【摘要】：研究目的 為保護(hù)大氣臭氧層,具有氟利昂類(lèi)易揮發(fā)、不易燃等特點(diǎn)的1-BP(1-bromopropane,1-BP)逐漸成為氟利昂類(lèi)的替代品,因其在大氣中半衰期短,不會(huì)對(duì)臭氧層造成破壞,是全球目前廣泛應(yīng)用的有機(jī)溶劑和清洗劑。常用作脂肪、石蠟、樹(shù)脂等的溶劑,制造藥品、殺蟲(chóng)劑、香精、調(diào)味料等的中間體,精密電子儀器的清洗劑,脫垢劑以及噴霧粘合劑中的溶劑等。長(zhǎng)期無(wú)防護(hù)接觸1-BP可導(dǎo)致1-BP中毒性神經(jīng)病。隨著《蒙特利爾議定書(shū)》的執(zhí)行,國(guó)內(nèi)外對(duì)1-BP需求量大幅上升,1-BP的職業(yè)接觸人群和使用人群也逐年增加。1-BP急性毒性較低,加上目前無(wú)1-BP的職業(yè)接觸限值(occupational exposure limits, OEL),1-BP潛在的職業(yè)危害較大。 1-BP致周?chē)窠?jīng)毒性的機(jī)制尚不清楚。實(shí)驗(yàn)研究顯示1-BP染毒后導(dǎo)致動(dòng)物肝臟、大腦等器官中還原性谷胱甘肽(Glutathione, GSH)耗竭、氧化應(yīng)激。我們先前的研究也顯示1-BP引起氧化應(yīng)激,脂質(zhì)過(guò)氧化產(chǎn)物對(duì)大腦中蛋白質(zhì)的氧化修飾與1-BP對(duì)認(rèn)知功能的損傷相關(guān)。尤其是近年來(lái)一系列的研究提示人類(lèi)-些神經(jīng)退行性病變的發(fā)生與氧化應(yīng)激相關(guān)。因此,我們采用1-BP經(jīng)口慢性染毒,建立1-澳丙烷周?chē)窠?jīng)病的動(dòng)物模型,通過(guò)觀(guān)察周?chē)窠?jīng)行為學(xué)指標(biāo)的變化,判定1-BP對(duì)周?chē)窠?jīng)的損傷；采用相對(duì)特異、敏感的抗體檢測(cè)了1-BP染毒大鼠神經(jīng)組織中脂質(zhì)過(guò)氧化終產(chǎn)物4-羥基-2-壬烯醛(4-hydroxiynonenal,4-HNE)蛋白質(zhì)加合物、丙二醛(malondialdehyde, MDA)蛋白質(zhì)加合物、4-羥基-2-己烯醛(4-hydroxy-2-hexenal,4-HHE)蛋白質(zhì)加合物和丙烯醛(arcolein)蛋白質(zhì)加合物的含量變化,觀(guān)察1-BP神經(jīng)組織蛋白的氧化修飾情況；并通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)觀(guān)察了1-BP對(duì)4-HNE蛋白加合物形成的影響及劑量-效應(yīng)關(guān)系,以期為解釋周?chē)窠?jīng)的損傷機(jī)制提供線(xiàn)索。 研究方法 1、40只雄性Wistar大鼠,隨機(jī)分為低、中、高劑量組和對(duì)照組,每組10只；將1-BP溶于玉米油中,分別經(jīng)口給予200、400、800mg/kg的1-BP,對(duì)照組給予等體積玉米油,灌胃體積均為0.2mL/100g.bw,每日1次,每周5天,連續(xù)16周,建立1-溴丙烷經(jīng)口慢性染毒致周?chē)窠?jīng)病模型,并定期檢測(cè)步態(tài)、后肢抓力、后肢撐力、鼠尾痛覺(jué)等神經(jīng)行為學(xué)指標(biāo),觀(guān)察1-BP對(duì)周?chē)窠?jīng)系統(tǒng)的損傷。 2、斷頭處死大鼠,迅速分離大腦、脊髓和坐骨神經(jīng)組織,制備組織勻漿,15000g、4℃離心30min。利用Western blotting方法測(cè)定大鼠大腦、脊髓、坐骨神經(jīng)組織中的4-HNE、MDA、4-HHE、arcolein蛋白加合物相對(duì)含量的變化,觀(guān)察脂質(zhì)過(guò)氧化產(chǎn)物對(duì)大鼠神經(jīng)組織蛋白的氧化修飾水平。 3、1-BP對(duì)神經(jīng)組織4-HNE氧化修飾蛋白影響的體外實(shí)驗(yàn),將4-HNE、1-BP與空白組大鼠的大腦、脊髓、坐骨神經(jīng)組織蛋白共同孵育,觀(guān)察1-BP對(duì)4-HNE蛋白加合物形成的影響及劑量-效應(yīng)關(guān)系。 結(jié)果 1、1-BP對(duì)大鼠周?chē)窠?jīng)行為學(xué)指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果 高劑量組染毒8-16周、中劑量組染毒14、15、16周和低劑量組染毒15、16周大鼠的步態(tài)評(píng)分均明顯高于對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05,P＜0.01)。與對(duì)照組比較,高劑量組染毒9、12、14周大鼠后肢抓力明顯下降,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05,P＜0.01)；染毒16周時(shí),動(dòng)物后肢癱瘓。染毒16周時(shí),中、低劑量組大鼠后肢抓力分別為對(duì)照組的72.56%和91.22%,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01,P＜0.05)。染毒12、14、16周時(shí),高劑量組大鼠后肢撐力指數(shù)明顯高于對(duì)照組；染毒14、16周時(shí),中劑量組大鼠后肢撐力指數(shù)明顯高于對(duì)照組,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05,P＜0.01)。