發(fā)布時(shí)間：2018-03-08 21:03

  本文選題：硫化氫　切入點(diǎn)：甲醛　出處：《南華大學(xué)》2013年碩士論文　論文類(lèi)型：學(xué)位論文

【摘要】：目的： 本課題以甲醛損傷PC12細(xì)胞為甲醛神經(jīng)毒性的細(xì)胞模型，探討硫化氫是否能通過(guò)調(diào)控SIRT1的表達(dá)而拮抗甲醛誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激。 方法： CCK8法檢測(cè)細(xì)胞的活性；PI染色流式細(xì)胞儀和Hoechst33258染色分析細(xì)胞凋亡情況；Western Blotting檢測(cè)GRP78, CHOP, Cleaved-caspase-12和SIRT1蛋白的表達(dá)。 結(jié)果： 1、H_2S抑制甲醛誘導(dǎo)的細(xì)胞毒性 FA (120or240μmol/L,24h)可濃度依賴性誘導(dǎo)PC12細(xì)胞活性下降及PC12細(xì)胞的凋亡，而NaHS（100,200or400μmol/L）可濃度依賴性抑制FA (120or240μmol/L,24h)誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞的活性下降及PC12細(xì)胞凋亡，表明H_2S能夠?qū)笷A對(duì)PC12細(xì)胞的毒性作用。 FA (120μmol/L)處理細(xì)胞12h、24h、36h后，F(xiàn)A導(dǎo)致的PC12細(xì)胞的活性的下降及凋亡呈時(shí)間依賴性加重，NaHS (200μmol/L)逆轉(zhuǎn)FA導(dǎo)致的PC12細(xì)胞的活性的下降及凋亡的作用呈時(shí)間依賴性增強(qiáng)。 2、甲醛對(duì)PC12細(xì)胞產(chǎn)生內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激(ERS) FA (60,120or240μmol/L)處理PC12細(xì)胞24小時(shí)后GRP78, CHOP andCleaved-caspase-12蛋白表達(dá)呈濃度依賴性上調(diào)，表明FA誘導(dǎo)PC12細(xì)胞產(chǎn)生ERS。 3、硫化氫抑制甲醛誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激 H_2S（100or200μmol/L）可濃度依賴性抑制FA (120μmol/L,24h)誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞中GRP78, CHOP and Cleaved-caspase-12蛋白表達(dá)的上調(diào)。結(jié)果表明H_2S拮抗FA誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞ERS。 4、H_2S通過(guò)上調(diào)SIRT1抑制甲醛誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激。 4.1H_2S促進(jìn)PC12細(xì)胞高表達(dá)SIRT1，，減輕甲醛對(duì)SIRT1表達(dá)的抑制作用 H_2S (100,200or400μmol/L,24h)處理PC12細(xì)胞后濃度依賴性地上調(diào)SIRT1蛋白表達(dá)。H_2S(200μmol/L)上調(diào)SIRT1蛋白表達(dá)并可逆轉(zhuǎn)FA(120μmol/L,24h)作用PC12細(xì)胞后對(duì)SIRT1蛋白表達(dá)的抑制作用。結(jié)果表明H_2S促進(jìn)PC12細(xì)胞高表達(dá)SIRT1，減輕了FA對(duì)SIRT1蛋白表達(dá)的抑制作用。 4.2SIRT1抑制劑可阻斷H_2S對(duì)甲醛誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞ERS的抑制作用 NaHS（200μmol/L）可對(duì)抗FA (120μmol/L)導(dǎo)致的PC12細(xì)胞活性下降及凋亡，而加入sirtino（l15μmol/L）預(yù)處理2h后NaHS對(duì)抗FA導(dǎo)致的PC12細(xì)胞的活性下降及凋亡的作用被部分阻斷。 NaHS（200μmol/L）可抑制FA (120μmol/L,24h)誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞中GRP78,CHOP and Cleaved-caspase-12蛋白表達(dá)的上調(diào)。而加入sirtinol（15μmol/L）預(yù)處理PC12細(xì)胞2h后NaHS抑制FA誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞中GRP78, CHOP andCleaved-caspase-12蛋白表達(dá)的上調(diào)的作用被阻斷，此結(jié)果表明H_2S可以通過(guò)上調(diào)SIRT1抑制FA誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞的ERS。 結(jié)論： 1、甲醛誘導(dǎo)PC12細(xì)胞產(chǎn)生內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激,硫化氫拮抗甲醛誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激。 2、硫化氫通過(guò)上調(diào)SIRT1拮抗甲醛誘導(dǎo)PC12細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激。
[Abstract]:Objective:. To investigate whether hydrogen sulfide can antagonize the endoplasmic reticulum stress induced by formaldehyde in PC12 cells by regulating the expression of SIRT1. Methods:. The expression of GRP78, CHOP, Cleaved-caspase-12 and SIRT1 proteins was detected by CCK8 and Hoechst33258 staining. Results:. Inhibitory effect of H2S on the cytotoxicity induced by formaldehyde. FA (120 or 240 渭 mol / L ~ (24 h)) could induce the decrease of PC12 cell activity and the apoptosis of PC12 cells in a concentration-dependent manner, while NaHSN _ (100) (200 渭 mol / L) inhibited