10%的胎牛血清的MEM培養(yǎng)基中,在37℃和5%CO2的條件下傳代培養(yǎng)。當(dāng)細(xì)胞融合率達(dá)70%時(shí)用不同濃度的焦?fàn)t逸散物有機(jī)提取物處理24h,作用濃度依次為5mg/L、10mg/L、20mg/L,胎牛血清濃度為5%。同時(shí)設(shè)置0.1%DMSO的COE溶劑對(duì)照,每個(gè)劑量組均設(shè)置平行樣。2 COE有機(jī)提取物作用于16HBE細(xì)胞5d染毒模型建立:細(xì)胞培養(yǎng)條件、染毒物質(zhì)的劑量與24h模型相同,連續(xù)染毒5d,每次更換新的含COE有機(jī)提取物的培養(yǎng)基,每個(gè)劑量組均設(shè)立平行樣。3應(yīng)用MTT和乳酸脫氫酶(LDH)釋放實(shí)驗(yàn)評(píng)估COE對(duì)16HBE細(xì)胞的細(xì)胞毒性。4應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測(cè)16HBE細(xì)胞內(nèi)活性氧(ROS)的釋放水平。5應(yīng)用彗星實(shí)驗(yàn)檢測(cè)16HBE細(xì)胞的DNA損傷情況。6應(yīng)用懸液芯片Human Th17Cytokine Panel 15-Plex檢測(cè)上清液中IL-1β、IL-4、IL-6、IL-10、IL-17A、IL-17F、IL-21、IL-22、IL-23、IL-25、IL-31、IL-33、γ干擾素(interferon-γ,IFN-γ)、可溶性細(xì)胞表面分化抗原40配體(s CD40L)和腫瘤壞死因子α(TNF-α)的表達(dá)情況。7應(yīng)用蛋白免疫印跡方法檢測(cè)IκBα、P-IκBα、P65和P-P65蛋白表達(dá)水平。結(jié)果1 20mg/L COE有機(jī)提取物染毒16HBE細(xì)胞24h后,細(xì)胞存活率為89.38%(P0.05),LDH釋放量為147.68%(P0.05)。10 mg/L和20 mg/L COE有機(jī)提取物染毒16HBE細(xì)胞5d后,LDH釋放量分別為124.39%和149.64%(P0.01)。說(shuō)明COE有機(jī)提取物可以損傷16HBE細(xì)胞,染毒周期增加,毒性亦增加。2 COE有機(jī)提取物無(wú)論24h染毒還是5d染毒均能檢測(cè)到活性氧的釋放,隨著染毒劑量的增加而逐漸升高(P0.01)。在24h染毒的模型中,5mg/L低劑量組的細(xì)胞平均熒光強(qiáng)度相較對(duì)照組增加的倍數(shù)值比在5d模型中低。在24h模型中增加的倍數(shù)是14.47倍,5d模型中為17.85倍。3單細(xì)胞凝膠電泳結(jié)果顯示,細(xì)胞出現(xiàn)DNA損傷。20mg/L COE有機(jī)提取物染毒16HBE細(xì)胞24h后,尾部DNA百分含量增加83.51%(P0.01),Olive尾距指標(biāo)增加76.47%(P0.05)。20mg/L COE有機(jī)提取物染毒16HBE細(xì)胞5d后,尾部DNA百分含量與對(duì)照組相比較增加89.28%(P0.01),Olive尾距指標(biāo)值增加量為照組的117.07%(P0.01)。4COE有機(jī)提取物染毒16HBE細(xì)胞24h后,IL-10的表達(dá)量分別是1.25±0.54、1.39±0.13和(1.90±0.73)pg/m L,具有良好的劑量-效應(yīng)關(guān)系(r=0.98,P0.05)。IL-23僅在該模型的中、高劑量組表達(dá)。COE有機(jī)提取物染毒16HBE細(xì)胞5d后,IL-10在各劑量組的表達(dá)量依次為1.71±0.02、1.49±0.13和(2.82±0.16)pg/m L。IL-1β僅在該模型中表達(dá)。表明COE有機(jī)提取物影響16HBE細(xì)胞炎性因子的表達(dá)。5 COE有機(jī)提取物染毒24h對(duì)16HBE細(xì)胞中NF-κB通路蛋白表達(dá)的影響:IκBα蛋白表達(dá)量呈現(xiàn)下降趨勢(shì),在5 mg/L、10 mg/L、20 mg/L COE組下降量分別為對(duì)照組的26%、33%和56%(P0.05)。P-IκBα蛋白表達(dá)量在中、高劑量組上升顯著,在10mg/L COE組中的增加量為對(duì)照組的79%(P0.05),在20mg/L COE組的表達(dá)量是對(duì)照組的2.02倍(P0.05)。P-P65在10 mg/L COE組的表達(dá)量為對(duì)照組的3.84倍(P0.05),在20 mg/L COE處理組,其表達(dá)量為對(duì)照組的6.43倍(P0.05)。P65蛋白表達(dá)量無(wú)明顯變化。結(jié)論1 IL-23和IL-1β分別反映焦?fàn)t逸散物染毒24h和5d的炎性損傷,IL-10可以反映焦?fàn)t逸散物有機(jī)提取物染毒16HBE細(xì)胞24h和5d的炎性損傷。2炎性和免疫損傷可能是焦?fàn)t逸散物致癌的早期效應(yīng)改變。3焦?fàn)t逸散物有機(jī)提取物致16HBE細(xì)胞損傷與NF-κB信號(hào)活化有關(guān)。

