本文選題：電離輻射　切入點(diǎn)：輻射生物劑量計(jì)　出處：《中國(guó)疾病預(yù)防控制中心》2012年碩士論文

【摘要】：目的：輻射生物劑量計(jì)在核事故受照人員劑量估算及輻射生物效應(yīng)研究中具有重要的作用,被視為“金標(biāo)準(zhǔn)”的染色體畸變分析不能滿足大批量快速檢測(cè)的要求。因此,找到更為快速、高通量的生物劑量計(jì)成為放射生物劑量學(xué)的研究熱點(diǎn)。研究發(fā)現(xiàn),電離輻射能夠誘導(dǎo)轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)中的基因表達(dá)發(fā)生變化,能夠用實(shí)時(shí)熒光PCR進(jìn)行定量分析,有希望成為輻射生物劑量計(jì)。本文將在前期基因芯片研究的基礎(chǔ)上,1)探索受照后不同時(shí)間pig3和gdf15基因的劑量-效應(yīng)關(guān)系和時(shí)間響應(yīng)范圍；2)探索不同劑量率和品質(zhì)的射線對(duì)這兩種基因表達(dá)的影響；3)探索其他環(huán)境誘變劑對(duì)這兩種基因表達(dá)的影響。 方法： 1.探索低LET射線照射下pig3和gdf15基因的劑量-效應(yīng)關(guān)系：以劑量率為1Gy/min的60Coγ射線照射人淋巴細(xì)胞株AHH-1,劑量點(diǎn)分別為0、1、3、5、8、10、15和18Gy,照射后分別培養(yǎng)8h、12h、24h、48h、72h、5d和7d后收獲。 2.探索不同劑量率射線照射對(duì)pig3和gdf15基因表達(dá)變化的影響：以劑量率分別為0.5Gy/min、1Gy/min和2Gy/min的60Coγ射線照射人淋巴細(xì)胞株AHH-1,劑量點(diǎn)分別為3、5、8Gy,照射后培養(yǎng)48h后收獲。 3.探索高LET射線照射下pig3和gdf15基因的劑量-效應(yīng)關(guān)系：以劑量率為0.073Gy/min的252锎高通量中子源產(chǎn)生的射線照射人淋巴細(xì)胞株AHH-1,劑量點(diǎn)分別為0、0.4、0.8、1.2、1.6Gy,照后37℃恒溫培養(yǎng)48h后收獲。 4.探索環(huán)境誘變劑對(duì)pig3和gdf15基因表達(dá)變化的影響：在人淋巴細(xì)胞株AHH-1細(xì)胞培養(yǎng)的過程中分別加入H2O2和絲裂霉素C,同時(shí)設(shè)立8Gy60Coγ射線照射組、照射聯(lián)合H2O2給藥組和照射聯(lián)合絲裂霉素C給藥組,培養(yǎng)8h、12h和24h后收獲。 結(jié)果： 1.在轉(zhuǎn)錄水平上,60Coγ射線照射后8h～72h人淋巴細(xì)胞株AHH-1細(xì)胞pig3和gdf15基因在一定的劑量范圍內(nèi)(0-10Gy)呈現(xiàn)良好的劑量-效應(yīng)關(guān)系,并可擬合成為直線或二次方程,R2值較高,而照后5d兩種基因mRNA表達(dá)水平并未出現(xiàn)明顯的劑量-效應(yīng)關(guān)系,照后7d兩種基因mRNA表達(dá)水平與對(duì)照相比均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。 2.在翻譯水平上無論是用Western blotting還是ELISA方法檢測(cè),照后24h-7d人淋巴細(xì)胞株AHH-1中PIG3蛋白表達(dá)水平均在一定劑量范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的劑量-效應(yīng)關(guān)系,并可擬合成為直線或二次方程,R2值較高；由于GDF15蛋白是外分泌蛋白,在對(duì)細(xì)胞裂解液的檢測(cè)中卻并發(fā)現(xiàn)明顯的明顯的劑量-效應(yīng)關(guān)系。 3.252锎高通量中子源產(chǎn)生的射線照射后48h,人淋巴細(xì)胞株AHH-1中pig3和gdfl5基因mRNA和PIG3蛋白的表達(dá)水平均呈現(xiàn)良好的劑量-效應(yīng)關(guān)系,并可擬合成為二次方程,R2值較高。 4.無論是轉(zhuǎn)錄水平還是翻譯水平,pig3和gdf15基因在3、5、8Gy三個(gè)劑量點(diǎn)不同劑量率之間(0.5Gy/min、1Gy/min和2Gy/min)并無明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。 5.H2O2和絲裂霉素C對(duì)pig3和gdf15基因表達(dá)變化的影響,無論是在基因水平還是在蛋白水平,單純給藥組與對(duì)照組相比其PIG3和GDF15基因的表達(dá)量都明顯上升,但是8Gy照射組與給藥聯(lián)合照射組相比卻無明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。 結(jié)論： 1.通過Real-time PCR、Western blot和ELISA方法對(duì)pig3和gdf15基因進(jìn)行驗(yàn)證發(fā)現(xiàn)兩種基因在轉(zhuǎn)錄和/或翻譯水平具有良好的劑量-效應(yīng)關(guān)系,并可擬合成為直線或二次方程且R2值較高,具備了作為輻射生物劑量計(jì)的基本條件。 2.252锎高通量中子源產(chǎn)生的射線照射后48h,pig3和gdf15基因轉(zhuǎn)錄水平和pig3基因翻譯水平的表達(dá)改變具有良好的劑量-效應(yīng)關(guān)系。 3.pig3和gdf15基因轉(zhuǎn)錄水平和pig3基因翻譯水平的表達(dá)變化不受劑量率(0.5Gy/min、1Gy/min和2Gy/min)和一些環(huán)境誘變劑(H202和絲裂霉素C)的影響。
[Abstract]:Objective: radiation biodosimeter in nuclear accident radiation plays an important role in research on biological effects of radiation dose and personnel, is regarded as a "chromosome aberration analysis of gold standard" can not meet the rapid detection of large quantities of requirements. Therefore, to find a more rapid, high-throughput biological dosimeter has become the hotspot in radiation biodosimetry. The study found that ionizing radiation can induce the transcriptional regulatory network of gene expression changes, can do quantitative analysis by real-time PCR, to become the radiation biodosimeter. Based on preliminary gene chip, 1) to explore the response range of PIG3 and GDF15 genes in different time after exposure, the dose effect relationship and time; 2) explore the effects of different dose rate and quality of X-rays on the expression of the two genes; 3) to explore other environmental mutagens on the two kinds of gene expression. Ring.
Method錛，

本文編號(hào)：1719397