本文選題：表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯　切入點(diǎn)：染色體不穩(wěn)定性　出處：《云南師范大學(xué)》2016年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：常綠灌木茶樹(shù)葉片制成品稱茶葉,是全球消耗量最大的飲料泡制材料。綠茶、烏龍茶和黑茶是茶葉的三種主要類型。云南茶樹(shù)種質(zhì)資源豐富,是綠茶的主要生產(chǎn)和消耗區(qū)。綠茶特殊的制作過(guò)程可阻止其重要組分茶多酚(Tea polyphenols,TPs)氧化,使TPs能最大程度地得以保存。表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯[(-)-epigallocatechin-3-gallate,EGCG]是TPs的主要組分,約占TPs總量的50%,是綠茶利好人體健康的主要活性物質(zhì)。流行病學(xué)、動(dòng)物模型和離體研究數(shù)據(jù)已證實(shí),EGCG具有潛在抗癌活性,能誘導(dǎo)多種類型的癌細(xì)胞凋亡。EGCG對(duì)培養(yǎng)細(xì)胞可表現(xiàn)抗氧化或促進(jìn)氧化的雙重效應(yīng);同時(shí),EGCG具有抑制DNA甲基轉(zhuǎn)移酶、改變組蛋白修飾模式等表觀調(diào)節(jié)能力,提示EGCG可能對(duì)氧化還原條件改變引起的細(xì)胞生長(zhǎng)及遺傳響應(yīng)、細(xì)胞表觀遺傳環(huán)境改變介導(dǎo)的基因表達(dá)產(chǎn)生影響,但相關(guān)機(jī)制尚不明確。本研究擬從遺傳和表觀遺傳層面出發(fā),針對(duì)不同病理狀態(tài)細(xì)胞對(duì)EGCG處理的差異響應(yīng),探討EGCG誘導(dǎo)癌細(xì)胞凋亡的機(jī)制。本研究首先以0,5,10,20,40μg/ml的EGCG處理人正常結(jié)腸上皮細(xì)胞NCM460和結(jié)腸腺癌細(xì)胞COLO205 24,48,72,96h,用CBMN-Cyt評(píng)價(jià)和比較EGCG對(duì)兩種不同病理狀態(tài)的細(xì)胞基因組穩(wěn)定性和細(xì)胞生長(zhǎng)狀況的影響。研究發(fā)現(xiàn):(1)與陰性對(duì)照比較,EGCG在所有濃度(5-40μg/ml)和處理時(shí)間,均顯著降低NCM460染色體不穩(wěn)定率CIN(p0.001),但顯著誘發(fā)COLO205 CIN(p0.001),提示,EGCG在不同病理狀態(tài)的細(xì)胞中分別具有遺傳保護(hù)和損傷效應(yīng);(2)EGCG 5μg/ml處理NCM460,其核分裂指數(shù)NDI顯著上升,而EGCG各處理組均使COLO205的NDI降低(p0.05),提示EGCG對(duì)二種受試細(xì)胞的生長(zhǎng)途徑也具有不同的影響;(3)ECGC處理顯著降低NCM460凋亡率(p0.001),卻顯著提高COLO205的凋亡率(p0.001)。EGCG在正常和癌細(xì)胞中表現(xiàn)出各自相異的遺傳學(xué)和細(xì)胞學(xué)效應(yīng)�；谝陨辖Y(jié)果,為了深入分析上述差異的發(fā)生機(jī)制,結(jié)合EGCG的表觀修飾能力,研究進(jìn)一步探討了EGCG對(duì)不同病理狀態(tài)細(xì)胞遺傳損傷修復(fù)和凋亡途徑的影響及差異。在相同的實(shí)驗(yàn)條件下,以qRT-PCR分析EGCG對(duì)錯(cuò)配修復(fù)系統(tǒng)關(guān)鍵基因hMLH1和hMSH2、凋亡相關(guān)基因bax和bcl-2轉(zhuǎn)錄的影響。研究發(fā)現(xiàn):(1)EGCG處理24h后,能顯著上調(diào)NCM460中DNA損傷修復(fù)基因hMLH1和hMSH2的轉(zhuǎn)錄水平(p0.05),而在COLO205中,處理48h后hMLH1的轉(zhuǎn)錄水平才開(kāi)始顯著上調(diào),因此,EGCG能上調(diào)二受試細(xì)胞錯(cuò)配修復(fù)關(guān)鍵基因的表達(dá),NCM460的響應(yīng)更加顯著,提示EGCG可能促進(jìn)正常細(xì)胞的DNA損傷修復(fù),而在癌細(xì)胞中損傷修復(fù)基因轉(zhuǎn)錄的上調(diào)可能是對(duì)EGCG誘導(dǎo)的基因組損傷的一種響應(yīng);(2)EGCG對(duì)凋亡相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄具有顯著影響,在NCM460細(xì)胞,40μg/ml處理48h,顯著下調(diào)凋亡相關(guān)基因bax的轉(zhuǎn)錄(p0.001),在所有濃度和時(shí)間點(diǎn)顯著上調(diào)bcl-2的轉(zhuǎn)錄(p0.001);在COLO205細(xì)胞,40μg/m EGCG處理48h,顯著上調(diào)bax的轉(zhuǎn)錄(p0.05);處理72h后,所有濃度組顯著降低COLO205 bcl-2的轉(zhuǎn)錄水平(p0.001),EGCG對(duì)兩受試細(xì)胞bax、bcl-2轉(zhuǎn)錄的調(diào)節(jié)存在差異;(3)綜合各處理時(shí)間點(diǎn),討論各濃度bax和bcl-2二者轉(zhuǎn)錄比例變化,在NCM460中,20μg/ml組的bcl-2/bax比例顯著高于5和10μg/ml組(p0.001),40μg/ml組有所下降,呈現(xiàn)出先上升后下降的趨勢(shì);而20和40μg/ml的EGCG能顯著降低COLO205的bcl-2/bax值。綜合以上結(jié)果,提示中低濃度(5,10,20μg/ml)的EGCG可抑制NCM460凋亡,中高濃度EGCG(20和40μg/ml)能促進(jìn)COLO205凋亡。綜上,EGCG對(duì)不同病理狀態(tài)的細(xì)胞基因組穩(wěn)定和凋亡相關(guān)基因轉(zhuǎn)錄的影響存在雙向性。EGCG有利于正常細(xì)胞遺傳損傷修復(fù),維護(hù)其基因組穩(wěn)定性,上調(diào)抗凋亡基因bcl-2的轉(zhuǎn)錄,進(jìn)而抑制細(xì)胞凋亡;同時(shí),EGCG處理能顯著誘導(dǎo)結(jié)腸癌細(xì)胞染色體不穩(wěn)定性、下調(diào)bcl-2的轉(zhuǎn)錄,促進(jìn)其凋亡。因此,兩細(xì)胞對(duì)EGCG處理產(chǎn)生不同遺傳損傷及修復(fù)系統(tǒng)的響應(yīng)可能影響了細(xì)胞的生長(zhǎng)途徑,成為EGCG抗癌特性的潛在機(jī)制之一�；蚪M穩(wěn)定性下降是誘發(fā)癌癥的一個(gè)重要因素,EGCG對(duì)正常細(xì)胞基因組維護(hù)效應(yīng),提示其可能具有預(yù)防腫瘤發(fā)生的生物學(xué)效應(yīng)。該研究為有目的地開(kāi)發(fā)綠茶的健康價(jià)值、探索其潛在臨床效應(yīng)奠定了科學(xué)基礎(chǔ)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：云南師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R151

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本文編號(hào)：1605763