本文關(guān)鍵詞： 反式脂肪酸 認(rèn)知功能 氧化應(yīng)激 神經(jīng)遞質(zhì)　出處：《山東大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：[研究目的]反式脂肪酸(trans-fatty acids,TFA)是在反式構(gòu)型中具有至少一個(gè)非共軛雙鍵的不飽和脂肪酸[1]。因可長(zhǎng)期保存及其理化性質(zhì)的穩(wěn)定性和半溶性,反式脂肪酸被廣泛應(yīng)用于食品加工行業(yè),如各類油炸食品,甜點(diǎn)等。大量研究證實(shí),反式脂肪酸的過量攝入會(huì)影響人體的生長(zhǎng)發(fā)育;此外,反式脂肪酸的過量攝入與動(dòng)脈粥樣硬化(atherosclerosis,AS)、冠心病(coronary heart disease,CHD)、2型糖尿病及癌癥等疾病相關(guān)。有研究表明,反式脂肪酸具有一定的神經(jīng)毒性,可穿過血腦屏障,在額葉皮層、海馬、紋狀體等處的神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)沉積,并與以漸進(jìn)性記憶障礙、認(rèn)知功能障礙為特征的阿爾茲海默病(Alzheimer's disease,AD)表現(xiàn)出一定的相關(guān)性。然而,反式脂肪酸是否導(dǎo)致認(rèn)知功能障礙及其相關(guān)機(jī)制并不明確。因此,我們采用反式脂肪酸灌胃12周,通過Morris水迷宮實(shí)驗(yàn),觀察反式脂肪酸對(duì)小鼠學(xué)習(xí)記憶的影響;通過蘇木素-伊紅染色觀察反式脂肪酸對(duì)小鼠海馬形態(tài)學(xué)的影響;采用生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)反式脂肪酸染毒小鼠大腦皮層超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)、過氧化氫酶(catalase,CAT)的活力以及脂質(zhì)過氧化蛋白加合物丙二醛(malondialdehyde,MDA)的含量變化;檢測(cè)反式脂肪酸染毒小鼠腦組織Na+/K+-ATP酶、Ca2+/Mg2+-ATP酶、乙酰膽堿酯酶(acetylocholinesterase,AchE)、一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,NOS)的活力值;采用高效液相色譜法檢測(cè)氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì):谷氨酸(glutamic acid,Glu)、甘氨酸(glycine,Gly)、天門冬氨酸(aspartic acid,Asp)、γ-氨基丁酸(y-aminobutyric acid,GABA)及�；撬�(taurine,Tau)的含量。探討反式脂肪酸對(duì)小鼠認(rèn)知功能的影響,及其與大腦氧化應(yīng)激和氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)的關(guān)系。[研究方法]1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組及處理:選取SPF級(jí)雄性昆明小鼠56只,體重(18-22)g,分籠飼養(yǎng),進(jìn)食飲水自由。適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后,隨機(jī)分為4組并均衡體重,分別為對(duì)照組和低、中、高劑量反式脂肪酸染毒組,每組14只。各劑量反式脂肪酸染毒組動(dòng)物分別給予25mg/kg、50mg/kg、100mg/kg反式脂肪酸,對(duì)照組給予等體積的玉米油。所有實(shí)驗(yàn)動(dòng)物均采用灌胃方式進(jìn)行染毒,染毒容量均為0.1ml/10g,每周6次,連續(xù)染毒12周。每周稱量并記錄小鼠體重,以調(diào)整灌胃劑量。2.小鼠認(rèn)知功能測(cè)定:反式脂肪酸灌胃結(jié)束后,每組隨機(jī)選取12只小鼠進(jìn)行連續(xù)6天的Morris水迷宮測(cè)試(第一天為訓(xùn)練,不記錄數(shù)據(jù))。通過定位航行實(shí)驗(yàn)和空間探索實(shí)驗(yàn)對(duì)小鼠的認(rèn)知功能進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)。其中,定位航行實(shí)驗(yàn)通過測(cè)定小鼠的逃避潛伏期和游泳總路程反應(yīng)實(shí)驗(yàn)小鼠的學(xué)習(xí)能力;空間探索實(shí)驗(yàn)通過測(cè)定穿越平臺(tái)次數(shù)反映小鼠的記憶能力。3.