本文選題：甲型H1N1流感病毒　切入點(diǎn)：序列分析　出處：《浙江大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：研究目的:分析2013～2015年浙江地區(qū)甲型H1N1流感疫情和全基因組序列,探討甲型H1N1流感的流行病學(xué)特征和該病毒的分子特征。研究方法:對(duì)2013～2015年在浙江地區(qū)8家哨點(diǎn)監(jiān)測(cè)醫(yī)院納入的符合急性呼吸道感染(acute respiratory infection,ARI)定義的患者進(jìn)行流行病學(xué)資料調(diào)查,采集患者呼吸道標(biāo)本進(jìn)行流感病毒檢測(cè),分析甲型H1N1流感病毒陽性組與陰性組的臨床特征和流行病學(xué)特征。用RT-PCR的方法擴(kuò)增15個(gè)代表株的各片段基因,并對(duì)其測(cè)序,應(yīng)用DNAStar軟件拼接出各片段基因全序列。從GISAID或GenBank數(shù)據(jù)庫中下載中國各地區(qū)甲型H1N1流感病毒的HA和NA基因序列,采用MEGA6.0軟件對(duì)其進(jìn)行構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹,與疫苗株進(jìn)行比對(duì),分析重要氨基酸位點(diǎn)變化情況。利用DNAStar軟件對(duì)血凝素(HA)和神經(jīng)氨酸酶(NA)的B細(xì)胞優(yōu)勢(shì)抗原表位進(jìn)行預(yù)測(cè)。研究結(jié)果:1.2013～2015年浙江地區(qū)8家哨點(diǎn)醫(yī)院共納入7602例急性呼吸道感染病例,其中經(jīng)流感核酸檢測(cè)確診甲型H1N1流感病例779例(10.2%),浙江地區(qū)冬春季節(jié)甲型H1N1流感病例較多,每年5～8月甲型H1N1流感病例最少,其他時(shí)間呈現(xiàn)散發(fā)出現(xiàn)。慢性肺部疾病和孕婦的甲型H1N1流感陽性病例高于流感陰性病例,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2.甲型H1N1流感陽性病例常表現(xiàn)為白細(xì)胞總數(shù)正�；蚪档�,C反應(yīng)蛋白增高而天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、乳酸脫氫酶、肌酸激酶、肌酐和降鈣素原多數(shù)處于正常范圍內(nèi);X線/CT表現(xiàn)異常(81.7%)或肺部聽診異常(76.0%))。3.2013～2015年浙江地區(qū)甲型H1N1流感病毒株與WHO推薦疫苗株A/California/07/2009(H1N1)間的同源性為 96.5%～98.7%,浙江地區(qū)甲型 H1N1流感毒株彼此間的同源性為97.4%～100%。4.HA與NA基因上氨基酸位點(diǎn)變化分析:與疫苗株相比,15株代表株的HA蛋白有5個(gè)氨基酸位點(diǎn)(83、185、203、321、374)都發(fā)生了變異;NA蛋白有6個(gè)氨基酸位點(diǎn)(44、200、241、248、351、369)所測(cè)毒株都發(fā)生了變異。5.關(guān)鍵位點(diǎn)氨基酸分析顯示:3株代表株的HA受體結(jié)合位點(diǎn)發(fā)生了 Q223R突變;有1株在NA蛋白出現(xiàn)了 H275Y、V241I和N369K耐藥位點(diǎn)的同時(shí)變異;15個(gè)代表株和推薦疫苗株的M2蛋白均發(fā)生了 S31N耐藥位點(diǎn)突變;有1株P(guān)B1蛋白上出現(xiàn)了 G87E突變;15株P(guān)A蛋白都發(fā)生了 V100I的突變;15代表株和疫苗株NS1蛋白均發(fā)生P42S、V149A變異。6.潛在糖基化位點(diǎn)分析:與疫苗株相比,有5株HA蛋白糖基化位點(diǎn)增加了162位,有5株NA蛋白糖基化位點(diǎn)增加了 42位、有1株NA蛋白糖基化位點(diǎn)增加了 381位,還有部分毒株原有糖基化位點(diǎn)的缺失。7.抗原表位預(yù)測(cè)分析:利用DNAStar軟件預(yù)測(cè)出HA蛋白的B細(xì)胞優(yōu)勢(shì)抗原表位區(qū)段為:50-55,139-144,172-176,185-189,221-226,372-377,473-480,504-508。NA蛋白的B細(xì)胞優(yōu)勢(shì)抗原表位區(qū)段為:1-9,60-64,103-109,154-160,215-220,273-280,320-338,423-431。研究結(jié)論:1.浙江地區(qū)甲型H1N1流感的高發(fā)期為每年的冬春季節(jié),每年的5月到8月病例數(shù)最少,其他時(shí)間為散發(fā)呈現(xiàn)。2.甲型H1N1流感病毒的HA蛋白關(guān)鍵位點(diǎn)發(fā)生變異(如D222G等),可能與該病毒的跨種傳播密切相關(guān)。3.各基因的關(guān)鍵氨基酸位點(diǎn)分析顯示某些位點(diǎn)出現(xiàn)變異,這些變異可能與導(dǎo)致病毒毒力增加和該病毒流行相關(guān)。4.浙江地區(qū)甲型H1N1流感病毒株對(duì)離子通道抑制劑(金剛烷胺、金剛乙胺)都耐藥,但也發(fā)現(xiàn)對(duì)奧司他韋耐藥(NA蛋白中的H275Y變異)的病毒株。
[Abstract]:Objective : To investigate the epidemiological characteristics of influenza A ( H1N1 ) influenza A / H1N1 ) in Zhejiang region from 2013 to 2015 and to investigate the molecular characteristics of influenza A ( H1N1 ) influenza A / California / 07 / 2009 ( H1N1 ) . Conclusion : 1 . The epitope of influenza A ( H1N1 ) in Zhejiang region is : 50 - 55 , 139 - 144 , 172 - 176 , 185 - 189 , 221 - 226 , 372 - 377 , 473 - 480 , and 423 - 431 .

【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R511.7;R181.3
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本文編號(hào)：1709612