本文選題：腸病毒　切入點：膜吸附-洗脫法　出處：《揚州大學》2012年碩士論文

【摘要】：研究目的 針對腸道病毒(entero virus)、輪狀病毒(Rotavirus, RV)、腸道腺病毒(enteric adenovirus, EAdV)等水中常見腸病毒,建立相關熒光定量RT-PCR方法并進行多種水體的實際檢測應用。本課題的研究將為今后進一步了解各種水體中腸病毒的分布奠定基礎。 研究意義 水是人們生命活動的要素,人們要從各方面與水接觸如飲用水、洗滌用水、灌溉用水、工業(yè)用水等。隨著人口的增長,工農業(yè)的發(fā)展,人們的需用水量在迅猛增加。然而,由于水資源保護工作不力,環(huán)境水體的各種污染問題也日益嚴重,其中,水體的病毒污染也不容忽視。水體的病毒污染可能導致水源性疾病的爆發(fā),其中介水傳播性病毒主要為腸病毒,它來源于水體的糞便污染,通過糞-口途徑傳播,可引起感染性腹瀉、甲肝、戊肝等法定傳染病。目前,細菌總數、大腸菌群、耐熱大腸菌群和大腸埃希氏菌是飲用水細菌學衛(wèi)生指標,但隨著近幾年有關在細菌學指標合格的飲用水中檢出腸道病毒以及飲用水源受污染而導致病毒性腸道疾病暴發(fā)流行的報道不斷增多,表明細菌學指標并不能完全指示腸道病毒的去除,細菌學指標安全并不能代表飲用水的安全性。細菌具有細胞結構而病毒無細胞結構,病毒的非細胞屬性使它對環(huán)境壓力的耐受比細菌強。同時,在對消毒劑如氯的抗性上病毒強于細菌,因此,在常規(guī)水處理過程中,細菌的殺滅不能指示病毒的殺滅。當病毒一旦穿透水處理過程并存活于飲用水中,則表明病毒性水媒傳播的可能性存在。美國、法國在飲用水衛(wèi)生標準中均規(guī)定腸道病毒的檢出為零,而在我國,尚未將病毒檢出列入相關標準。因此,開展水中腸病毒的檢出工作對于今后我國飲用水衛(wèi)生標準的提高是具有深刻的現實指導意義。 研究方法 利用TaqMan探針技術建立腸道病毒通用型(enterovirus, EV-U)、脊髓灰質炎病毒Ⅰ型(poliovirus, PV I)、輪狀病毒(Rotavirus, RV)、腸道腺病毒(enteric adenovirus, EAdV)的熒光定量RT-PCR檢測方法,并通過制備各種病毒的標準品,對病毒進行準確定量；同時對該方法的特異性、靈敏度、重復性進行評估。通過PV Ⅰ加標實驗和實時熒光定量RT-PCR技術檢測水中的PV Ⅰ病毒,比較用膜吸附-洗脫法和載陽電荷濾料法富集水中病毒的回收率和效果。利用建立起的EV-U、PVI、RV、EAdV熒光定量RT-PCR方法和病毒富集方法,檢測北京盧溝橋污水處理廠二沉池出水、出廠水出水,天津海河水和衛(wèi)津河水中的病毒含量。 研究結果 本研究建立了基于TaqMan探針的實時熒光定量RT-PCR方法,能檢測腸道病毒、脊髓灰質炎病毒Ⅰ型、輪狀病毒、腸道腺病毒。該方法特異性為100%,靈敏度分別達到102copies/μl,重復性好。三種病毒富集方法對具有不同載量病毒的加標水樣分別進行富集并計算回收率,載陽電荷濾料法不僅回收率最高,而且效果穩(wěn)定,回收率在91%-94%；而膜吸附-洗脫法的回收率次之,回收率僅為70%-80%。 利用建立起的EV-U檢測方法檢測3月份北京盧溝橋污水處理廠二沉池出水、出廠水出水,天津海河水和衛(wèi)津河水,均為陰性；利用建立起的PV Ⅰ檢測方法檢測3月份北京盧溝橋污水處理廠二沉池出水、出廠水出水,天津海河水和衛(wèi)津河水,均為陰性；利用建立起的RV檢測方法檢測3月份北京盧溝橋污水處理廠二沉池出水、出廠水出水,天津海河水和衛(wèi)津河水,均為陰性；利用建立起的EAdV檢測方法檢測3月份北京盧溝橋污水處理廠二沉池出水和出廠水出水為陽性,天津海河水和衛(wèi)津河水為陰性。
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【學位授予單位】：揚州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2012
【分類號】：R123.1;X832

【參考文獻】

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本文編號：1716813