發(fā)布時(shí)間：2018-03-03 15:46

  本文選題：鈾礦塵　切入點(diǎn)：SB-431542　出處：《南華大學(xué)》2013年碩士論文　論文類(lèi)型：學(xué)位論文

【摘要】：目的：采用TGF-β1抑制劑SB-431542作用于成纖維細(xì)胞，觀察SB-431542對(duì)成纖維細(xì)胞的轉(zhuǎn)化能力、合成羥脯氨酸、Ⅰ型和Ⅲ型膠原蛋白的影響。探討SB-431542對(duì)成纖維細(xì)胞合成膠原纖維的抑制作用，為尋找防治矽肺纖維化作用靶點(diǎn)提供基礎(chǔ)資料。 方法：用120μg/ml的鈾礦塵混懸液作用于RAW264.7巨噬細(xì)胞24h后，分離制備上清液為鈾礦塵組條件培養(yǎng)液；將無(wú)鈾礦塵作用RAW264.7巨噬細(xì)胞培養(yǎng)24h后，分離制備上清液為對(duì)照組用條件培養(yǎng)液。將鈾礦塵組和對(duì)照組條件培養(yǎng)液作用于正常小鼠肺成纖維細(xì)胞（L929細(xì)胞）6、12、18、24、30、36h后。分別測(cè)定細(xì)胞內(nèi)α-SMA的表達(dá)、細(xì)胞外羥脯氨酸、I型膠原(COL I)及III型膠原(COL III)蛋白的含量。通過(guò)不同濃度（0、0.5、1、5、10μmol/L）的SB-431542作用于L929細(xì)胞2h后，再用鈾礦塵組和對(duì)照組條件培養(yǎng)液作用于L929細(xì)胞30h，采用細(xì)胞免疫化學(xué)法和western blot測(cè)定細(xì)胞內(nèi)α-SMA的表達(dá)，，消化法測(cè)細(xì)胞外羥脯氨酸含量，ELISA法和western blot檢測(cè)細(xì)胞外COL I和COL III蛋白的含量。 結(jié)果： 1.鈾礦塵對(duì)巨噬細(xì)胞分泌TGF-β1的影響 120μg/ml鈾礦塵作用于RAW264.7巨噬細(xì)胞8h后，測(cè)定細(xì)胞培養(yǎng)上清液中TGF-β1含量結(jié)果顯示，在染塵初期可見(jiàn)細(xì)胞培養(yǎng)上清液中TGF-β1含量有所增高，而在染塵16、24、32h后細(xì)胞培養(yǎng)上清液中TGF-β1含量則明顯高于對(duì)照組中TGF-β1含量，與對(duì)照組比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01），且在24h時(shí)達(dá)到峰值144.556±7.125。 2.鈾礦塵條件培養(yǎng)上清液對(duì)成纖維細(xì)胞膠原蛋白合成的作用 將120μg/ml鈾礦塵刺激巨噬細(xì)胞24h后收集的鈾礦塵條件培養(yǎng)液作用于L929細(xì)胞，經(jīng)6、12、18、24、30、36h作用后，隨著作用時(shí)間的增加，細(xì)胞內(nèi)α-SMA的表達(dá)明顯增多，在作用24-36h后細(xì)胞內(nèi)α-SMA的表達(dá)更為顯著。細(xì)胞外的羥脯氨酸的含量在作用18-36h后與對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），作用36h后其羥脯氨酸的含量達(dá)到0.226±0.002mg/L。鈾礦塵條件培養(yǎng)上清液作用于L929細(xì)胞12至36h后，COL I蛋白的含量逐漸增加，與對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。而COL III蛋白的含量的增加主要在作用于18至36h后,與對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），同時(shí)可見(jiàn)COL I蛋白含量整體水平均高于COL III蛋白含量。 3.SB-431542對(duì)成纖維細(xì)胞膠原蛋白合成的作用 應(yīng)用不同濃度（0、0.5、1、5、10μmol/L）SB-431542作用于L929細(xì)胞2h后，再用鈾礦塵條件培養(yǎng)液作用L929細(xì)胞30h。SB-431542濃度為5、10μmol/L時(shí)能顯著降低細(xì)胞內(nèi)α-SMA的表達(dá)、顯著降低細(xì)胞外羥脯氨酸和COL I和COLIII蛋白含量，與對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。 結(jié)論： 1.120μg/mL鈾礦塵作用于RAW264.7巨噬細(xì)胞后，能使細(xì)胞培養(yǎng)上清液中TGF-β1含量增加，在作用24h后TGF-β1含量達(dá)到峰值。 2.120μg/mL鈾礦塵作用于RAW264.7巨噬細(xì)胞24h后收集的鈾礦塵條件培養(yǎng)液能使成纖維細(xì)胞α-SMA表達(dá)增強(qiáng)，成纖維細(xì)胞合成羥脯氨酸、Ⅰ和Ⅲ型膠原蛋白含量增多。 3.5μmol/L SB-431542可顯著減少鈾礦塵條件培養(yǎng)液對(duì)成纖維細(xì)胞內(nèi)α-SMA的表達(dá)，抑制羥脯氨酸、 COL I和COL III蛋白的合成。
[Abstract]:Objective: using TGF- beta 1 inhibitor SB-431542 on fibroblast cells, the effects of SB-431542 on fibroblasts transformed into ability, the synthesis of hydroxyproline, effects of type I and type III collagen. To investigate the inhibitory effect of SB-431542 on fibroblast collagen synthesis, and provide basic information for prevention and treatment effects of silicosis fibrosis target.
Methods: 120 g/ml uranium dust suspension in RAW264.7 macrophage 24h after separation and preparation of supernatant liquid for uranium dust group; no uranium dust RAW264.7 macrophages after 24h culture supernatant for separation and preparation of control group with conditioned medium. The uranium dust group and the control group of conditioned medium in normal mouse lung fibroblasts (L929 cells) after 6,12,18,24,30,36h. The intracellular expression of -SMA alpha were measured, extracellular hydroxyproline, collagen type I (COL I) and collagen III (COL III). The protein content by different concentration (0,0.5,1,5,10 mol/L) SB-431542 in L929 cells after 2H. Then the conditions of uranium dust group and the control group L929 cells were cultured in 30h, the expression of alpha -SMA cells were determined by immunocytochemistry and Western blot, measuring extracellular digestion of hydroxyproline, ELISA and Western blot The content of COL I and COL III protein was detected.
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本文編號(hào)：1561667