本文選題：微囊藻毒素-LR　切入點：甲基化　出處：《廣西醫(yī)科大學》2013年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：目的：研究微囊藻毒素-LR (Microcystin-LR, MCLR)短期重復暴露對小鼠肝細胞DNA總體甲基化水平、DNA甲基轉移酶(DNA methyltransferase, DNMTs)活性、蛋白及mRNA表達的影響,探討MCLR誘導的肝毒性與DNA甲基化之間的關系。 方法：80只健康昆明小鼠,隨機分為2批,每批4組,每組10只,即對照組(含0.02%二甲基亞砜的生理鹽水0.005ml/g)、MCLR低(5μg/kg)、中(10μg/kg)、高(20μg/kg)劑量組,每天1次稱量體重并經(jīng)腹腔注射染毒,兩批分別染毒10天和20天。第11天和第21天處理小鼠,采血后稱量肝臟重量,計算體重增長率及肝臟臟器系數(shù)；分離血清后,用全自動生化分析儀測定血清中谷丙轉氨酶(Alanine Aminotransferase, ALT).谷草轉氨酶(Aspartate Aminotransferase, AST).堿性磷酸酶(Alkalinephosphatase, ALP).總蛋白、白蛋白及球蛋白的水平；取肝組織進行光鏡下的病理檢查；提取并水解肝細胞DNA,用高效液相色譜法對DNA總體甲基化水平進行測定；提取肝細胞核蛋白,用DNMTs酶活性測定試劑盒對DNA甲基轉移酶活性進行測定；提取肝細胞總RNA,逆轉錄成cDNA,用實時熒光定量PCR法對DNMT1、DNMT3a、DNMT3b的mRNA表達進行測定；提取肝細胞蛋白,用Western Blot法測定DNMT1的蛋白表達量。 結果： 1.染毒10天和20天后,中、高劑量組體重增長率與對照組比較,均明顯降低(P0.05)。染毒20天高劑量組臟器系數(shù)高于對照組,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。 2.染毒10天低劑量組在ALT、AST、ALP水平上無明顯變化(P0.05)。染毒10天和20天后中、高劑量組血清ALT水平均高于對照組,差異均有統(tǒng)計學意義(P0.05)。染毒10天高劑量組,染毒20天低、中、高劑量組AST水平均高于對照組(P0.05)。染毒10天和20天中、高劑量組ALP水平均高于對照組(P0.05)。染毒10天后,高劑量組總蛋白、白蛋白水平低于對照組(P0.05),染毒20天后,低、中、高劑量組總蛋白、白蛋白水平與對照組比較均降低(P0.05)。 3.肝臟病理檢查發(fā)現(xiàn)染毒10天低劑量組未出現(xiàn)明顯病理改變,高劑量組肝細胞出現(xiàn)腫脹,以及少量點狀壞死,染毒20天后低劑量組細胞出現(xiàn)腫脹,中劑量組不僅細胞腫脹明顯,且匯管區(qū)炎性細胞增多,枯否細胞肥大增生,高劑量組中雙核細胞增多,并出現(xiàn)壞死灶。 4.染毒10天后,各劑量組DNA總體甲基化水平未出現(xiàn)明顯變化。染毒20天中、高劑量組DNA總體甲基化水平為(2.26±0.60)%和(2.16±0.51)%,均低于對照組的(3.31±0.86)%,差異均有統(tǒng)計學意義(P0.05)。 5.染毒10天或20天后,各劑量組的DNMTs酶活性水平與對照組相比均有所上升,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。 6.染毒10天高劑量組DNMT1、DNMT3a及DNMT3b的mRNA表達水平均下調(P0.05),染毒20天后,中、高劑量組中DNMT1、DNMT3a及DNMT3b的mRNA表達水平與對照組比較均下降(P0.05),其中劑量組DNMT1、DNMT3a及DNMT3b的mRNA表達水平分別降至對照組的38.3%、59.9%、21.5%,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。 7.染毒10天后,高劑量組DNMT1蛋白表達水平與對照組比較明顯下降,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。染毒20天后,各劑量組DNMT1蛋白表達水平有降低的趨勢,但差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。 8.血清AST、ALP水平與肝細胞DNA總體甲基化水平呈負相關關系(rAST=-0.29, P0.01; rALP=-0.40, P0.01),血清ALT水平與DNA總體甲基化水平之間未見明顯相關關系(γ=-0.19,P=0.10)。肝細胞DNMT1、 DNMT3a、DNMT3b mRNA表達與DNA總體甲基化水平呈正相關關系(rDNMTI=47, P0.01; rDNMT3a=0.37, P0.01; rDNMT3b=0.36, P0.05)。 結論： 1. MCLR短期重復暴露可致小鼠肝臟結構和功能損傷,表現(xiàn)為血清ALT、 AST和ALP水平升高,血清總蛋白、白蛋白水平降低,病理檢查發(fā)現(xiàn)染毒后肝細胞出現(xiàn)腫脹,并出現(xiàn)壞死灶。 2. MCLR可抑制小鼠肝細胞DNMT1、DNMT3a和DNMT3b的mRNA表達,抑制DNMT1的蛋白表達,降低DNA總體甲基化水平。 3. MCLR引起的肝損傷可能與甲基化異常有關,DNA總體甲基化水平的降低可能與DNMT1、DNMT3a和DNMT3b的mRNA表達下調有關。
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【學位授予單位】：廣西醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R114

【參考文獻】

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本文編號：1566274