發(fā)布時間：2018-05-09 04:12

  本文選題：鄰苯二甲酸二正辛酯 + DNA損傷�。� 參考：《大連醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：目的:鄰苯二甲酸二正辛酯(di-n-octy1 phthalate,DNOP)是一種常見的塑化劑,其具有良好的可塑性,因此廣泛應(yīng)用于塑料制品中。塑料包裝產(chǎn)品中DNOP的急性毒性比較低,人體在一定劑量的攝入后往往沒有急性表現(xiàn),但其慢性毒性對人類的危害較大,研究發(fā)現(xiàn):DNOP可通過氧化應(yīng)激途徑引起胰島素抵抗,進而引發(fā)Ⅱ型糖尿病。吡咯喹啉醌(Pyrroloquinoline-quinone,PQQ)是人體中一種必不可少的生理調(diào)節(jié)劑,文獻表明PQQ對由細胞氧化應(yīng)激引發(fā)的疾病具有一定的治療效果。酒精是生活中常見的物質(zhì),其應(yīng)用范圍十分廣泛,在白酒中有大量的酒精成分,其毒性與細胞氧化應(yīng)激有關(guān)。近期,我國著名品牌白酒中發(fā)現(xiàn)了塑化劑,更提高了人們對酒精與DNOP聯(lián)合作用的關(guān)注程度。本課題選取大鼠胰島β細胞Ins-1為研究對象,研究DNOP對胰島β細胞Ins-1的毒性機制,并研究PQQ對Ins-1細胞的保護作用及酒精與DNOP的聯(lián)合作用。方法:本課題選取大鼠胰島β細胞Ins-1為研究對象,首先使用MTT毒性試驗測定不同濃度DNOP對Ins-1細胞的毒性作用,并確定其半數(shù)致死量。使用單細胞凝膠電泳試驗(SCGE)檢測DNOP對大鼠胰島β細胞Ins-1DNA的損傷作用及PQQ對Ins-1細胞DNA的保護作用,酒精的聯(lián)合作用。為得出DNOP對Ins-1細胞DNA損傷的相關(guān)機制及PQQ的保護作用,酒精的聯(lián)合作用,使用苯二醛(OPT)檢測細胞內(nèi)還原型谷胱甘肽(GSH)含量,使用吖啶橙(AO)檢測細胞內(nèi)溶酶體膜穩(wěn)定性,使用2’,7’-二氫二氯熒光素(DCFH)來檢測細胞內(nèi)活性氧(ROS),使用羅丹明123(Rhodamine 123)檢測細胞內(nèi)線粒體膜電位水平。得出Ins-1細胞的還原型谷胱甘肽(GSH)水平,溶酶體穩(wěn)定性水平,細胞內(nèi)活性氧(ROS)水平及線粒體膜電位水平。在預(yù)處理試驗中加入PQQ作為保護劑,觀察各項指標。加入酒精與DNOP,觀察DNOP與酒精的作用結(jié)果。試驗結(jié)果使用SPSS17.0統(tǒng)計軟件對試驗數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學(xué)分析。結(jié)果:在SCGE試驗中,DNOP單獨處理胰島β細胞Ins-1后,使Ins-1細胞的DNA鏈出現(xiàn)斷裂損傷并呈劑量依賴關(guān)系。隨著DNOP劑量增加,拖尾現(xiàn)象逐漸增強,尾長、尾距及尾DNA/頭DNA(%)與對照組相比差異具有顯著性;在PQQ預(yù)處理組中,胰島β細胞Ins-1的拖尾現(xiàn)象減弱,尾長、尾DNA/頭DNA(%)、尾距均小于同劑量DNOP單獨處理組;在酒精預(yù)處理組中,胰島β細胞Ins-1的拖尾現(xiàn)象更強,細胞的尾長、尾DNA/頭DNA(%)、尾距相對于DNOP單獨處理組明顯增強。在細胞內(nèi)還原型谷胱甘肽(GSH)試驗中,DNOP使Ins-1細胞的GSH水平降低;PQQ預(yù)處理組的GSH水平升高;相對于DNOP單獨處理組,酒精預(yù)處理組的GSH水平相對于同濃度DNOP單獨處理組降低。在細胞內(nèi)溶酶體膜穩(wěn)定性試驗中,DNOP單獨處理組的溶酶體膜穩(wěn)定性降低,PQQ預(yù)處理組的溶酶體膜穩(wěn)定性升高,酒精預(yù)處理組中的溶酶體膜穩(wěn)定性相對于同濃度DNOP單獨處理組有所降低。在細胞內(nèi)活性氧(ROS)試驗中,DNOP處理組的細胞內(nèi)ROS水平升高,PQQ預(yù)處理組的細胞內(nèi)ROS水平有所降低,而酒精預(yù)處理組的細胞內(nèi)ROS水平相對于同濃度DNOP處理組有所升高。在細胞內(nèi)線粒體膜電位測定試驗中,DNOP處理組細胞內(nèi)線粒體膜電位水平隨濃度增加而降低,PQQ預(yù)處理組的線粒體膜電位水平升高,而酒精預(yù)處理組的線粒體膜電位水平有所降低。結(jié)論:在DNOP引起Ins-1細胞DNA損傷的氧化應(yīng)激途徑中,DNOP可使細胞的ROS水平升高,GSH水平降低,從而對細胞產(chǎn)生氧化應(yīng)激損傷,PQQ可減少細胞內(nèi)ROS的數(shù)量,提高細胞的GSH水平,減少細胞氧化應(yīng)激的損傷,酒精可加重DNOP對Ins-1細胞的氧化應(yīng)激損傷。在DNOP引起Ins-1細胞DNA損傷的溶酶體—線粒體途徑中,DNOP可使Ins-1細胞的溶酶體膜穩(wěn)定性降低,并使細胞線粒體膜電位水平降低,PQQ可使Ins-1細胞的溶酶體膜穩(wěn)定性升高,線粒體膜電位水平上升,而酒精可使DNOP對溶酶體膜穩(wěn)定性及線粒體膜電位降低,從而加重DNOP對Ins-1細胞DNA的損傷作用。綜上所述,DNOP可通過氧化應(yīng)激途徑及溶酶體—線粒體途徑損傷Ins-1細胞的DNA,PQQ具有保護作用,酒精具有聯(lián)合作用。
[Abstract]:Objective : To study the effect of PQQ on insulin resistance induced by oxidative stress in rats and to study the effect of PQQ on insulin - 1 cells and to determine the effect of PQQ on insulin - 1 cells . In the experiment of intracellular reactive oxygen ( ROS ) , the level of intracellular ROS increased and the level of mitochondrial membrane potential of PQQ pretreatment group was decreased .

【學(xué)位授予單位】：大連醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R114

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 Zane R Gallinger;Geoffrey C Nguyen;;Presence of phthalates in gastrointestinal medications: Is there a hidden danger?[J];World Journal of Gastroenterology;2013年41期

2 Ruttapol Lertsirisopon;Satoshi Soda;Kazunari Sei;Michihiko Ike;Masanori Fuj ita;;Biodegradability of four phthalic acid esters under anaerobic condition assessed using natural sediment[J];Journal of Environmental Sciences;2006年04期

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本文編號：1864520