【摘要】：MMS,又名甲磺酸甲酯,是一種典型的甲基化試劑。MMS作為重要的治療癌癥的化療藥物,能夠?qū)е录?xì)胞發(fā)生DNA雙鏈斷裂(DSB)。DNA雙鏈斷裂的形成是許多抗癌藥物發(fā)揮藥效的重要標(biāo)志。目前眾多研究證明,MMS能夠誘導(dǎo)不同細(xì)胞株中p53依賴性信號通路介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡的發(fā)生。然而,當(dāng)p53基因敲除時,細(xì)胞仍然表現(xiàn)出對MMS藥物相似的敏感性,從而證明在誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡過程中p53非依賴性信號通路的存在。 為了進(jìn)一步研究MMS誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡中p53非依賴性信號通路的具體機(jī)制,本實(shí)驗(yàn)建立了MMS誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ�。�?shí)驗(yàn)選取了2種細(xì)胞株,分別為p53基因缺失的H1299細(xì)胞和Hep3B細(xì)胞。并確定了MMS染毒的5種濃度,分別為50μM、100μM、200μM、400μM和800gM。實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明,在MMS染毒時間為12h,染毒濃度為50μM、100μM、200μM、400μM和800μM時,兩種細(xì)胞株中均出現(xiàn)γH2AX焦點(diǎn),即細(xì)胞發(fā)生不同程度的DNA損傷。在MMS染毒時間為12h,染毒濃度為400μM和800gM時,兩種細(xì)胞株均發(fā)生細(xì)胞凋亡。這一細(xì)胞凋亡的過程涉及到線粒體膜通透性的降低,Caspase2蛋白從細(xì)胞核到細(xì)胞質(zhì)的轉(zhuǎn)移,細(xì)胞色素C的釋放,以及Caspase9的剪切激活等。然而,MMS誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡不能夠激活p53家族成員TAp73以及DNp73的參與。綜上所述,MMS誘導(dǎo)的這兩種細(xì)胞凋亡為p53非依賴性以及p73非依賴性的信號通路介導(dǎo)的,而凋亡的發(fā)生與Caspase2從細(xì)胞核到細(xì)胞質(zhì)的轉(zhuǎn)移激活及線粒體通路有關(guān)。
[Abstract]:MMS, also known as methyl mesylate, is a typical methylation reagent. MMS is an important chemotherapeutic agent for cancer. It can lead to the formation of DNA double strand break (DSB). It is an important marker for many anticancer drugs to exert their efficacy. Many studies have shown that MMS can induce p53 dependent signaling pathway mediated apoptosis in different cell lines. However, when p53 gene was knocked out, the cells still showed similar sensitivity to MMS drugs, thus proving the existence of p53 independent signaling pathway in the process of inducing apoptosis. In order to further study the specific mechanism of p53 independent signaling pathway in MMS induced apoptosis, an experimental model of MMS induced apoptosis was established. Two cell lines, H1299 and Hep3B cells with p53 gene deletion, were selected. Five concentrations of MMS were determined, which were 50 渭 m, 100 渭 M, 200 渭 M, 400 渭 M and 800 g / m, respectively. The results showed that when the exposure time of MMS was 12 h and the concentration of 50 渭 M was 100 渭 M, 400 渭 M and 800 渭 M, the focus of 緯 H2AX appeared in the two cell lines, that is, DNA damage occurred in different degree. When the exposure time of MMS was 12 h and the concentration of 800gM was 400 渭 M, apoptosis occurred in both cell lines. This process of apoptosis involves the reduction of mitochondrial membrane permeability, the transfer of Caspase2 from nucleus to cytoplasm, the release of cytochrome C, and the activation of Caspase9. However, apoptosis induced by MMS could not activate TAp73 and DNp73 of p53 family members. In conclusion, the apoptosis induced by MMS is mediated by p53 independent and p73 independent signaling pathways, and the apoptosis is related to the activation of Caspase2 from nucleus to cytoplasm and mitochondrial pathway.
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號】：R114

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9 嚴(yán)t榯，

本文編號：2199547