小鼠腦組織損傷病理形態(tài)學(xué)觀察:制備小鼠大腦的石蠟切片,采用蘇木素-伊紅(HE)染色法檢測(cè)小鼠海馬的形態(tài)學(xué)變化。4.小鼠大腦氧化應(yīng)激指標(biāo)檢測(cè):按照相關(guān)試劑盒的說明測(cè)定腦組織中SOD、GSH-Px、CAT的活力值以及MDA的含量。5.小鼠腦組織ATP酶活力檢測(cè):按照相關(guān)試劑盒說明檢測(cè)Na+/K+-ATP酶和Ca2+/Mg2+-ATP 酶活力值。6.小鼠腦組織AchE、NOS活力檢測(cè):制備小鼠大腦組織勻漿,按照相關(guān)試劑盒說明,檢測(cè)小鼠腦組織AchE和NOS活力值的變化。7.小鼠腦組織氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)檢測(cè):采用高效液相色譜-二極管陣列檢測(cè)器檢測(cè)小鼠腦組織中Glu、Gly、Asp、GABA、Tau的含量。[結(jié)果]1.反式脂肪酸染毒對(duì)小鼠一般生長(zhǎng)發(fā)育的影響對(duì)照組及各劑量反式脂肪酸染毒組小鼠一般狀況良好,小鼠體重隨實(shí)驗(yàn)進(jìn)行緩慢增加,各組體重增量差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。2.反式脂肪酸對(duì)小鼠學(xué)習(xí)記憶功能的影響Morris水迷宮數(shù)據(jù)顯示:隨訓(xùn)練時(shí)間的延長(zhǎng),各實(shí)驗(yàn)組小鼠逃避潛伏期及游泳總路程均呈下降趨勢(shì),各劑量反式脂肪酸染毒組小鼠與對(duì)照組相比逃避潛伏期、游泳總路程、平均游泳速度、穿越平臺(tái)次數(shù)等各指標(biāo)差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。3.反式脂肪酸染毒對(duì)小鼠海馬結(jié)構(gòu)影響的形態(tài)學(xué)觀察海馬形態(tài)學(xué)觀察顯示:與對(duì)照組相比,各劑量反式脂肪酸染毒組小鼠海馬組織中,組成海馬外形的神經(jīng)細(xì)胞線變得細(xì)且模糊。高倍鏡顯示,海馬CA2、CA3區(qū)神經(jīng)細(xì)胞數(shù)不同程度減少,排列疏松。4.反式脂肪酸染毒對(duì)小鼠大腦皮層SOD、GSH-Px、CAT活力及脂質(zhì)過氧化蛋白加合物MDA含量的影響與對(duì)照組相比,各劑量反式脂肪酸染毒組小鼠腦組織中抗氧化酶SOD、GSH-Px、CAT活力均降低(p0.05),而脂質(zhì)過氧化蛋白加合物MDA含量明顯升高(p0.05)。反式脂肪酸各劑量組間各酶活力及MDA含量差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。5.反式脂肪酸染毒對(duì)小鼠腦組織Na+/K+-ATP酶和Ca2+/Mg2+-ATP酶活力值的影響與對(duì)照組相比,低、中、高劑量反式脂肪酸染毒組小鼠腦組織Na+/K+-ATP和 Ca2+/Mg2+-ATP 酶活力值降低(p0.05)。6.反式脂肪酸對(duì)小鼠腦組織AchE和NOS活力值的影響與對(duì)照組相比,低、中劑量反式脂肪酸染毒組小鼠腦組織AchE活力值降低(p0.05)。小鼠腦組織中,高劑量反式脂肪酸染毒組NOS活力值與對(duì)照組相比顯著升高(p0.05)。低、中劑量反式脂肪酸染毒組NOS活力值與對(duì)照組相比呈增高趨勢(shì),但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p0.05)。7.反式脂肪酸對(duì)小鼠腦組織氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)含量的影響與對(duì)照組相比,低、中劑量反式脂肪酸染毒組小鼠腦組織中Glu,Gly,Asp,GABA,Tau含量升高(p0.05);高劑量反式脂肪酸染毒組小鼠腦組織中 Glu,Gly,Asp,GABA,Tau含量也呈升高趨勢(shì)(p0.05)。與對(duì)照組相比,低、中劑量反式脂肪酸染毒組小鼠腦組織中谷氨酸與γ-氨基丁酸的比值增加(p0.05);高劑量反式脂肪酸染毒組小鼠腦組織中谷氨酸與γ-氨基丁酸的比值增加(p0.05)。[結(jié)論]1.大腦是反式脂肪酸毒作用的敏感靶器官,反式脂肪酸暴露可導(dǎo)致小鼠海馬形態(tài)發(fā)生變化。2.反式脂肪酸可導(dǎo)致小鼠腦組織抗氧化系統(tǒng)損傷。3.反式脂肪酸可以影響小鼠腦組織AchE和NOS活力。4.反式脂肪酸具有興奮性神經(jīng)毒性,并且能夠影響ATP酶。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R114

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