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：華北理工大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R114
【目錄】：

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前7條

1 李敏菁;;肺部不同疾病對(duì)肺功能影響的研究[J];海南醫(yī)學(xué);2009年S5期

2 李潔,劉斌,李焰,婁超,婁皓;不同條件下細(xì)胞凍存效果比較[J];臨床口腔醫(yī)學(xué)雜志;2004年02期

3 何平中;何志軍;;焦化廠焦?fàn)t工人肺功能調(diào)查[J];大家健康(學(xué)術(shù)版);2014年11期

4 楊翠云;劉永定;;MTT方法評(píng)價(jià)微生物細(xì)胞活性的探討[J];水生生物學(xué)報(bào);2009年04期

5 趙琳娜;陳薛釵;鐘儒剛;;單細(xì)胞凝膠電泳技術(shù)檢測(cè)DNA損傷的方法及進(jìn)展[J];生物學(xué)雜志;2013年03期

6 王曉晨;吉愛(ài)國(guó);;NF-κB信號(hào)通路與炎癥反應(yīng)[J];生理科學(xué)進(jìn)展;2014年01期

7 孫世義;齊新周;郭新華;焦永濤;焦紅;;工作場(chǎng)所空氣中焦?fàn)t逸散物的檢測(cè)方法研究[J];中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志;2008年09期

【共引文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 陳勝杰;陳歡;胡凌俊;曹獻(xiàn)英;;MTT法在木醋桿菌活力檢測(cè)中的應(yīng)用[J];安徽農(nóng)業(yè)科學(xué);2012年16期

2 薛英;潘曉梅;黃炯;徐亞萍;劉宏;王彩霞;張莉;;不同條件下轉(zhuǎn)化BHK-21細(xì)胞凍存復(fù)蘇效果比較[J];現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技;2010年18期

3 許丹娜;許惠艷;凌澤繼;盧晟盛;謝莉萍;盧克煥;;食蟹猴耳部成纖維細(xì)胞體外培養(yǎng)體系的初步建立[J];安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào);2009年03期

4 孫小閔;伍津津;唐書(shū)謙;楊桂紅;楊濤;王兵強(qiáng);;人皮膚成纖維細(xì)胞動(dòng)態(tài)培養(yǎng)后在不同保存條件下的活力研究[J];重慶醫(yī)學(xué);2008年24期

