【摘要】：研究背景狄氏劑屬于有機(jī)氯殺蟲劑，，可以對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)產(chǎn)生毒性作用。狄氏劑曾經(jīng)在我國(guó)廣泛使用，雖然至今已被禁用多年，但由于是一種持久性有機(jī)污染物，且有生物富集作用，在環(huán)境、食物和乳汁中仍然可檢測(cè)狄氏劑殘留。已有大量研究表明狄氏劑具有生殖毒性及內(nèi)分泌干擾作用，但是，對(duì)生命早期低劑量狄氏劑短期暴露可能影響神經(jīng)發(fā)育尚知之甚少。 研究目的在出生后大腦發(fā)育關(guān)鍵期，用不同濃度的低劑量狄氏劑經(jīng)腹腔注射給仔鼠染毒，觀察其一般發(fā)育狀況，海馬神經(jīng)元形態(tài)并分區(qū)計(jì)數(shù)神經(jīng)元數(shù)目；WesternBlotting檢測(cè)小鼠哺乳期、青春期和成年期海馬突觸相關(guān)蛋白水平，以期探討狄氏劑神經(jīng)發(fā)育毒性作用的細(xì)胞學(xué)機(jī)制。 研究方法ICR小鼠計(jì)劃受孕，出生后每窩小鼠經(jīng)調(diào)整為10只后，每窩隨機(jī)分為5組，分別為高劑量（20.0μg/kg）、中劑量（2.0μg/kg）和低劑量（0.2μg/kg）三個(gè)狄氏劑染毒組及二甲基亞砜（DMSO）溶劑對(duì)照組和生理鹽水（NS）對(duì)照組。在出生后第三天（PND3）進(jìn)行腹腔注射（2μl/10g）染毒，隔天1次，連續(xù)6次。實(shí)驗(yàn)期間觀察小鼠的體重、全身絨毛、開眼時(shí)間等一般生長(zhǎng)發(fā)育指標(biāo)及可能出現(xiàn)的體征。從PND92天開始，進(jìn)行6天程序的Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)測(cè)試小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力。于哺乳期（PND14）、青春期（PND36）和成年期（PND98）分別麻醉、心臟灌注、分離腦組織。左半腦經(jīng)多聚甲醛固定、梯度蔗糖脫水后，冰凍切片（20μm）， 40℃保存，Thionin染色觀察細(xì)胞形態(tài)并計(jì)數(shù)CA1和CA3區(qū)神經(jīng)元數(shù)量。右半腦快速分離海馬， 80℃保存，Western Blotting檢測(cè)海馬突觸前膜蛋白Synapsin I和突觸后膜蛋白PSD95水平。 結(jié)果實(shí)驗(yàn)期間小鼠注射部位未出現(xiàn)炎性反應(yīng)，各組小鼠的全身絨毛、活動(dòng)、神態(tài)等一般生長(zhǎng)發(fā)育指標(biāo)及體重增加未見異常。對(duì)成年期小鼠海馬分區(qū)神經(jīng)元計(jì)數(shù)發(fā)現(xiàn)，高劑量組雌性小鼠海馬CA1區(qū)、CA3區(qū)神經(jīng)元數(shù)目相對(duì)值在青春期就明顯減少，且持續(xù)至成年期；而高劑量組雄性小鼠CA1區(qū)、CA3區(qū)神經(jīng)元數(shù)目相對(duì)值則是在成年期出現(xiàn)明顯減少（P0.05）。Morris水迷宮測(cè)試發(fā)現(xiàn)，隨著訓(xùn)練天數(shù)的增加，成年期各劑量組小鼠的登臺(tái)潛伏期都明顯縮短，但高劑量狄氏劑染毒組小鼠第五天、第六天的登臺(tái)潛伏期有所延長(zhǎng)，在24h后探索實(shí)驗(yàn)中，高劑量雌性、雄性小鼠穿越原目標(biāo)平臺(tái)位置的次數(shù)減少（與溶劑對(duì)照組比較，皆P0.05）。對(duì)突觸標(biāo)志蛋白的檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，高劑量組雌性小鼠海馬Synapsin I蛋白水平在哺乳期即明顯下降，到青春期乃至成年期也未顯示恢復(fù)；青春期雌性小鼠海馬中PSD95蛋白水平呈現(xiàn)劑量依賴性下降（rPND36=－0.822, P0.05），持續(xù)到成年期（rPND98=－0.743, P0.05）。雄性小鼠各組間海馬Synapsin I蛋白水平無明顯差異，而高劑量組海馬PSD95蛋白水平在發(fā)育各階段（哺乳期、青春期和成年期）均明顯下降。 結(jié)論出生后早期接觸狄氏劑，會(huì)損害小鼠成年后的學(xué)習(xí)記憶能力，影響海馬CA3區(qū)神經(jīng)元的形態(tài)結(jié)果及細(xì)胞構(gòu)筑，且導(dǎo)致CA1及CA3區(qū)神經(jīng)元數(shù)目減少；學(xué)習(xí)記憶能力的下降可能主要因?yàn)榈沂蟿┙档土诵∈蠛ｑR突觸蛋白的表達(dá)，進(jìn)而影響突觸聯(lián)系的建立及突觸可塑性。提示早期短期接觸低劑量狄氏劑可能通過持久性損害海馬突觸聯(lián)系的構(gòu)建而影響學(xué)習(xí)記憶。
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【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R114

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2228073