本文選題：三氧化二砷　切入點(diǎn)：活性氧　出處：《中國(guó)藥理學(xué)與毒理學(xué)雜志》2015年05期

【摘要】：目的研究三氧化二砷(As2O3)對(duì)小鼠卵母細(xì)胞線粒體DNA(mt DNA)的氧化損傷作用及其作用機(jī)制。方法 1體外實(shí)驗(yàn)擠壓正常小鼠卵巢獲取卵母細(xì)胞,培養(yǎng)成熟后,分為As2O31和2μmol·L-1單獨(dú)處理組、N-乙酰半胱氨酸(NAC)5 mmol·L-1處理組、2,2,6,6-四甲基哌啶-1-氧基(Tempo)1 mmol·L-1處理組、As2O31或2μmol·L-1+NAC 5 mmol·L-1共處理組、As2O31或2μmol·L-1+Tempo 1 mmol·L-1共處理組,培養(yǎng)20 h后,收集成熟卵母細(xì)胞進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)指標(biāo)測(cè)定。2體內(nèi)實(shí)驗(yàn)雌性昆明小鼠ip給藥,分為As2O31和2 mg·kg-1染毒組、As2O31或2 mg·kg-1+NAC 200 mg·kg-1組,每日1次,連續(xù)60 d,椎脫臼處死取卵母細(xì)胞。2′,7′-二氯熒光黃雙乙酸鹽熒光染色檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)活性氧(ROS)水平;8-羥基脫氧鳥(niǎo)苷酶(8-OHd G)聯(lián)免疫反應(yīng)檢測(cè)提取mt DNA中8-OHd G含量;Western蛋白印跡法檢測(cè)DNA聚合酶γ(Polγ)和線粒體轉(zhuǎn)錄因子A(mt TFA)的蛋白表達(dá);β-半乳糖苷酶(β-Gal)報(bào)告基因檢測(cè)試劑盒檢測(cè)溶酶體活力。結(jié)果 1體外實(shí)驗(yàn)As2O3單獨(dú)處理組小鼠卵母細(xì)胞中ROS和8-OHd G含量升高,Polγ和mt TFA蛋白表達(dá)水平降低(P0.05);而As2O3與NAC或Tempo共處理組卵母細(xì)胞中ROS含量減少,8-OHd G水平降低,Polγ和mt TFA蛋白表達(dá)水平顯著上調(diào)(P0.05)。2體內(nèi)實(shí)驗(yàn)As2O3單獨(dú)處理組小鼠卵母細(xì)胞中ROS和8-OHd G含量升高,Polγ和mt TFA蛋白表達(dá)水平降低(P0.05);As2O3與NAC共處理組小鼠卵母細(xì)胞中ROS含量減少,8-OHd G水平降低,Polγ和mt TFA蛋白表達(dá)水平提高(P0.05)。As2O3單獨(dú)處理組體外培養(yǎng)的卵母細(xì)胞,β-Gal活力顯著提高(P0.05),而As2O3與NAC或Tempo共處理組β-Gal活力顯著下降(P0.05)。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)各處理組β-Gal活力無(wú)顯著差異。結(jié)論砷暴露可誘導(dǎo)小鼠卵母細(xì)胞大量生成ROS,抑制線粒體基因組修復(fù)與復(fù)制相關(guān)因子Polγ及mt TFA的表達(dá),同時(shí)改變?nèi)苊阁w活力,最終誘發(fā)mt DNA氧化損傷。
[Abstract]:Objective to study the oxidative damage of arsenic trioxide (as _ 2O _ 3) on mouse oocyte mitochondrial DNA(mt DNA and its mechanism. It was divided into two groups: As2O31 and 2 渭 mol L ~ (-1) alone treated with N- acetylcysteine and 5 mmol L ~ (-1). After 20 h culture, as _ 2O _ 31 or 2 渭 mol ~ (-1) NAC _ (5) mmol L ~ (-1) co-treated with as _ 2O _ 31 or 2 渭 mol ~ (-1) Tempo _ (1) mmol L ~ (-1) were co-treated with as _ 2O _ 31 or 2 渭 mol ~ (-1) NAC _ 5 mmol L ~ (-1). The adult oocytes were collected for further study. 2 female Kunming mice were given IP administration in vivo. The mice were divided into two groups: As2O31 and 2 mg kg-1 exposed to As2O31 or 2 mg kg-1 NAC 200mg kg-1, once a day. For 60 days, the oocytes were killed by vertebrae dislocation. The 8-OHd G content in mt DNA was detected by Western blot with fluorescence staining method of reactive oxygen species (Ros) and 8-OHd GG from mt DNA by fluorescence staining with fluorescein yellow diacetate. The protein expression of DNA polymerase 緯 -Pol 緯) and mitochondrial transcription factor A(mt TFAwere detected, and the lysosomal activity of 尾 -galactosidase (尾 -galactosidase) reporter gene assay kit was detected. Results 1in vitro As2O3 alone treated mouse oocytes with ROS and 尾 -galactosidase were detected for lysosomal activity. The expression of Pol 緯 and Mt TFA protein decreased in the oocytes treated with As2O3 and NAC or Tempo, while the level of ROS decreased in the oocytes treated with NAC or Tempo. The expression levels of Pol 緯 and Mt TFA in the oocytes treated with As2O3 or NAC or Tempo were significantly up-regulated in the P0.05n.2 group treated with As2O3 alone. Expression of ROS and 8-OHd G in mouse oocytes increased Pol 緯 and Mt TFA protein expression in mouse oocytes decreased ROS content in mouse oocytes treated with P0.05As2O3 and NAC, decreased 8-OHdG level, increased Pol 緯 and mt TFA protein expression level in mice oocytes treated with P0.05U 路As2O3 alone. The 尾 -Gal activity of oocytes cultured in vitro increased significantly, while the 尾 -Gal activity of As2O3 co-treated with NAC or Tempo decreased significantly. There was no significant difference in 尾 -Gal activity among the experimental groups in vivo. Conclusion arsenic exposure can induce the formation of large amounts of mouse oocytes. Ross. inhibit the expression of Pol 緯 and Mt TFA related to mitochondrial genome repair and replication. At the same time, the lysosome activity was changed and the oxidative damage of Mt DNA was induced.
【作者單位】： 蘭州大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院甘肅省環(huán)境生物監(jiān)測(cè)與修復(fù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(31300437) 甘肅省自然科學(xué)基金(1308RJZA139)~~
【分類號(hào)】：R114

【共引文獻(xiàn)】

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【二級(jí)參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1686671