發(fā)布時間：2018-03-17 21:03

  本文選題：缺血再灌注損傷　切入點：茶氨酸　出處：《復(fù)旦大學(xué)》2013年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的： L-茶氨酸(L-Theanine)是茶葉中一種特有的游離氨基酸,屬酰胺類化合物,有甜味,是茶葉中生津潤肺的主要成份。茶氨酸與谷氨酸結(jié)構(gòu)相似,Kakuda~[1]等用放射性標(biāo)記H原子示蹤方法發(fā)現(xiàn),茶氨酸能與中樞神經(jīng)系統(tǒng)中主要興奮性神經(jīng)遞質(zhì)谷氨酸的離子型受體(NMDA、AMPA、KA受體)結(jié)合,并產(chǎn)生生物學(xué)效應(yīng)。近年來茶氨酸對神經(jīng)損傷的保護作用越來越受到人們的關(guān)注,沈慧等探討了茶氨酸對腦缺血大鼠氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)的影響,本研究主要從茶氨酸對腦缺血模型大鼠單胺類神經(jīng)遞質(zhì)及PLC-γ1、谷氨酸受體GluR2mRNA表達的影響等方面進一步探討茶氨酸對腦缺血再灌注所致神經(jīng)損傷的保護作用機制。 方法： 1.建立反相高效液相色譜法(high performance liquid chromatography, HPLC)測定大鼠腦內(nèi)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)多巴胺(dopamine, DA)及五羥色胺(5-hydroxytry-ptamine,5-HT)含量的方法 采用ODS-SP C_(18)色譜柱(4.6mmx250mm,粒徑5μm),流動相為醋酸鈉-檸檬酸緩沖液(含醋酸鈉40mmol/L、檸檬酸30mmol/L、EDTA-2Na0.2mmol/L辛烷磺酸鈉0.4mmol/L, PH3.8)：甲醇體積比比=70：30；熒光檢測器的激發(fā)波長為280nm,發(fā)射波長為330nm：流速為1.0ml/min;柱溫35℃；進樣量20μl；整個色譜過程20min；采用標(biāo)準(zhǔn)曲線法,以色譜峰面積計算DA、5-HT含量。 2.茶氨酸對大鼠腦缺血再灌注損傷的保護作用機制 采用56只6周齡、體重為100～120g的SPF級雄性健康SD大鼠(復(fù)旦大學(xué)實驗動物部提供：CXK(滬)2008-0016),適應(yīng)性喂養(yǎng)3d后,按體重分層隨機分為模型組、假手術(shù)組、茶氨酸低劑量組、中劑量組、高劑量組,茶氨酸低、中、高劑量組大鼠每天分別灌胃給予茶氨酸10、30、90mg/kg,模型組和假手術(shù)組每天灌胃給予等量超純水。大鼠連續(xù)灌胃15天后,進行大腦中動脈栓塞(middle cerebral artery occlusion, MCAO)手術(shù),于腦缺血2h拔出栓線再灌注,假手術(shù)組除不插栓線外其余處理步驟與模型組相同。再灌注后第3、24小時對大鼠進行神經(jīng)行為學(xué)評分。于再灌注后第24小時取缺血側(cè)大腦,置于-80℃冰箱中待測定各組大鼠腦中茶氨酸及單胺類神經(jīng)遞質(zhì)5-HT含量,GluR2mRNA和PLC-ylmRNA的表達以及線粒體活性氧(ROS)水平和過氧化氫酶(CAT)活力的變化。 結(jié)果： 1.反相高效液相色譜法對大鼠腦內(nèi)DA及5-HT含量的測定方法在上述色譜條件下,DA及5-HT的保留時間分別為4.39mmin和5.44mmin,兩者峰型及分離良好,經(jīng)前處理后腦組織樣品中的其他成分對目標(biāo)色譜峰無干擾。DA及5-HT在0.005-1.000ug/ml濃度范圍內(nèi)回歸方程分別為Y=2.33×106X-1793和Y=9.06×106X+58081,相關(guān)系數(shù)分別為0.9998、0.9987。濃度為0.1、0.3、0.5ug/ml時,精密度實驗顯示各RSD均小于7%,加標(biāo)回收率均大于80%。 2.茶氨酸對大鼠腦缺血再灌注損傷的保護作用機制 2.1大鼠腦缺血再灌注3、24h神經(jīng)行為學(xué)評分假手術(shù)組(n=8)大鼠術(shù)后無horner體征；各缺血組大鼠再灌注后3、24小時均出現(xiàn)不同程度的神經(jīng)損傷體征。模型組(n=8)、茶氨酸低(n=8)、中(n=9)、高劑量組(n=10)大鼠腦缺血再灌注后3小時神經(jīng)行為學(xué)評分分別為(6.000±0.926)、(4.100±0.738)、(3.444±0.726)、(2.250±0.886)(F=29.696,P0.01)；24小時神經(jīng)行為學(xué)評分分別為(6.625±0.916)、(5.000±0.817)、(3.667±0.707)、(2.625±0.916)分(F=34.679,P0.01)。茶氨酸各劑量組評分均顯著低于模型組(P0.05)。 