本文關(guān)鍵詞：艾煙的毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)研究　出處：《北京中醫(yī)藥大學(xué)》2013年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：目的：應(yīng)用毒理學(xué)方法研究艾煙的一般毒性及特殊毒性,進(jìn)行艾煙的安全性評價(jià)。 方法：實(shí)驗(yàn)選用全自動(dòng)動(dòng)態(tài)染毒裝置進(jìn)行體內(nèi)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)：急性毒性實(shí)驗(yàn)和慢性毒性實(shí)驗(yàn),該裝置能實(shí)時(shí)監(jiān)測和控制染毒腔內(nèi)的溫度、濕度、壓差、氧氣濃度以及受試煙霧的濃度,染毒環(huán)境穩(wěn)定；以便攜式PM2.5/PM10采樣器PM10采樣頭采樣艾煙中的可吸入顆粒物,二甲基亞砜溶解制備艾煙染毒液(Moxibustion Smoke Condensation, MSC),進(jìn)行體外細(xì)胞及細(xì)菌實(shí)驗(yàn)：細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)、染色體畸變實(shí)驗(yàn)、微核實(shí)驗(yàn)、細(xì)菌回復(fù)突變實(shí)驗(yàn)。 1急性毒性實(shí)驗(yàn)：以KM小鼠和Wistar大鼠為研究對象。KM小鼠為固定艾煙的濃度(60%和85%),以小鼠不同的染毒時(shí)間為劑量梯度,記錄煙霧致小鼠死亡的染毒時(shí)間t,求得LT50(lethal concentration of50%, IC50); Wistar大鼠為固定2h的染毒時(shí)間,以不同的艾煙濃度(95%、90%、85%、80%、75%)為劑量梯度,記錄不同劑量組大鼠的死亡只數(shù),求得LT50(lethal time of50%, IT50)。分別可得出LD50(lethal dose of50%,ID50)。 2慢性毒性實(shí)驗(yàn)：對Wistar大鼠進(jìn)行重復(fù)染毒,觀察長期連續(xù)重復(fù)染毒艾煙所產(chǎn)生的毒性反應(yīng)。Wistar大鼠隨機(jī)分為四組,對照組(C組)、艾煙低劑量組(L組)、艾煙中劑量組(M組)、艾煙高劑量組(H組),觀察艾煙染毒對動(dòng)物的一般情況、體重、血液生化、血常規(guī)、尿常規(guī)、病理以及肺部相關(guān)的氧化、炎癥、肺功能等指標(biāo)的影響。 3細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)：選用MTT的方法觀察不同濃度的MSC抑制CHO細(xì)胞生長或?qū)?xì)胞產(chǎn)生不良反應(yīng)的情況,觀察艾煙引起細(xì)胞溶解和細(xì)胞死亡的實(shí)驗(yàn),最終計(jì)算MSC對CHO細(xì)胞的半數(shù)抑制率IC50,為后期的體外實(shí)驗(yàn)提供數(shù)據(jù)。 4染色體畸變實(shí)驗(yàn)：以不同濃度的MSC染毒CHO細(xì)胞株,觀察有絲分裂期的染色體畸變情況,考慮體內(nèi)、外環(huán)境的影響,設(shè)S9活化(+S9)及非活化(-S9)的對照,組別設(shè)計(jì)為：對照組(KB)、KB+S9組、環(huán)磷酰胺+S9組(CP+S9)、絲裂霉素C組(MMC)、艾煙1/2LC50+S9組、艾煙1/4LC50+S9組、艾煙1/8LC50+S9組、艾煙1/2LC50-S9組、艾煙1/4LC50-S9組、艾煙1/8LC50-S9組,對各組染色體畸變的類型及細(xì)胞數(shù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。 5微核實(shí)驗(yàn)：以不同濃度的MSC染毒CHO細(xì)胞株,觀察微核的形成情況,計(jì)算微核形成率,組別設(shè)計(jì)為：空白對照組(KB)、陽性對照組(CP)、溶劑對照組(DMSO)、1/2IC50、1/4IC50、1/8IC50,重復(fù)3次,觀察微核形成率及是否具有劑量效應(yīng)關(guān)系。 6鼠傷寒沙門氏菌突變回復(fù)實(shí)驗(yàn)：以平板摻入法觀察MSC致鼠傷寒沙門氏菌株TA97、TA98、TA100和TA102基因突變情況,分別設(shè)62.5,125,250,500,1000μg/皿6個(gè)梯度,每組均做代謝活化(+S9)和非活化(-S9)的對照。不同菌株選用不同的代謝活化和非活化的陽性對照物,重復(fù)三次。觀察結(jié)果在背景生長良好條件下,受試物組回變菌落數(shù)增加一倍以上(即回變菌落數(shù)等于或大于2乘以未處理對照數(shù)),并有劑量反應(yīng)關(guān)系或至少某一測試點(diǎn)有可重復(fù)的并有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的陽性反應(yīng),即可認(rèn)為該受試物誘變實(shí)驗(yàn)陽性。