發(fā)布時間：2018-01-15 12:16

  本文關(guān)鍵詞：葡萄籽提取物對博萊霉素誘導(dǎo)的小鼠肺纖維化的影響　出處：《揚(yáng)州大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

  更多相關(guān)文章： 葡萄籽提取物 營養(yǎng)補(bǔ)充劑 肺纖維化 上皮細(xì)胞-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化 肺組織炎癥 抗炎 抗肺纖維化

【摘要】：目的:肺纖維化是一種間質(zhì)性肺部疾病,常由各種呼吸系統(tǒng)致病因素導(dǎo)致,它包括特發(fā)性肺纖維化,慢性阻塞性肺部疾病導(dǎo)致的氣道肺纖維化和哮喘氣道重塑。肺纖維化患者在確診后一般僅有3-5年的存活期,并且會伴有一系列并發(fā)癥。但目前對于肺纖維化的治療及預(yù)后缺乏特效藥,尋找有效治療肺纖維化的理想藥物已成為醫(yī)藥領(lǐng)域的重要研究課題。近年越來越多的研究表明,葡萄籽提取物具有較高的營養(yǎng)與藥效價值。尤為葡萄籽提取物所含原花青素(Procyanidins)、白藜蘆醇(Resveratrol)、脂類等成分具有預(yù)防治療癌癥、清除多余的自由基,保護(hù)心血管系統(tǒng)等作用,不失為一種來源于天然植物具有開發(fā)前景的保健品或藥物。在我國,葡萄是大面積種植、食用且營養(yǎng)價值極其豐富的高產(chǎn)水果,因而葡萄籽的開發(fā)利用具有廣闊的應(yīng)用市場及前景,以及重大的社會學(xué)、經(jīng)濟(jì)學(xué)意義。本研究側(cè)重探索葡萄籽提取物對博萊霉素誘導(dǎo)的小鼠肺纖維化的改善作用,并初步探討其防治肺纖維化的作用機(jī)制。方法:第一部分:ICR小鼠50只隨機(jī)分為5組,正常對照組,模型組,GSE50mg/kg、GSE100 mg/kg組,陽性對照(DXM 0.5 mg/kg)組。實(shí)驗(yàn)時,小鼠腹腔注射3%戊巴比妥鈉(10 mL/kg),麻醉后仰位固定于試驗(yàn)臺上,切開頸部皮膚,暴露氣管,用注射器穿刺氣管滴入BLM(2 mg/kg),再縫合頸部皮膚�？瞻讓φ战M用等容量的生理鹽水在小鼠氣管內(nèi)滴注。造模第二天分別按組進(jìn)行藥物干預(yù),受試品溶液按0.2 mL/20g容量灌胃給予,正常組和模型組均給予等量溶媒,連續(xù)21天,給藥過程定期記錄小鼠體重。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后采用Buxco動物肺功能分析系統(tǒng)測定小鼠肺功能。實(shí)驗(yàn)結(jié)束處死小鼠,結(jié)扎左肺,灌洗右肺肺泡,收集肺泡灌洗液(Bronchoalveolar lavage fluid,BALF),取上清液計(jì)數(shù)其中的白細(xì)胞總數(shù)、檢測TGF-β1與LDH;沉淀用于計(jì)數(shù)巨噬細(xì)胞數(shù)、淋巴細(xì)胞數(shù)、中性粒細(xì)胞分類計(jì)數(shù)。取小鼠左肺肺組織制作組織切片,行HE染色,光學(xué)顯微鏡下觀測肺組織形態(tài)。第二部分:ICR小鼠50只隨機(jī)分為5組,正常對照組,模型組,GSE 50 mg/kg、GSE 100 mg/kg組,陽性對照(DXM 0.5 mg/kg)組。小鼠腹腔內(nèi)注射3%戊巴比妥鈉(10 mL/kg),麻醉后仰位固定于試驗(yàn)臺上,注射器穿刺氣管滴入BLM(2 mg/kg),再縫合頸部皮膚�？瞻讓φ战M以等容量的生理鹽水進(jìn)行氣管內(nèi)滴注。造模第二天分別按組進(jìn)行干預(yù),受試品溶液按0.2 mL/20g容量灌胃給予,正常組和模型組均給予等量溶媒,持續(xù)進(jìn)行21天。結(jié)束后殺死小鼠,結(jié)扎左肺,灌洗右肺肺泡,收集肺泡灌洗液(Bronchoalveolar lavage fluid,BALF)上清液用于檢測TGF-β1含量。取小鼠部分左肺肺組織制作組織切片,行Masson染色和免疫組化,在光學(xué)顯微鏡下進(jìn)行觀測。另一部分左肺用于檢測羥脯氨酸(Hydroxyproline,HYP)含量,并制備組織勻漿用實(shí)時定量PCR(qRT-PCR)法檢測EMT相關(guān)因子。結(jié)果:第一部分:與模型組相比,灌胃GSE可顯著改善BLM導(dǎo)致的肺纖維化小鼠肺功能Penh值升高,顯著減少BALF中白細(xì)胞總數(shù),中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞的增加。下調(diào)肺組織中IL-6、IL-1β mRNA高表達(dá),緩解BLM誘發(fā)的肺泡結(jié)構(gòu)破壞與肺組織實(shí)質(zhì)病變減少肺泡灌洗液中LDH含量。第二部分:灌胃GSE可顯著下調(diào)肺組織中MMP-9與TIMP-1 mRNA和蛋白高表達(dá),減少BLM誘導(dǎo)的肺組織中的膠原纖維沉積及羥脯氨酸的水平,減少肺泡灌洗液中TGF-β1含量。GSE可通過抑制p38通路的激活調(diào)節(jié)纖維化相關(guān)因子E-cadherin、FN1與COL1A1 mRNA和蛋白表達(dá),上調(diào)E-cadherin表達(dá),下調(diào)FN1與COL1A1表達(dá),從而改善肺纖維化程度。結(jié)論:經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)口服GSE不僅顯著降低BLM誘導(dǎo)的肺部炎癥細(xì)胞聚集和浸潤,改善肺功能,并且能夠顯著抑制纖維化相關(guān)因子,如羥脯氨酸,TGF-β1,MMP-9,COL1A1和FN1的表達(dá)。GSE作為一種天然抗氧化劑,能夠通過p38信號通路抑制EMT和細(xì)胞外基質(zhì)的沉積,顯著改善由博萊霉素導(dǎo)致的小鼠肺功能下降與肺組織損傷。