5 楊宇航;王文玉;劉紅娜;劉東旭;時(shí)坤;李健明;杜銳;;細(xì)胞活力及細(xì)胞免疫力檢測(cè)方法的研究進(jìn)展[J];中國(guó)畜牧獸醫(yī);2013年06期

6 原銘貞;高廣媛;李波;董春玲;王司儀;梁豪君;劉相良;劉笑玎;;過(guò)氧化物酶6與肺部炎癥性疾病關(guān)系的研究進(jìn)展[J];吉林大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2014年01期

7 周巍;潘晶晶;馬佩宏;陳雨;袁嘉麗;;NF-κB信號(hào)通路在慢性阻塞性肺疾病中的研究進(jìn)展[J];甘肅中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2015年05期

8 汪志榮;高瓊;馬傳鑫;李燕妮;;MTT法測(cè)定大腸桿菌活菌數(shù)實(shí)驗(yàn)研究[J];環(huán)境科學(xué)學(xué)報(bào);2011年12期

9 羅立偉;;鋅對(duì)人牙周膜細(xì)胞增殖分化的影響研究分析[J];吉林醫(yī)學(xué);2009年23期

10 賈諫;李小娜;張嘉慧;張衛(wèi)娜;孔謙;孫永學(xué);;合成魚(yú)腥草素對(duì)雞淋巴細(xì)胞增殖作用的研究[J];黑龍江畜牧獸醫(yī);2014年09期

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前3條

1 溫建立;PM2.5導(dǎo)致氣道黏液高分泌的分子機(jī)制研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2013年

2 王芹;沉默XRCC2基因表達(dá)對(duì)大腸癌放射治療敏感性的影響[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2014年

3 周瑞;牛血清白蛋白—槲皮素納米顆粒的穩(wěn)定性和細(xì)胞攝入及吸收的研究[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前3條

1 張揚(yáng);甘草酸單銨鹽對(duì)煙草煙霧暴露下單核細(xì)胞糖皮質(zhì)激素抵抗的影響[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2014年

2 趙嵐;糖耐量受損大鼠認(rèn)知障礙與腦組織中炎癥因子表達(dá)的相關(guān)性研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2014年

3 黃強(qiáng);PM2.5中的礦物粉塵對(duì)V79細(xì)胞毒性研究[D];瀘州醫(yī)學(xué)院;2014年

【二級(jí)參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 管忠震,陳茹琴,徐光川,李宇紅,許立功,李龍?jiān)?劉敘儀,廖美琳,李金瀚;Gemcitabine治療晚期非小細(xì)胞肺癌的臨床研究[J];癌癥;1999年03期

2 陳燕,陳平,劉志軍,向旭東;慢性阻塞性肺疾病558例肺功能特征分析[J];中國(guó)醫(yī)師雜志;2004年02期

3 李志平,曾勉,謝燦茂,程?hào)|升;胸腔積液患者的肺功能表現(xiàn)[J];廣東醫(yī)學(xué);1999年03期

4 黃紹光,鄧偉吾;流量—容積曲線在阻塞性睡眠呼吸障礙中的應(yīng)用[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).呼吸系統(tǒng)分冊(cè);1986年04期

5 王占成,馬曉莉;TTC在食品菌落總數(shù)測(cè)定中的應(yīng)用[J];廣西預(yù)防醫(yī)學(xué);2003年01期

6 劉建紅,周孝貞,蔡保芳,梅芬娥,農(nóng)騰梅;睡眠呼吸暫停綜合征的肺通氣、殘氣功能檢測(cè)[J];廣西醫(yī)學(xué);1998年05期

7 王綿珍，王治明，羅捷，王曉容，詹顯全，，朱蓉;石棉工人肺功能5年前后比較[J];華西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);1996年01期

8 陳宏斌;徐永健;謝俊剛;;吸煙對(duì)肺功能和外周血T淋巴細(xì)胞IL-2mRNA的影響[J];臨床內(nèi)科雜志;2007年05期

9 胡云平,潘舉升,王曉江,周袁芬,陳波,殷征宇,金泰^

本文編號(hào)：260422