【摘要】：目的:通過檢測出生前DEHP暴露對成年后大鼠甲狀腺形態(tài)學(xué)與甲狀腺功能的影響及下丘腦、腺垂體與HPT軸調(diào)控相關(guān)基因表達(dá)水平的影響,探討出生前DEHP暴露對成年后子代大鼠甲狀腺的干擾作用及可能的機(jī)制。方法:(1)將32只孕鼠按體重隨機(jī)分為四個劑量組:0 mg/kg(玉米油溶劑對照組)、2 mg/kg、10 mg/kg和50 mg/kg DEHP處理組,每個劑量組8只。按1mL/100g體重的灌胃體積,自大鼠孕14天至孕19天(G14至G19)進(jìn)行灌胃染毒。子代大鼠出生后第一天記為PND0。新生大鼠PND21斷乳后按性別分籠飼養(yǎng)。(2)將子代大鼠飼養(yǎng)至成年時(PND70),從每窩隨機(jī)選取雌、雄大鼠各1只(每個劑量組雌、雄各8只),用4%多聚甲醛將雄性大鼠和處于動情間期的雌性大鼠進(jìn)行心臟灌流固定,取大鼠甲狀腺組織,石蠟包埋后用Leica全自動輪轉(zhuǎn)式切片機(jī)上制備厚度為6μm的甲狀腺組織切片。HE染色后在顯微鏡下觀察甲狀腺組織形態(tài)學(xué)改變。(3)用相同的方法從每窩隨機(jī)選取雌、雄大鼠各1只(每個劑量組雌、雄各8只),將雄性大鼠和處于動情間期的雌性大鼠斷頭處死后取血,采用Luminex液相芯片技術(shù)對血清中TSH、總T4和總T3的濃度進(jìn)行測定。(4)取大鼠腦組織,制備成1mm厚的腦切片,根據(jù)大鼠腦立體定位圖譜,確定下丘腦室旁核(paraventricular nucleus,PVN)和弓狀核(Arcuate nucleus,ARC)的位置,用直徑為1.25mm的打孔針在兩個核區(qū)打孔取樣。采用Eastep Super RNA提取試劑盒提取下丘腦PVN核區(qū)、ARC核區(qū)及垂體的總RNA,使用cDNA第一鏈合成試劑盒進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄,實時熒光定量PCR檢測Trh、Trh受體、Tsh、Npy和Npy-Y1受體的基因表達(dá)水平。結(jié)果:(1)DEHP處理組大鼠甲狀腺組織形態(tài)學(xué)發(fā)生改變,與對照組相比,濾泡排列稍紊亂,濾泡上皮細(xì)胞數(shù)量增加,細(xì)胞質(zhì)出現(xiàn)泡沫樣變,濾泡腔直徑縮小。(2)雌性大鼠血清TSH濃度在各處理組間無統(tǒng)計學(xué)差異。雄性大鼠血清TSH濃度在各處理組間存在統(tǒng)計學(xué)差異,與對照組比較,10 mg/kg和50 mg/kg DEHP處理組血清TSH濃度降低(P0.05);雌性和雄性大鼠血清T4濃度在各處理組間無統(tǒng)計學(xué)差異;雌性大鼠血清中T3濃度在各處理組間存在統(tǒng)計學(xué)差異,與對照組相比,2mg/kg DEHP處理組血清T3濃度降低(P0.05)。雄性大鼠血清T3濃度在各處理組間無統(tǒng)計學(xué)差異。(3)雌性和雄性大鼠PVN核區(qū)Trh基因表達(dá)水平在各處理組間無統(tǒng)計學(xué)差異;雌性大鼠垂體Trh受體基因表達(dá)水平在各處理組間無統(tǒng)計學(xué)差異。雄性大鼠垂體Trh受體基因表達(dá)水平在各處理組間存在統(tǒng)計學(xué)差異,與對照組相比,2mg/kg和10mg/kg DEHP處理組Trh受體基因表達(dá)水平升高(P0.05)。(4)雌性和雄性大鼠垂體Tsh基因表達(dá)水平在各處理組間無統(tǒng)計學(xué)差異。(5)雌性大鼠ARC核區(qū)Npy基因表達(dá)水平在各處理組間無統(tǒng)計學(xué)差異。雄性大鼠Npy基因表達(dá)水平在各處理組間存在統(tǒng)計學(xué)差異,與對照組相比,50 mg/kg DEHP處理組Npy基因表達(dá)水平降低(P0.05);雌性和雄性大鼠PVN核區(qū)Npy-Y1受體基因表達(dá)水平在各處理組間無統(tǒng)計學(xué)差異。結(jié)論:(1)出生前DEHP暴露對成年后子代大鼠甲狀腺組織結(jié)構(gòu)及功能具有干擾作用。(2)出生前DEHP暴露對成年大鼠甲狀腺的干擾作用機(jī)制可能與干擾HPT軸Trh受體及下丘腦ARC核區(qū)參與調(diào)控TRH合成的Npy基因表達(dá)有關(guān)。(3)出生前DEHP對甲狀腺的干擾作用及作用機(jī)制可能具有性別差異。(4)出生前DEHP暴露對成年大鼠的影響具有低劑量效應(yīng)。
【圖文】：

天津醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文 結(jié)果結(jié)果2.1 出生前 DEHP 暴露對大鼠甲狀腺組織形態(tài)學(xué)的影響大鼠甲狀腺組織 HE 染色后鏡下可見，對照組甲狀腺濾泡排列有序，上皮細(xì)胞結(jié)構(gòu)正常，濾泡無增生或萎縮。與對照組相比，DEHP 處理組甲狀腺濾泡排列稍紊亂，甲狀腺濾泡上皮細(xì)胞數(shù)量增加，，細(xì)胞質(zhì)出現(xiàn)泡沫樣變，濾泡腔直徑縮小。見圖 2.1。

表 2.3 出生前 DEHP 暴露對大鼠血清 T3 濃度的影響（ x±s，ng/mL）劑量 n 雌性 n 雄性0 8 1.159±0.289 7 0.804±0.0402 8 0.706±0.165** 8 1.121±0.62910 8 0.929±0.506 8 1.229±0.59850 8 0.851±0.317 8 0.959±0.371注：**與對照組比較 P<0.01。.3 出生前 DEHP 暴露對大鼠 Trh 及其受體基因表達(dá)的影響.3.1 出生前 DEHP 暴露對大鼠下丘腦 PVN 核區(qū) Trh 基因表達(dá)的影響雌性大鼠下丘腦 PVN 核區(qū) Trh 基因表達(dá)水平在各處理組間無統(tǒng)計學(xué)差F=1.213, P=0.326）；雄性大鼠下丘腦 PVN 核區(qū) Trh 基因表達(dá)水平在各處理無統(tǒng)計學(xué)差異（F=0.208, P=0.890）。見圖 2.2。
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R114

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前2條

1 張華婧;出生前DEHP暴露對雌性子代大鼠生殖系統(tǒng)發(fā)育的影響[D];天津醫(yī)科大學(xué);2015年

2 張鈺;出生前DEHP暴露對子代雄性大鼠生殖系統(tǒng)發(fā)育和功能的影響[D];天津醫(yī)科大學(xué);2015年

本文編號：2518664