本文選題：蝙蝠　切入點：病原　出處：《第三軍醫(yī)大學》2017年碩士論文

【摘要】：蝙蝠是數(shù)量僅次于嚙齒類動物的翼手目(Chiroptera)類哺乳動物,共包含19個科962種,在全球范圍內(nèi)廣泛分布。蝙蝠攜帶病原種類繁多,其中檢測到病毒137種,涉及人畜共患病病毒61種。值得注意的是這其中包括一些對人高致病性的病毒,如SARS樣冠狀病毒(SARS-like coronavirus)、埃博拉病毒(Ebola virus)、馬爾堡病毒(Marburg virus)、狂犬病毒(Rabies virus)、登革病毒(Dengue virus)等。近期研究結果表明一些新病毒正陸續(xù)從蝙蝠體內(nèi)被發(fā)現(xiàn),包括肝炎病毒(Hepatitis virus)、呼腸孤病毒(Retrovirus)、博卡病毒(Bocavirus)、圓環(huán)病毒(Circovirus)、星狀病毒(Astrovirus)等均發(fā)現(xiàn)一些新的種。2003年的“非典”疫情,共造成全球8,000多人感染,至少800人死亡,使冠狀病毒在全球范圍內(nèi)引起關注。2014年西非的埃博拉疫情,導致6,388人喪生,確診或疑似感染病例17,942個。2016年阿根廷的登革病毒疫情,造成15,000人感染。引發(fā)這幾次疫情的病原有一個共同的動物宿主——蝙蝠。因此,蝙蝠作為自然界貯存病原的巨大病原庫,引起了越來越多科研工作者的關注。病毒宏基因組學是在宏基因組學理論基礎上,結合傳統(tǒng)病原檢測技術新興的學科分支,其應用迅速展示出巨大的優(yōu)越性,尤其是在新發(fā)病毒的發(fā)現(xiàn)和預警方面,突破了傳統(tǒng)方法依賴病毒保守基因序列的局限性。本研究基于病毒宏基因組學策略,系統(tǒng)分析2015年7-8月從我國東南沿海部分地區(qū)共收集的5種210只蝙蝠。對采集的蝙蝠的腸和肺組織進行高通量測序,對測序結果進行分類整理,發(fā)現(xiàn)獲得的序列信息共涉及38個病毒科。其中包括16個脊椎動物病毒科、4個植物病毒科、5個昆蟲病毒科。感染脊椎動物的病毒包括冠狀病毒科(Coronaviridae)、腺病毒科(Adenoviridae)、皰疹病毒科(Herpesviridae)、雙小RNA病毒科(Picornaviridae)、逆轉錄病毒科(Retroviridae)、非洲豬瘟樣病毒病毒科(Asfarviridae)、星狀病毒科(Astroviridae)、杯狀病毒科(Caliciviridae);圓環(huán)病毒科(Circoviridae)、肝炎病毒科(Hepeviridae)、乳頭瘤病毒科(Papillomaviridae)、細小病毒科(Parvoviridae)、呼腸孤病毒科(Retroviridae);黃病毒科(Flaviviridae)、痘病毒科(Poxviridae)和披膜病毒科(Togaviridae)。通過序列分析比較發(fā)現(xiàn),不同地區(qū)和不同蝙蝠種類在注釋到的病毒種類、序列方面存在同源性和豐度差異。初步掌握了東南沿海部分地區(qū)蝙蝠攜帶病毒的生態(tài)學狀況,為下一步驗證工作的開展提供了方向。根據(jù)宏基因組注釋信息,選取了圓環(huán)病毒、博卡病毒、軟腐病毒等設計簡并引物,應用特異性RT-PCR檢測方法,獲取了上述病毒在蝙蝠體內(nèi)和不同地域的攜帶和分布情況。結果顯示在舟山、岱山、長樂、連江蝙蝠體內(nèi)各檢測到1株圓環(huán)病毒,分別命名為Bt CV-ZS62、Bt CV-DS13、BtCV-CL6、BtCV-LJ22;在岱山蝙蝠體內(nèi)檢測到2株博卡病毒,命名為:Bt Bov-DS9和Bt Bov-DS10;在廈門蝙蝠體內(nèi)檢測到2株軟腐病毒,命名為BtIFA-XM9和BtIFA-XM10�；诤昊驕y序注釋信息,借助已知同源序列保守區(qū)設計系列簡并套式引物,經(jīng)反向PCR擴增、序列測定和拼接,進一步獲得了其中4株圓環(huán)病毒的全基因序列(1,873bp、1,910bp、2,051bp、1,806bp)和1株博卡病毒的大部分序列(3,921bp)。依據(jù)國際病毒分類委員會(International Committee on Taxonomy of Viruses,ICTV)關于圓環(huán)病毒新種的判定標準,初步判斷BtCV-ZS62、BtCV-DS13、Bt CV-CL6、BtCV-LJ22是四種新的蝙蝠圓環(huán)病毒,屬于圓環(huán)病毒科,圓環(huán)病毒屬。根據(jù)ICTV關于博卡細小病毒新種的判定標準,初步判斷Bt Bov-DS10是一株全新的博卡細小病毒。在獲得上述病毒基因組信息基礎上,選取圓環(huán)病毒、博卡病毒進行重組結構蛋白制備和血清流行病學初步分析,選擇結構蛋白Bt BOV-DS10-NP和Bt CV-DS13-Cap進行原核表達和純化,探索從血清學水平初步驗證蝙蝠攜帶病毒情況,以期完善病毒感染的流行病學證據(jù)鏈。我國蝙蝠種類豐富,有7科130種,分布廣泛,其生態(tài)圈與人類活動圈有較大交叉。因此開展我國蝙蝠攜帶病毒的自然本底調(diào)查對于預防新發(fā)傳染病具有重要的公共衛(wèi)生學意義。本研究借助病毒宏基因組生態(tài)調(diào)查方法,獲得東南沿海部分地區(qū)蝙蝠病毒宏基因組信息,并基于注釋信息進行特異性PCR篩查和序列擴增測定,能快速而準確獲得蝙蝠攜帶病毒譜并發(fā)現(xiàn)新病毒。該調(diào)查方法大大降低了病毒本底調(diào)查的盲目性,結合特定靶病毒蛋白的功能分析等研究,也較好拓寬了病毒生態(tài)調(diào)查的寬度和深度。
[Abstract]:In 2014 , there are more than 8 000 people infected with viruses such as SARS - like coronavirus ( SARS - like coronavirus ) , Ebola virus , Marburg virus , Rabies virus , virus , etc . BtCV - LJ22 is four new species of bats , belonging to the family of ring viridae and ring virus . According to ICTV ' s standard of judging the new species of Boka parvovirus , it is preliminarily determined that Bt Bov - DS10 is a completely new Boka parvovirus .

【學位授予單位】：第三軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R181.3

【參考文獻】

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1 王釗哲;宋春蓮;王皓然;胡超英;王廣龍;楊亮宇;;圓環(huán)病毒Cap蛋白的研究進展[J];上海畜牧獸醫(yī)通訊;2015年03期

2 趙玲;朱玲;郭萬柱;徐志文;漆信橋;李鳳勤;;豬圓環(huán)病毒2型Cap蛋白的表達及在ELISA中的初步應用[J];畜牧獸醫(yī)學報;2011年06期

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本文編號：1708548