發(fā)布時間：2018-06-15 06:51

  本文選題：全氟辛酸 + 完全抗原�。� 參考：《環(huán)境與職業(yè)醫(yī)學》2015年08期

【摘要】：[目的]基于抗原抗體特異性結合的原理,制備一種針對全氟辛酸(PFOA)小分子的特異性抗體,以用于PFOA的現(xiàn)場快速檢測。[方法]采用碳二亞胺法將PFOA與牛血清白蛋白(BSA)偶聯(lián),將此完全抗原作為包被抗原,用重鏈抗體噬菌體文庫進行篩選獲得陽性克隆,聚合酶鏈反應擴增重鏈抗體片段并與含有人抗體Fc段的質粒連接,采用原核表達系統(tǒng)進行抗體蛋白表達和純化,間接競爭酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)進行驗證。[結果]成功合成完全抗原PFOA-BSA,偶聯(lián)比為8。采用重鏈抗體庫進行4輪篩選,獲得7株陽性克隆,經(jīng)進一步的原核表達系統(tǒng)進行蛋白表達和純化,得到5種與預期大小相符的、含有人抗體Fc段的抗體蛋白。經(jīng)間接競爭ELISA方法初步檢測驗證,獲得1個可與PFOA特異結合的單域重鏈抗體。[結論]最終獲得針對PFOA的特異性抗體,有望用于建立快速檢測不同介質中PFOA的免疫學檢測方法。
[Abstract]:[objective] based on the principle of specific binding of antigen and antibody, a specific antibody against PFOA-perfluorooctanoate (PFOAA) was prepared for rapid in situ detection of PFOA. [methods] the PFOA was coupled with bovine serum albumin (BSA) by carbodiimide method, the complete antigen was used as the coated antigen, and the positive clones were obtained by the screening of heavy chain antibody phage library. The heavy chain antibody fragment was amplified by polymerase chain reaction (PCR) and ligated with plasmid containing FC fragment of human antibody. The antibody protein was expressed and purified by prokaryotic expression system and verified by indirect competitive enzyme linked immunosorbent assay (Elisa). [results] complete antigen PFOA-BSA was successfully synthesized with a coupling ratio of 8. Using the heavy chain antibody library for 4 rounds, 7 positive clones were obtained. After further prokaryotic expression system, five kinds of antibody proteins containing FC segment of human antibody were obtained according to the expected size. A single domain heavy chain antibody which can specifically bind to PFOA was obtained by indirect competitive Elisa. [conclusion] the specific antibody against PFOA was obtained, which could be used to establish an immunological method for rapid detection of PFOA in different media.
【作者單位】： 上海交通大學公共衛(wèi)生學院;上海交通大學基礎醫(yī)學院;南方人類基因組研究中心;
【基金】：科技部十二五支撐計劃(編號:2012BAK17B10-5)
【分類號】：R114

【參考文獻】

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【共引文獻】

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本文編號：2021104