【摘要】：目的： 有文獻提示亞硫酸鈉具有致突變作用、脂質過氧化作用,一些在體實驗也顯示了亞硫酸鈉的肝損傷作用。本課題組在前期研究二氧化硫毒性時發(fā)現(xiàn)高濃度的二氧化硫可以引起肝細胞內脂滴數(shù)量的明顯增加。為了進一步研究亞硫酸鈉對肝臟脂肪代謝的干擾作用,本課題以人正常二倍體HL-7702肝細胞作為模型,檢測食品添加劑亞硫酸鈉作用肝細胞以后,肝細胞內與脂肪代謝密切相關的分子二酰甘油�；D移酶1(DGAT1)、載脂蛋白E (apoE)以及載脂蛋白B100(apoB100)在轉錄以及翻譯水平的變化,以期探討亞硫酸鈉誘發(fā)肝細胞脂肪積累效應及作用途徑。 方法： 以正常人二倍體肝細胞株HL-7702為研究對象,經(jīng)不同濃度的Na2SO3及陽性對照1.0mmol/L的油酸作用12h、24h、48h以后,采用酶聯(lián)免疫吸附測定法(ELISA)檢測細胞培養(yǎng)上清中載脂蛋白B100(apoB100)以及載脂蛋白E (apoE)的分泌情況；采用免疫沉淀法和Western Blotting法檢測肝細胞內DGAT1、apoB100和apoE的蛋白表達水平；采用定量聚合酶鏈反應法(Q-PCR)檢測肝細胞內DGAT1、apoE以及apoB100mRNA的表達水平。 結果： 1、Na2SO3對肝細胞內DGAT1mRNA表達水平的影響：染毒12h,2.5mmol/L、10.0mmol/L Na2SO3組肝細胞內DGAT1mRNA的表達水平明顯增加,與陰性對照組比較,差別有統(tǒng)計學意義(P0.05)；染毒24h和48h,僅10.0mmol/L Na2SO3染毒組肝細胞內DGAT1mRNA的表達水平明顯增加,與陰性對照組比較,差別有統(tǒng)計學意義(P0.05)。 2、Na2SO3對肝細胞內apoE mRNA表達水平的影響：染毒12h,2.5mmol/L、10.0mmol/L Na2SO3染毒組肝細胞內apoE mRNA的表達水平明顯增加,與陰性對照組比較,差別有統(tǒng)計學意義(P0.05)；染毒24h,僅10.0mmol/L Na2SO3染毒組肝細胞內apoE mRNA的表達水平明顯增加,與陰性對照組比較,差別有統(tǒng)計學意義(P0.05)。 3、Na2SO3對肝細胞內apoB100mRNA表達水平的影響：染毒12h,2.5mmol/L、10.0mmol/L Na2SO3染毒組肝細胞內apoB100mRNA的表達水平明顯增加,與陰性對照組比較,差別有統(tǒng)計學意義(P0.05)；染毒24h和48h后,僅10.0mmol/L Na2SO3染毒組肝細胞內apoB100mRNA的表達水平明顯增加,與陰性對照組比較,差別有統(tǒng)計學意義(P0.05)。 4、Na2SO3對肝細胞內DGAT1蛋白含量的影響：染毒12h和24h,僅10.0mmo/L Na2SO3處理組肝細胞內DGAT1蛋白表達明顯升高,與陰性對照組比較,差別有統(tǒng)計學意義(P0.05)；染毒肝細胞48h后,10.0mmo/L Na2SO3染毒組以及1.0mmol/L油酸組肝細胞內DGAT1蛋白表達均明顯增加,與陰性對照組比較,差別有統(tǒng)計學意義(P0.05)。 5、Na2SO3對肝細胞內apoE蛋白表達的影響：染毒12h和24h,各Na2SO3染毒組以及1.0mmol/L油酸組肝細胞內apoE的蛋白表達水平均明顯增加,與陰性對照組比較,差別有統(tǒng)計學意義(P0.05)；染毒48h,各Na2SO3染毒組肝細胞內apoE的蛋白表達水平明顯增加,與陰性對照組比較,差別有統(tǒng)計學意義(P0.05)。 6、Na2SO3對肝細胞內apoB100蛋白表達的影響：染毒12h、24h、48h,各Na2SO3染毒組肝細胞內apoB100的蛋白表達水平均有明顯增加,與陰性對照組比較,差別有統(tǒng)計學意義(P0.05)。 7、Na2SO3對肝細胞培養(yǎng)上清中apoB100含量的影響：染毒12h、24h、48h,各Na2SO3染毒組以及1.0mmol/L油酸組肝細胞外培養(yǎng)上清中apoB100的表達量均有明顯增加,與陰性對照組比較,差別有統(tǒng)計學意義(P0.05)； 8、Na2SO3對肝細胞培養(yǎng)上清中apoE含量的影響：染毒24h后,10.0mmol/L Na2SO3處理組以及1.0mmol/L油酸組肝細胞培養(yǎng)上清中apoE的含量明顯增加,與陰性對照組比較,差別有統(tǒng)計學意義(P0.05)；染毒48h后,0.1mmol/L以及10.0mmol/L Na2SO3染毒組肝細胞外培養(yǎng)上清中apoE的含量有明顯增加,與陰性對照組比較,差別有統(tǒng)計學意義(P0.05)。 結論： 1.一定劑量的Na2SO3可增加肝細胞內DGAT1的含量,促進肝細胞內甘油三酯的合成。 2.一定劑量的Na2SO3可增加肝細胞內apoE的蛋白表達量,但是對apoE的基因表達影響不明顯。表明apoE可能是通過受體途徑促進了肝細胞內甘油三酯的分泌外排。 3.一定劑量的Na2SO3可增加肝細胞apoB100的含量,從而可能會促進肝細胞極低密度脂蛋白(VLDL)的分泌外排,影響肝細胞的脂肪代謝。
【學位授予單位】：山西醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R114

【參考文獻】

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本文編號：2518135