環(huán)境雌激素雙酚A對(duì)成年小鼠學(xué)習(xí)記憶和突觸結(jié)構(gòu)的影響
【圖文】：
?測(cè)定過(guò)程采用“雙盲法”。2.4.2突觸數(shù)密度測(cè)算突觸數(shù)密度(Nv)用立體計(jì)量學(xué)方法定量分析(陳玉翠,韓太真,沈建新,喬建天,1999)。選用的參照系均為單位體積(面積)的組織。所用公式如下：Nv=8ENa／π2(Na為單位面積中的突觸數(shù)目,E為PSD長(zhǎng)度倒數(shù)的平均值);Na=∑Nx／∑Ar(Nx為每張1萬(wàn)倍的照片上的突觸數(shù)目,Ar為每張照片的面積)2.4.3突觸界面結(jié)構(gòu)測(cè)量突觸間隙寬度取每個(gè)突觸上最大、最小和中間3個(gè)值的平均,PSD厚度為PSD的最大值,突觸界面曲率以突觸界面弧長(zhǎng)與弦長(zhǎng)之比表示,活性帶長(zhǎng)度以突觸小泡密集的區(qū)域長(zhǎng)度(圖1)。每組測(cè)算約90個(gè)突觸。2.5蛋白的Westernblot檢測(cè)2.5.1蛋白樣品的制備BPA暴露后3d,小鼠斷頭取腦(n=4),分離海馬組織后迅速放入液氮,在轉(zhuǎn)存于80℃低溫冰箱。按組織凈重(g)：裂解液體積(ml)=1:10的比例,加入相應(yīng)體積蛋白抽提劑勻漿,4℃800g離心10min,取上清,4℃12000g離心30min,棄上清,收集沉淀,加等量上樣緩沖液,沸水煮沸3~5分鐘變性,分裝,20℃保存。圖1突觸界面結(jié)構(gòu)超微結(jié)構(gòu)測(cè)量示意圖注：箭頭所示為突觸前活性帶長(zhǎng)度;突觸界面曲率=a/b=a/PoPn;SC—突觸間隙;SV—突觸囊泡
常狀態(tài)下雄鼠具有更好的空間學(xué)習(xí)記憶能力。多因素方差分析表明,BPA暴露×性別×訓(xùn)練時(shí)間(F(9,313)=2.58,p=0.007)、BPA暴露×性別(F(3,337)=2.81,p=0.040)、性別×訓(xùn)練時(shí)間(F(3,337)=3.34,p=0.020)的交互作用均顯著影響小鼠搜索平臺(tái)的平均距離。性別以及訓(xùn)練時(shí)間因素也顯著影響小鼠搜索平臺(tái)的平均距離(F(1,343)=15.03,p<0.001;F(3,341)=81.02,p<0.001)。BPA暴露顯著延長(zhǎng)雄鼠搜索平臺(tái)的平均距離(p<0.05),但對(duì)雌鼠沒有影響。表明長(zhǎng)期BPA暴露性別特異性地?fù)p傷成年雄鼠的空間記憶能力,并因此消除空間學(xué)習(xí)記憶的性別差異(圖3)。3.4被動(dòng)回避反應(yīng)電擊前,各組小鼠步下平臺(tái)的潛伏期沒有差異,均可在5sec內(nèi)跳下平臺(tái)。電擊后24h,正常小鼠步下平臺(tái)的潛伏期均顯著延長(zhǎng),并表現(xiàn)出性別差異(p<0.05,雄鼠>雌鼠)。雙因素方差分析表明,BPA暴露×性別的交互作用對(duì)電擊后步下潛伏期沒有影響,但BPA暴露以及性別因素均顯著影響雄鼠遭電擊后的步下潛伏期(F(3,89)=2.75,p=0.048;F(1,91)=4.03,p=0.046)。與同性別對(duì)照組相比,40mg/kg/dayBPA明顯縮短了雄鼠電擊后的步下潛伏期(p<0.05);表明長(zhǎng)期BPA暴露性別特異性地?fù)p傷成年雄鼠的被動(dòng)回避記憶能力,并因此消除其性別差異(圖4)。3.5突觸數(shù)密度和突觸界面結(jié)構(gòu)為了分析長(zhǎng)期BPA暴露對(duì)學(xué)習(xí)記憶行為影響與突觸形成和結(jié)構(gòu)的關(guān)系,本研究檢查了與學(xué)習(xí)記憶關(guān)系密切的海馬CA1區(qū)錐體細(xì)胞的突觸數(shù)密度和突觸結(jié)構(gòu)修飾。3.5.1BPA暴露對(duì)突觸數(shù)目的影響雙因素方差分析表明,BPA暴露×性別的交互作用、BPA暴露、以及性別因素對(duì)突觸數(shù)密度均有顯著影響(F(3,40)=4.35,p=0.01;F(3,40)=3.89,p<圖3雙酚A暴露對(duì)成年小鼠水迷宮搜索平臺(tái)距離的影響(M±SE)注：*p<0.05,**p<0.01,與同性別對(duì)照組相比;#p<0.05,與同劑量的雌性相比。
【參考文獻(xiàn)】
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【共引文獻(xiàn)】
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【二級(jí)參考文獻(xiàn)】
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