染毒8周高、中劑量組和染毒16周高、中、低劑量組血清中丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT)活力均明顯低于對(duì)照組,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。 2、1-BP染毒對(duì)大腦、脊髓、神經(jīng)組織中4-HNE、MDA、4-HHE、arcolein蛋白加合物水平的影響 1-BP染毒對(duì)4-HNE蛋白加合物表達(dá)水平的影響：與對(duì)照組相比,在大腦組織中,高劑量組大鼠4-HNE蛋白加合物增加了27.57%(P＜0.01),低、中劑量組分別增加了11.82%和20.94%,與對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。脊髓組織中,低、中、高劑量組分別為對(duì)照組的5.37%、16.82%、17.82%,與對(duì)照組相比均無(wú)顯著性差異。坐骨神經(jīng)組織中,低劑量組僅比對(duì)照組增加了17.83%,十、高劑量組確分別升高了64.64％(P＜0.01)、117.59%(P＜0.01)。 1-BP染毒對(duì)MDA蛋白加合物表達(dá)水平的影響：與對(duì)照組相比,在大腦組織中,高劑量組增加了179.38%(P＜0.01),低、中劑量分別增加了24.08%和30.14%,與對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。脊髓組織中,低、中、高劑量組分別為對(duì)照組的4.02%、33.48%、53.34%,與對(duì)照組相比增加不顯著。坐骨神經(jīng)組織中,低劑量組與對(duì)照組相差無(wú)幾,而中、高劑量組MDA蛋白加合物表達(dá)水平明顯升高,分別升高了46.03%(P＜0.01)、70.13%(P＜0.01)。 1-BP染毒對(duì)4-HHE蛋白質(zhì)加合物的水平的影響：與對(duì)照組相比,在大腦組織中,低劑量組與照組比較略有下降,但并無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；中劑量組與對(duì)照組相比增加不明顯；而高劑量組增加了16.40%(P＜0.01)。脊髓組織中,低、中、高劑量組分別為對(duì)照組的54.78%、44.21%、45.52%,但無(wú)顯著差異。坐骨神經(jīng)組織中,低劑量組僅比對(duì)照組升高37.26%,中、高劑量組4-HHE蛋白質(zhì)加合物明顯升高,分別升高了67.58%(P＜0.01)、59.34%(P＜0.01) 1-BP染毒對(duì)Arcolein蛋白質(zhì)加合物水平的影響：與對(duì)照組相比,在大腦組織中,低、中、高劑量組分別增加了7.97%(P＜0.05)、22.09%(P＜0.01)、29.99%(P＜0.01)。脊髓組織中,低、中、高劑量組分別為對(duì)照組的46.25%(P＜0.01)57.17%(P＜0.01)、77.28%(P＜0.01)。但坐骨神經(jīng)組織中,低、中、高劑量組分別降低38.65%(P＜0.01)、35.07%(P＜0.01)、49.05%(P＜0.01) 3、1-BP對(duì)4-HNE氧化修飾神經(jīng)組織蛋白影響的體外實(shí)驗(yàn) 在體外實(shí)驗(yàn)體系中,正常大鼠的大腦、脊髓、坐骨神經(jīng)組織中,幾乎檢測(cè)不到4-HNE蛋白質(zhì)加合物,將50uM的1-BP與正常大鼠的大腦、脊髓、坐骨神經(jīng)組織共同孵育后,實(shí)驗(yàn)顯示反應(yīng)體系中有少量的4-HNE蛋白加合物形成。將神經(jīng)組織中加入4-HNE共同孵育,反應(yīng)體系中可檢測(cè)到大腦、脊髓和坐骨神經(jīng)蛋白均能被4-HNE氧化修成形成4-HNE蛋白質(zhì)加合物。將不同濃度的1-BP與神經(jīng)組織和4-HNE共同孵育,結(jié)果顯示1-BP能夠增強(qiáng)4-HNE對(duì)神經(jīng)組織蛋白的修飾作用,與單純加入4-HNE相比,4-HNE+25uM1-BP、4-HNE+50uM1-BP、4-HNE+100uM1-BP反應(yīng)體系中,大腦組織中,4-HNE蛋白質(zhì)加合物分別增加了18.87%、51.01%(P＜0.01)、58.08%(P＜0.01)。脊髓組織中,4-HNE+25uM1-BP組、4-HNE+50uM1-BP組、4-HNE+100uM1-BP組增加了83.25%(P＜0.01)、116.11%(P＜0.01)、211.73%(P＜0.01)。在坐骨神經(jīng)組織中4-HNE+25uM1-BP組、4-HNE+50uM1-BP組、4-HNE+100uM1-BP組中分別增加了35.32%、72.21%(P＜0.01)、128.76%(P＜0.01)。 結(jié)論 1、神經(jīng)系統(tǒng)是1-BP毒作用的敏感靶器官,1-BP暴露可導(dǎo)致大鼠中毒性周?chē)窠?jīng)病。 2、1-BP染毒導(dǎo)致神經(jīng)組織中脂質(zhì)過(guò)氧化修飾蛋白表達(dá)增加, 3、1-BP能夠增強(qiáng)4-HNE對(duì)大鼠神經(jīng)組織蛋白質(zhì)的氧化修飾,并呈劑量-效應(yīng)關(guān)系。
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類(lèi)號(hào)】：R114

【參考文獻(xiàn)】

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1 王強(qiáng)毅;李衛(wèi)華;李潔斐;丁訓(xùn)誠(chéng);;低濃度1-溴丙烷對(duì)接觸者神經(jīng)系統(tǒng)的影響[J];環(huán)境與職業(yè)醫(yī)學(xué);2007年02期

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本文編號(hào)：2534142