the decrease of PC12 cell activity and PC12 cell apoptosis induced by FA (120 or 240 渭 mol / L ~ (24) h) in a concentration-dependent manner, which indicated that H _ (2) S could antagonize the toxicity of FA to PC12 cells. FA (120 渭 mol 路L ~ (-1)) treated with FA for 12 h or 24 h or 36 h, decreased the activity of PC12 cells in a time-dependent manner and increased the apoptosis of PC12 cells induced by FA in a time-dependent manner. The effect of FA on the activity of PC12 cells was reversed in a time-dependent manner, and the effect of apoptosis was enhanced in a time-dependent manner. 2, formaldehyde produces endoplasmic reticulum stress (ERS) in PC12 cells. PC12 cells were treated with FA 60 or 120 or 240 渭 mol / L for 24 hours. The expression of CHOP andCleaved-caspase-12 protein was up-regulated in a concentration-dependent manner, indicating that FA induced PC12 cells to produce ERSs. Inhibitory effect of hydrogen sulfide on endoplasmic reticulum stress induced by formaldehyde in PC12 cells. The expression of GRP78 and CHOP and Cleaved-caspase-12 in PC12 cells induced by FA (120 渭 mol / L for 24 h) was inhibited in a concentration-dependent manner. The results showed that H2S antagonized the expression of PC12 cells induced by FA. 4. H2S upregulated SIRT1 to inhibit endoplasmic reticulum stress induced by formaldehyde in PC12 cells. 4.1 H2S promotes the overexpression of SIRT1 in PC12 cells and alleviates the inhibitory effect of formaldehyde on SIRT1 expression. After treated with H2S200 渭 mol / L for 24 h, H2S increased the expression of SIRT1 protein in a concentration-dependent manner. H2SN / L (200 渭 mol / L) upregulated the expression of SIRT1 protein and reversed the inhibitory effect of FA(120 渭 mol / L on the expression of SIRT1 protein in PC12 cells. The results showed that HSn2S promoted the overexpression of SIRT1 in PC12 cells and alleviated the expression of FA in PC12 cells. Inhibition of SIRT1 protein expression. 4.2SIRT1 inhibitor can block the inhibitory effect of HSPs on formaldehyde-induced ERS in PC12 cells. NaHS(200 渭 mol / L could antagonize the decrease of PC12 cell activity and apoptosis induced by FA (120 渭 mol / L). However, after pretreatment with sirtino(l15 渭 mol / L for 2 h, the effect of NaHS on the decrease of PC12 cell activity and apoptosis induced by FA was partially blocked. NaHS(200 渭 mol / L inhibited the up-regulation of GRP78 chop andCleaved-caspase-12 protein expression in PC12 cells induced by FA 120 渭 mol / L for 24 h, but NaHS inhibited the up-regulation of NaHS on FA-induced NaHS andCleaved-caspase-12 expression in PC12 cells after pretreatment with sirtinol(15 渭 mol / L for 2 h. These results suggest that H2S can up-regulate the inhibition of PC12 cells induced by FA by SIRT1. Conclusion:. 1. Formaldehyde induced endoplasmic reticulum stress in PC12 cells, and hydrogen sulfide antagonized endoplasmic reticulum stress in PC12 cells induced by formaldehyde. 2. Hydrogen sulfide antagonizes endoplasmic reticulum stress induced by formaldehyde by up-regulating SIRT1.
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類(lèi)號(hào)】：R114

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1585521