【摘要】：目的通過慢病毒技術(shù)構(gòu)建miR-7-5p穩(wěn)定過表達(dá)的人淋巴母細(xì)胞TK6細(xì)胞株,探討miR-7-5p對氫醌誘導(dǎo)TK6細(xì)胞損傷的作用機(jī)制。方法 (1)構(gòu)建miR-7-5p過表達(dá)慢病毒載體,轉(zhuǎn)染TK6細(xì)胞,經(jīng)嘌呤霉素篩選獲得miR-7-5p穩(wěn)定過表達(dá)TK6細(xì)胞株(TK6-miR-7-5p細(xì)胞)和陰性空載體對照TK6細(xì)胞(TK6-NC細(xì)胞),采用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)鑒定構(gòu)建效果。(2)以終濃度為0和40μmol/L的氫醌分別處理TK6細(xì)胞、TK6-NC細(xì)胞和TK6-miR-7-5p細(xì)胞48 h后,采用CCK-8法檢測細(xì)胞存活率,采用流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞早期凋亡率;采用免疫印跡法檢測以終濃度為40μmol/L的氫醌處理的3種細(xì)胞中PARP-1和BRCA1蛋白的相對表達(dá)水平。結(jié)果 (1)成功篩選出穩(wěn)定過表達(dá)miR-7-5p的TK6細(xì)胞株;與正常TK6細(xì)胞比較,TK6-miR-7-5p細(xì)胞中miR-7-5p的相對表達(dá)水平升高約17倍(P0.01),但細(xì)胞形態(tài)未出現(xiàn)明顯改變。(2)予濃度為40μmol/L氫醌處理3種細(xì)胞后,與正常TK6細(xì)胞和TK6-NC細(xì)胞比較,TK6-miR-7-5p細(xì)胞存活率下降(P0.01),細(xì)胞早期凋亡率增加(P0.01),PARP-1和BRCA1蛋白相對表達(dá)水平均下降(P0.05)。結(jié)論 miR-7-5p可能通過抑制PARP-1和BRCA1的DNA損傷修復(fù)能力而導(dǎo)致氫醌誘導(dǎo)TK6細(xì)胞早期凋亡增加。
[Abstract]:Objective to construct a stable human lymphoblastocyte TK6 cell line with miR-7-5p overexpression by lentivirus technique and to explore the mechanism of miR-7-5p on the damage of TK6 cells induced by hydroquinone. Methods (1) miR-7-5p overexpression lentivirus vector was constructed and transfected into TK6 cells. MiR-7-5p overexpression TK6 cell lines (TK6-miR-7-5p cells) and negative empty vector control TK6 cells (TK6-NC cells) were obtained by purine mycin screening. The construction effect was evaluated by real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction. (2) the final concentration of hydrogen was 0 and 40 渭 mol/L. TK6-NC cells and TK6-miR-7-5p cells were treated with quinone for 48 h, respectively. CCK-8 assay was used to detect cell survival rate, flow cytometry was used to detect early apoptosis rate, and Western blot was used to detect the relative expression of PARP-1 and BRCA1 protein in three kinds of cells treated with hydroquinone at the final concentration of 40 渭 mol/L. Results (1) TK6 cell lines with stable expression of miR-7-5p were successfully screened, and the relative expression level of miR-7-5p in TK6-miR-7-5p cells was increased by about 17 times (P0.01) compared with that in normal TK6 cells. (2) after treated with 40 渭 mol/L hydroquinone at 40 渭 mol/L, the relative expression level of miR-7-5p in TK6-miR-7-5p cells was increased by 17 times (P0.01). (2) three kinds of cells were treated with 40 渭 mol/L hydroquinone. Compared with normal TK6 cells and TK6-NC cells, the survival rate of TK6-miR-7-5p cells decreased (P0.01), and the early apoptosis rate increased (P0.01). The relative expression of PARP-1 and BRCA1 protein decreased (P0.05). Conclusion miR-7-5p may induce early apoptosis of TK6 cells induced by hydroquinone by inhibiting DNA damage and repair ability of PARP-1 and BRCA1.
【作者單位】： 廣東醫(yī)科大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院廣東醫(yī)科大學(xué)環(huán)境與健康研究所東莞環(huán)境醫(yī)學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【基金】：廣東省普通高校重點(diǎn)平臺特色創(chuàng)新類項(xiàng)目(自然科學(xué)類)(2015KTSCX052) 廣東省自然科學(xué)基金(S2013010015153) 東莞市社會科技發(fā)展(一般)項(xiàng)目(2017507152413) 廣東醫(yī)科大學(xué)科研基金(M2016012)
【分類號】：R114

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2190657