陽性結(jié)果至少應(yīng)做三次測試,陰性結(jié)果至少進(jìn)行二次測試,才能對受試物作出判定。 結(jié)果：艾煙相關(guān)的毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下： 1急性毒性實(shí)驗(yàn)：艾煙急性毒性損傷肺臟及呼吸系統(tǒng);KM小鼠LD50:45.41min,85%;209.96min,65%; Wistar大鼠LD50:86.274%,120min。 2慢性毒性實(shí)驗(yàn)：通過觀察染毒期末大鼠的一般狀況、血、尿常規(guī)及血生化,未發(fā)現(xiàn)因吸入艾煙引起的特異性的毒性反應(yīng),M、H組大鼠的體重降低、SOD消耗性降低、MDA增多、Th1/Th2細(xì)胞的效應(yīng)因子均出現(xiàn)不同程度的下降,L組未引起毒性改變,恢復(fù)期M、H組也出現(xiàn)了大鼠TG、Glu增高、TP降低、Alb降低,綜上我們認(rèn)為L組未引起毒性改變,為NOAEL (no observed adverse effect level, NOAEL),以此數(shù)據(jù)建立相關(guān)的安全性評價(jià)。 3細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)：MTT法觀察艾煙的細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)半數(shù)抑制濃度(lethal concentration of50%, IC50)為0.087mg/ml. 4染色體畸變實(shí)驗(yàn)：艾煙引起的染色體結(jié)構(gòu)畸變包括染色單體型畸變和染色體型畸變二類。單體型畸變有：單體裂隙(ctg)、雙間隙(csg)、單體斷裂(ctb)、單體互換(cte)和單體缺失(ctd)；染色體型畸變有：雙著絲粒體(dic)、環(huán)(ring)和無著絲粒斷片(ace)。單體類型畸變中以單體裂隙、單體斷裂和單體互換為多見,染色體型畸變以無著絲粒短片多見。染色體畸變細(xì)胞數(shù)和總畸變率一致,由高到低依次為CP+S9、艾煙+S9、MMC、 KB+S9、艾煙-S9組、空白對照組,艾煙使染色體畸變率增加,為潛在的染色體的斷裂劑,具有潛在的誘變作用。 5微核實(shí)驗(yàn)：1/2IC50,1/4IC50,1/8IC50的MSC所誘發(fā)的微核形成率較陰性對照組增加,并且具有劑量效應(yīng)關(guān)系,實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次,可重復(fù)并且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 6鼠傷寒沙門氏菌突變實(shí)驗(yàn)：MSC在代謝活化后：TA98誘變陽性,在背景生長良好的條件下,TA98菌的回變菌落數(shù)在代謝活化后增加一倍以上,并有劑量反應(yīng)關(guān)系,并有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,TA97、TA100、TA102誘變陰性；非代謝活化后均為陰性,此結(jié)果可以重復(fù)。因此,可以推論艾煙具有潛在的致基因突變性。 結(jié)論：艾煙毒理學(xué)研究結(jié)論如下： 1艾煙不屬于危險(xiǎn)廢物,高濃度的艾煙持續(xù)染毒,使大小鼠死亡的主要原因?yàn)榘瑹熤写罅康腃O。 2艾煙的毒性與濃度有關(guān),低濃度對大鼠的一般狀況、代謝、免疫、血象、肝腎功能均無明顯影響,中、高濃度反復(fù)染毒損傷肺及呼吸系統(tǒng),對大鼠的代謝,免疫有一定的毒性,對血象、肝腎功能未見明顯影響。實(shí)驗(yàn)得NOAEL為10%,艾煙的可吸入顆粒物的質(zhì)量濃度為27.5mg/m3。根據(jù)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)艾煙的安全濃度外推到人,預(yù)期限制濃度為2.75mg/m3。 3隨著艾煙濃度的增高及染毒時(shí)間的延長,艾煙可能具有遺傳毒性,在使用艾灸進(jìn)行治療時(shí)應(yīng)努力控制艾煙濃度及接觸時(shí)間。 4目前的診療環(huán)境應(yīng)注意通風(fēng),改善設(shè)施,提高艾灸治療環(huán)境的安全性。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：北京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R114

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本文編號：1428635