2.2大鼠腦組織中茶氨酸的含量測定大鼠腦組織中茶氨酸含量隨灌胃劑量的增加而升高,模型組、茶氨酸低、中、高劑量組及假手術(shù)組茶氨酸含量分別為(0.141±0.022)(0.205±0.051)(0.375±0.083)(1.064±0.133)(0.130±0.034)μmol/g(F=221.950,P0.01)。 2.3茶氨酸對腦缺血再灌注大鼠腦中單胺類神經(jīng)遞質(zhì)含量的影響 模型組、茶氨酸低、中、高劑量組及假手術(shù)組大鼠腦內(nèi)DA含量分別為(10.26±1.12)、(12.48±1.09)、(14.55±0.94)、(15.97±0.92)、(11.98±0.63)μg/(F=43.755,P0.01)；5-HT含量分別為(1.091±0.160)、(0.818±0.101)、(0.571±0.050)、(0.453±0.111)、(0.863±0.063)μg/g(F=48.681,P0.01)。與假手術(shù)組比較,模型組大鼠腦組織中單胺類神經(jīng)遞質(zhì)DA含量降低,5-HT含量提高,差異有統(tǒng)計學(xué)意義。而茶氨酸各劑量組與模型組相比,腦組織中DA含量均提高,5-HT含量均降低,且茶氨酸高劑量組的DA含量高于低劑量組,茶氨酸高劑量組的5-HT含量低于低劑量組。 2.4腦缺血再灌注大鼠腦中GluR2mRNA、PLC-γ1mRNA的表達模型組、茶氨酸低、中、高劑量組及假手術(shù)組大鼠腦內(nèi)GluR2mRNA相對表達量分別為0.842±0.020、1.063±0.100、1.170±0.152、1.254±0.131、1.012±0..056(F=9.232,P0..01)；PLC-γ1mRNA相對表達量分別為0.737±0.090、0.887±0.045、0.963±0.025、0.991±0.049、0.867±0.079(F=10.239,P0.01)。模型組大鼠腦組織GluR2mRNA的表達低于假手術(shù)組,而茶氨酸各劑量組大鼠腦組織G1uR2mRNA表達均高于模型對照組,且高劑量組還高于低劑量組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。茶氨酸各劑量組大鼠腦組織PLC-γ1mRNA的表達均高于模型組。其中,茶氨酸中、高劑量組還高于假手術(shù)組。 2.5腦組織中線粒體ROS生成和CAT活性測定模型組、茶氨酸低、中、高劑量組及假手術(shù)組大鼠腦線粒體活性氧生成速率分別為(3.072±0.503)、(1.331±0.268)、(1.295±0.061)、(0.804±0.200)、(2.158±0.218) U·min-1·mg·prot-1(F=80.823,P0.01)；CAT活性分別為(4.880±1.121)、(8.405±1.356)、(9.535±2.511)、(15.09±4.054)、(21.26±6.054) U/g·prot(F=28.577,P0.01)。與假手術(shù)組相比,模型組大鼠腦組織中線粒體ROS生成增加,CAT活性下降,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。而茶氨酸各劑量組大鼠線粒體ROS生成均低于模型組及假手術(shù)組,且茶氨酸高劑量組低于中、低劑量組。茶氨酸各劑量組腦中CAT活性均高于模型組,但低于假手術(shù)組,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。 結(jié)論： 1.在本研究的色譜條件下,DA及5-HT的峰型及分離良好,腦組織樣品中無其他成分干擾,保留時間適當(dāng),DA及5-HT標(biāo)準(zhǔn)曲線在0.005-1.000μg/ml的范圍內(nèi)線性關(guān)系良好,加標(biāo)回收率較高,能用于準(zhǔn)確測定腦組織中DA及5-HT含量。 2.茶氨酸對大鼠腦缺血再灌注引起的神經(jīng)損傷具有一定保護作用,表現(xiàn)為茶氨酸劑量組大鼠的神經(jīng)行為學(xué)障礙減輕,其機制與調(diào)節(jié)腦內(nèi)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)DA、5-HT,上調(diào)GluR2mRNA和PLC-ylmRNA的表達,降低腦中氧化應(yīng)激水平有關(guān)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：復(fù)旦大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R151

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前4條

1 許忠,徐如祥,劉寶松,黃濤,丁漣沭,袁軍;缺血缺氧后海馬神經(jīng)元突觸后膜谷氨酸受體-2含量變化的研究[J];中華神經(jīng)醫(yī)學(xué)雜志;2005年03期

2 魏瑛,劉子建,朱長庚,劉慶瑩;海仁酸致癇大鼠海馬組織AMPA受體GluR2表達的變化[J];中國組織化學(xué)與細胞化學(xué)雜志;2003年03期

3 周陸生，梁熙南，吳祥，

本文編號：1626461