本文選題：三鄰甲苯磷酸酯　切入點(diǎn)：小鼠睪丸間質(zhì)細(xì)胞　出處：《南昌大學(xué)》2016年碩士論文

【摘要】：目的:三鄰甲苯磷酸酯(TOCP)是三甲苯磷酸酯(TCP)的3種異構(gòu)體之一,普遍用在工業(yè)上及日常生活上。其除了可以引起機(jī)體出現(xiàn)神經(jīng)毒性癥狀之外,還可導(dǎo)致生殖毒性。本課題主要通過觀察TOCP對(duì)體外培養(yǎng)的小鼠睪丸間質(zhì)TM3細(xì)胞的影響,探究氧化應(yīng)激在TOCP誘導(dǎo)小鼠睪丸間質(zhì)細(xì)胞毒性中的作用及調(diào)節(jié)機(jī)制。方法:MTT法分別檢測(cè)TOCP和H2O2對(duì)小鼠睪丸間質(zhì)細(xì)胞活性的影響;ELISA法檢測(cè)TOCP對(duì)小鼠睪丸間質(zhì)細(xì)胞內(nèi)睪酮含量的影響;分別用RT-PCR和流式細(xì)胞儀檢測(cè)TOCP對(duì)小鼠睪丸間質(zhì)細(xì)胞周期的影響;分別用Annexin V-FITC/PI雙染色法以及Hoechst染色法檢測(cè)TOCP對(duì)小鼠睪丸間質(zhì)細(xì)胞凋亡的影響;分別用Western blot法和電鏡檢測(cè)TOCP和H2O2對(duì)小鼠睪丸間質(zhì)細(xì)胞自噬的影響;用活性氧試劑檢測(cè)盒分別檢測(cè)TOCP對(duì)小鼠睪丸間質(zhì)細(xì)胞氧化應(yīng)激的影響。結(jié)果:用不同濃度的TOCP(0,0.125,0.25,0.5 m M)作用于小鼠睪丸間質(zhì)細(xì)胞TM348 h,小鼠睪丸間質(zhì)細(xì)胞活性顯著下降(P0.05),其睪酮含量也顯著下降(P0.05);但細(xì)胞周期和凋亡并無明顯影響;Western blot結(jié)果顯示,細(xì)胞內(nèi)自噬蛋白LC3-II/LC3-I的比例明顯增加,Atg5和Beclin1的蛋白表達(dá)量也顯著增加;電鏡結(jié)果顯示,0.5 mM TOCP可顯著增加TM3細(xì)胞質(zhì)內(nèi)自噬小泡的數(shù)量;這些結(jié)果提示,TOCP可誘導(dǎo)小鼠睪丸間質(zhì)TM3細(xì)胞自噬。在用不同濃度的TOCP(0,0.125,0.25,0.5 m M)處理小鼠睪丸間質(zhì)TM3細(xì)胞48 h后,小鼠睪丸間質(zhì)細(xì)胞內(nèi)MDA的含量顯著增加(P0.05),而SOD、GSH和GSH-PX活性顯著下降(P0.05),提示TOCP可誘導(dǎo)小鼠睪丸間質(zhì)TM3細(xì)胞氧化應(yīng)激。用不同濃度的H2O2(0,100,200μM)作用于小鼠睪丸間質(zhì)細(xì)胞48 h后,TM3細(xì)胞活性顯著下降,細(xì)胞自噬顯著增加,提示氧化應(yīng)激可誘導(dǎo)TM3細(xì)胞自噬。而氧化應(yīng)激抑制劑N-乙酰半胱氨酸(N-acetyl-L-cysteine,NAC)可緩解TOCP對(duì)TM3細(xì)胞活性的抑制及自噬的誘導(dǎo)。結(jié)論:TOCP可抑制小鼠睪丸間質(zhì)TM3細(xì)胞活性并誘導(dǎo)其自噬,但對(duì)其細(xì)胞周期和凋亡無明顯影響;TOCP可誘導(dǎo)小鼠睪丸間質(zhì)TM3細(xì)胞氧化應(yīng)激;TOCP通過氧化應(yīng)激誘導(dǎo)小鼠睪丸間質(zhì)TM3細(xì)胞自噬。
[Abstract]:Objective: Trio-toluene phosphate (TTP) is one of the three isomers of TCPs, which is widely used in industry and daily life. In this study, we observed the effect of TOCP on the TM3 cells of mouse testis stromal cells cultured in vitro. To explore the role of oxidative stress in TOCP induced mouse testicular interstitial cytotoxicity and its regulatory mechanism methods the effects of TOCP and H2O2 on the activity of mouse testicular stromal cells were detected by TOCP method. The effect of testosterone content; RT-PCR and flow cytometry were used to detect the effect of TOCP on the interstitial cell cycle of mouse testis, and Annexin V-FITC/PI double staining and Hoechst staining were used to detect the effect of TOCP on the apoptosis of mouse testicular interstitial cells. The effects of TOCP and H2O2 on mouse testicular interstitial cell autophagy were detected by Western blot and electron microscope. The effects of TOCP on oxidative stress of mouse testicular interstitial cells were detected with reactive oxygen species test kit. Results: the activity of interstitial cells of mouse testis decreased significantly when different concentrations of TOC 0. 125 and 0. 25 0. 5 mm M were added to TM348 hs of mouse testicular interstitial cells. The testosterone content of P0.05 was also significantly decreased, but the cell cycle and apoptosis were not significantly affected by Western blot. The percentage of intracellular autophagy protein (LC3-II/LC3-I) increased significantly, and the protein expression of Atg5 and Beclin1 increased significantly, and the results of electron microscopy showed that 0.5 mm TOCP could significantly increase the number of autophagy vesicles in the cytoplasm of TM3. These results suggested that TOC could induce autophagy of mouse testis interstitial TM3 cells. After 48 hours of treatment with different concentrations of TOCP0 / 0.125 ~ 0.250.50mm / ml, the TM3 cells of mouse testis stromal cells were treated with TOC for 48 h. The content of MDA in the interstitial cells of mouse testis increased significantly, while the activities of GSH-PX and GSH decreased significantly, suggesting that TOCP could induce oxidative stress in the interstitial TM3 cells of mice testis. After 48 h of treatment with different concentrations of H2O2(0100200 渭 M, TOCP could induce oxidative stress in the interstitial cells of mice testis. The activity of TM3 cells decreased significantly. Autophagy increased significantly, These results suggest that oxidative stress can induce autophagy of TM3 cells, while N-acetyl-L-cysteine (NACN), an inhibitor of oxidative stress, can alleviate the inhibition of TM3 cell activity and autophagy induced by TOCP. Conclusion: TOC can inhibit the activity of TM3 cells and induce autophagy in mouse testis interstitial TM3 cells. However, there was no significant effect on the cell cycle and apoptosis. TOC could induce oxidative stress of TM3 cells in mouse testis. TOC induced autophagy of TM3 cells in mouse testis by oxidative stress.
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R114

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本文編號(hào)：1663011