[Abstract]:Objective: pulmonary fibrosis is a kind of interstitial lung disease, often by a variety of respiratory pathogenic factors, including idiopathic pulmonary fibrosis, chronic obstructive pulmonary disease caused by airway pulmonary fibrosis and airway remodeling. The survival of patients with pulmonary fibrosis only 3-5 years after diagnosis, and will be accompanied by a series of complications. But the treatment and prognosis of pulmonary fibrosis and the lack of medicine, looking for the ideal drugs are effective in the treatment of pulmonary fibrosis has become an important research topic in the field of medicine. In recent years, more and more studies show that the nutrition and efficacy value of grape seed extract has high. Especially the grape seed extract containing proanthocyanidins (Procyanidins), white resveratrol (Resveratrol), lipid can prevent cancer, remove excess free radicals, protects the cardiovascular system, it is a source of natural plant Health care products or drugs with potential development. In our country, the grape is planted in large area, high yield and nutritional value of edible fruit is extremely rich, so the development and utilization of grape seeds with market and broad prospects, and major in sociology, economics significance. This study tries to improve the effect of grape seed extract on bleomycin induced pulmonary fibrosis in mice, and to explore its mechanism of prevention and treatment of pulmonary fibrosis. Methods: the first part: 50 ICR mice were randomly divided into 5 groups, normal control group, model group, GSE50mg/kg, GSE100, mg/kg group, positive control group (DXM 0.5 mg/kg). During the experiment, intraperitoneal injection of pentobarbital sodium in mice 3% (10 mL/kg), after anesthesia supine fixed on the test bench, the neck skin incision, exposing the trachea, tracheal instillation of BLM puncture syringe (2 mg/kg), and then suture the skin of the neck. The control group treated with normal saline In mice by intratracheal instillation. Rats in second days respectively by group intervention, by the test solution with 0.2 mL/20g capacity gavage, the normal group and the model group were given the same amount of solvent, for 21 consecutive days, the administration process regularly recorded in body weight. After the experiment using Buxco animal lung function analysis system for determination of lung the function of mice. The end of the experiment, mice were sacrificed, ligation of the left lung, right pulmonary alveolar lavage, bronchoalveolar lavage fluid (Bronchoalveolar lavage, fluid, BALF), the total number of white blood cell count in the supernatant, detection of TGF- beta 1 and LDH; precipitation is used to count the number of macrophages, lymphocyte count, neutrophil count from lung tissue. Left mouse tissue sections were made for HE staining of lung tissue morphology observation under optical microscope. The second part: 50 ICR mice were randomly divided into 5 groups, normal control group, model group, GSE 50 mg/kg, GSE 100 mg/kg group, positive control group (D XM 0.5 mg/kg) group. Mice received intraperitoneal injection of 3% pentobarbital sodium (10 mL/kg), after anesthesia supine fixed on the test bench, syringe needle tracheal instillation of BLM (2 mg/kg), and then suture the skin of the neck. The saline