本文選題：腸道內(nèi)源性共生菌 + TLRs��； 參考：《安徽醫(yī)科大學(xué)》2012年碩士論文

【摘要】：一般認為，腸道內(nèi)源性菌群與宿主存在共生關(guān)系，腸道內(nèi)源性菌群參與宿主的營養(yǎng)和能量平衡，對宿主免疫系統(tǒng)的進化和功能的維持發(fā)揮著積極的作用。反過來，宿主為微生物提供一個能夠維持其生存的環(huán)境，從這個環(huán)境中微生物能夠獲得其必須的營養(yǎng)物質(zhì)，保證其在宿主不同個體間的傳播和隱匿。已有研究表明，腸道內(nèi)源性菌群可以通過其組份激活Toll樣受體（Toll-like receptors，TLRs），減輕硫酸葡聚糖鈉（dextran sulfate sodium，DSS）對腸道粘膜造成的損傷，維持腸道的自穩(wěn)平衡。文獻報道發(fā)現(xiàn)，TLR4和TLR5受體激活具有防護電離輻射損傷作用。TLRs的配體來源主要為細菌的不同組分。作為電離輻射的特異性損傷之一，DNA損傷的修復(fù)在正常機體生命活動中處于一種動態(tài)變化過程。腸道菌群作為機體的共生物，伴隨生命的進程。本研究利用電離輻射誘發(fā)小鼠造血細胞DNA損傷為研究模型，探索腸道菌群中TLRs家族對DNA損傷和修復(fù)過程的影響和相關(guān)分子機制。 首先，利用廣譜抗生素清除小鼠腸道內(nèi)源性共生菌群，而后對小鼠進行2Gyγ射線照射，與單純照射小鼠相比，腸道菌群清除后進行照射的小鼠骨髓細胞染色體畸變率明顯增加；外周血細胞彗星電泳實驗顯示，反映DNA損傷的彗星尾距明顯增加，表明清除腸道菌群可以促進電離輻射導(dǎo)致的DNA損傷。為了進一步分析腸道菌群對DNA損傷的防護作用是否與TLRs受體相關(guān)，我們分析了腸道菌群清除小鼠血清中TLRs配體的變化。通過Elisa方法對腸道菌群清除小鼠體內(nèi)的TLRs含量進行檢測，發(fā)現(xiàn)血清中三種TLRs（TLR2/6、TLR4和TLR5）的配體Lipopeptede、LPS和Flagellin均有不同程度的下降，因此推測：TLRs配體的減少及由此而導(dǎo)致TLRs功能激活的減弱可能是導(dǎo)致其DNA損傷增加的直接原因。為了確定這些來源于細菌組份的TLRs配體是否具有減輕輻射誘發(fā)DNA損傷的作用，我們將這些配體分別回轉(zhuǎn)正常小鼠和腸道內(nèi)源性菌群清除小鼠，分別用CBLB502（Flagellin的功能同源物）、LPS、Lipopeptide激活TLR5、TLR4和TLR2/6后，發(fā)現(xiàn)能夠明顯減輕電離輻射誘發(fā)的DNA損傷（骨髓細胞染色體畸變率降低，外周血細胞彗星電泳彗星尾距縮短）。上述研究表明，腸道菌群通過激活TLRs家族（TLR2/6、TLR4和TLR5），減輕電離輻射誘發(fā)的小鼠造血細胞DNA損傷。 為了進一步探索腸道菌群通過TLRs受體激活調(diào)節(jié)電離輻射誘發(fā)造血細胞DNA損傷的分子機制，采用基因芯片方法篩選TLR5激活后骨髓細胞基因表達譜的變化情況。結(jié)果表明，與對照組相比，TLR5激活后，骨髓細胞中共有85個基因表達上調(diào)，2個基因表達下調(diào)。進一步挑選出4個參與DNA損傷修復(fù)的基因Apex2、Gadd45β、Sod2和Rad21，用Real Time-PCR方法對TLR5、TLR4和TLR2/6激活后4種基因的表達進行了驗證，發(fā)現(xiàn)這些基因的表達均有不同程度的上調(diào)。對腸道菌群清除小鼠骨髓細胞分析發(fā)現(xiàn)，上述4個基因表達均出現(xiàn)明顯下調(diào)。 本研究發(fā)現(xiàn)，腸道內(nèi)源性菌群可以通過其組份激活TLRs家族，，通過調(diào)節(jié)Apex2、Gadd45β、Sod2和Rad21等DNA損傷修復(fù)相關(guān)基因的表達，減輕電離輻射誘發(fā)的造血細胞DNA損傷。提示腸道內(nèi)源性共生菌群通過其組份對TLRs的識別和激活，或參與穩(wěn)態(tài)下機體自身的DNA損傷修復(fù)過程，從而降低宿主由DNA損傷所導(dǎo)致的癌癥等疾病風(fēng)險。
[Abstract]:In this study , it is found that the intestinal flora can activate Toll - like receptors ( TLRs ) by activating Toll - like receptors ( TLRs ) to reduce the damage to intestinal mucosa and maintain the self - stable balance of intestinal tract .

Firstly , the mouse intestinal endosymbionts were cleared by broad - spectrum antibiotics , and then the mice were irradiated with 2Gy 緯 - ray , and the chromosome aberration rate of bone marrow cells irradiated by intestinal flora was significantly increased compared with the simple irradiated mice .
In order to determine whether the TLRs ligands derived from the bacterial group were associated with TLRs receptors , it was speculated that the decrease of TLRs ligands and the decrease of TLRs ligands in mice induced by ionizing radiation could be a direct cause of increased DNA damage . The study indicated that the intestinal flora could reduce the DNA damage of hematopoietic cells induced by ionizing radiation by activating TLRs family ( TLR2 / 6 , TLR 5 ) and TLR5 .

In order to further explore the molecular mechanism of regulating the DNA damage of hematopoietic cells induced by ionizing radiation by TLRs receptor activation , the expression profile of bone marrow cells after activation of TLR5 was investigated by gene chip method . The results showed that the expression of four genes was up - regulated in bone marrow cells after TLR5 was activated . Four genes involved in DNA damage repair were selected to be up - regulated .

In this study , it was found that endogenous bacteria in intestinal tract can activate TLRs family by regulating the expression of related genes by regulating DNA damage such as Apex2 , Gadd45尾 , Sod2 and Rad21 , and reduce the DNA damage of hematopoietic cells induced by ionizing radiation . It is suggested that endogenous symbiotic bacteria in intestinal tract can recognize and activate TLRs by their components or participate in the process of DNA damage repair of organism under steady state , thus reducing the risk of diseases such as cancer caused by DNA damage .
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號】：R142

【共引文獻】

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本文編號：2001437