本文選題：鎘　切入點：睪丸間質(zhì)細(xì)胞　出處：《安徽醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的以體外培養(yǎng)小鼠睪丸間質(zhì)細(xì)胞系TM3細(xì)胞為模型,研究鎘對TM3細(xì)胞的毒性作用,進而探討鎘對TM3細(xì)胞毒作用的分子機制。方法(1)給予不同濃度的CdCl_2(0μM,5μM,10μM,20μM,40μM)處理TM3細(xì)胞,分別孵育不同時間(4h,8h,12h,16h,24h),采用CCK-8法檢測各組細(xì)胞活力。(2)給予20μM CdCl_2處理TM3細(xì)胞不同的時間(4h,8h)后收集細(xì)胞及上清液,采用ELISA法測定細(xì)胞上清液中睪酮的水平,采用western blot和RT-PCR法檢測睪酮合成通路關(guān)鍵酶蛋白和m RNA的表達水平。(3)給予20μM CdCl_2處理TM3細(xì)胞不同的時間(4h,8h)后收集細(xì)胞,采用western blot和RT-PCR法檢測氧化應(yīng)激相關(guān)蛋白和m RNA的表達水平。(4)給予20μM CdCl_2處理TM3細(xì)胞不同的時間(4h,8h)后收集細(xì)胞,采用western blot和RT-PCR法檢測內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)蛋白和m RNA的表達水平。結(jié)果(1)不同濃度的鎘(0μM,5μM,10μM,20μM,40μM)處理4h后,5μM、10μM和20μM組細(xì)胞的存活率與同一時間點對照組比較沒有差異,40μM組細(xì)胞的存活率明顯低于同一時間點對照組(p0.01);不同濃度的鎘(0μM,5μM,10μM,20μM,40μM)處理8h后,5μM組細(xì)胞的存活率與同一時間點對照組比較略有降低,10μM、20μM和40μM組細(xì)胞的存活率與同一時間點對照組明顯降低(p0.01);不同濃度的鎘(0μM,5μM,10μM,20μM,40μM)處理12h、16h、24h后,各處理組細(xì)胞的存活率均低于同一時間,并具有明顯的劑量效應(yīng)關(guān)系(p0.01)。(2)給予20μM CdCl_2處理TM3細(xì)胞不同的時間(4h,8h),鎘處理組細(xì)胞上清睪酮含量明顯低于對照組睪酮含量(p0.01);鎘處理組TM3細(xì)胞的St AR、P450scc和17β-HSD m RNA的表達水平與對照組比降低(p0.05,p0.01),且顯著下調(diào)鎘處理組TM3細(xì)胞St AR、P450scc、3β-HSD、P45017α和17β-HSD的蛋白的表達水平(p0.05,p0.01)。(3)給予20μM CdCl_2處理TM3細(xì)胞不同的時間(4h,8h),顯著誘導(dǎo)鎘處理組TM3細(xì)胞HO-1蛋白和m RNA的表達水平,并具有明顯的時間效應(yīng)關(guān)系(p0.01);然而鎘處理對TM3細(xì)胞HO-2的蛋白表達沒有明顯的影響;鎘處理8h組SOD1、SOD2、SOD3、GSH-Px及CAT的m RNA表達水平與對照組的差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05,p0.01)。(4)給予20μM CdCl_2處理TM3細(xì)胞不同的時間(4h,8h),顯著性上調(diào)鎘處理組內(nèi)質(zhì)網(wǎng)分子伴侶GRP78蛋白和m RNA的表達,具有明顯的時間效應(yīng)關(guān)系(p0.01);此外,鎘顯著誘導(dǎo)GRP94 m RNA表達,也具有明顯的時間效應(yīng)關(guān)系(p0.05,p0.01),提示ATF6信號通路被激活。鎘處理顯著誘導(dǎo)TM3細(xì)胞PERK蛋白的磷酸化水平(p0.01);鎘處理明顯增加TM3細(xì)胞e IF2α蛋白的磷酸化水平,具有時間效應(yīng)關(guān)系(p0.05,p0.01);此外,CHOP的蛋白表達水平在鎘處理組也明顯增加,并且隨鎘處理的時間延長,誘導(dǎo)作用更加明顯(p0.01),提示PERK信號通路被激活。鎘處理誘導(dǎo)TM3細(xì)胞IRE1α蛋白的磷酸化水平,具有明顯的時間效應(yīng)關(guān)系(p0.05,p0.01);此外,鎘處理組JNK蛋白的磷酸化水平明顯高于對照組,也具有明顯的時間效應(yīng)關(guān)系(p0.01),提示IRE1信號通路被激活。結(jié)論(1)鎘處理能夠抑制TM3細(xì)胞的睪酮合成和分泌,鎘對TM3細(xì)胞睪酮合成的抑制作用可能與鎘下調(diào)睪酮合成酶m RNA和蛋白的表達有關(guān)。(2)鎘處理誘導(dǎo)TM3細(xì)胞發(fā)生氧化應(yīng)激和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激,氧化應(yīng)激和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激可能在鎘誘導(dǎo)的TM3細(xì)胞損傷中起重要作用。
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本文編號：1650442