group with the equal volume of blank control of intratracheal instillation of second days of modeling. According to the group intervention by test solution with 0.2 mL/20g capacity gavage, the normal group and the model group were given the same amount of solvent, lasting for 21 days. After killing the mice, ligation of the left lung, right pulmonary alveolar lavage, bronchoalveolar lavage fluid (Bronchoalveolar lavage, fluid, BALF) was used to detect TGF- beta 1 the content of the mice. Part of left lung tissue and tissue sections were made for Masson staining and immunohistochemistry, in optical microscope observation. The other part of the left lung for the detection of hydroxyproline (Hydroxyproline, HYP) and the content of tissue homogenate was prepared by real-time quantitative PCR (qRT- PCR) assay for detection of EMT associated factors. Results: the first part: compared with the model group, intragastric administration of GSE pulmonary function in mice with pulmonary fibrosis caused by Penh significantly improved BLM value increased, BALF significantly reduced the total number of white blood cells, increased neutrophils and macrophages. The down-regulation of IL-6 in lung tissue, high expression of IL-1 beta mRNA. To alleviate the damage of alveolar structure and lesions of lung tissue induced by BLM decreased LDH content in bronchoalveolar lavage fluid. The second part: the intragastric administration of GSE could significantly decrease the MMP-9 and TIMP-1 mRNA and protein expression in lung tissue, decreased collagen deposition and hydroxyproline induced by BLM in lung tissue level, reduce alveolar lavage fluid in TGF- beta 1 the content of.GSE can inhibit the activation of p38 pathway regulating fibrosis related factors E-cadherin, FN1 and COL1A1 mRNA and protein expression, upregulating the expression of E-cadherin and down-regulation of FN1 COL1A1 expression, so as to improve the degree of pulmonary fibrosis. Theory: the study found that oral administration of GSE not only significantly reduce the pulmonary inflammatory cells of BLM induced aggregation and infiltration, improve lung function, and can significantly inhibit the fibrosis related factors, such as hydroxyproline, TGF- beta 1, MMP-9,.GSE and FN1 COL1A1 expression as a natural antioxidant, can inhibit the deposition of extracellular matrix by EMT and p38 the signal pathway, significantly improved by bleomycin induced mice reduced lung function and lung tissue damage.

【學(xué)位授予單位】：揚(yáng)州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R151

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 邵云東,胡光祥,於洪建,方立軍;葡萄籽提取物的質(zhì)量評價[J];中草藥;2001年11期

2 于紅霞,趙秀蘭,徐貴發(fā),王淑娥;葡萄籽提取物對高脂家兔血脂的影響[J];衛(wèi)生研究;2002年02期

3 于紅霞,王淑娥,趙長峰,徐貴發(fā),趙秀蘭;葡萄籽提取物抗實(shí)驗(yàn)性動脈粥樣硬化作用及其機(jī)理研究[J];衛(wèi)生研究;2002年04期

4 徐貴發(fā),于紅霞,王淑娥,郝風(fēng)榮,劉清君;葡萄籽提取物對小鼠動脈粥樣硬化的作用[J];營養(yǎng)學(xué)報(bào);2002年04期

5 王淑娥,于紅霞,趙秀蘭,郝風(fēng)榮;葡萄籽提取物對小鼠血脂水平的影響[J];實(shí)用預(yù)防醫(yī)學(xué);2002年05期

6 于紅霞,徐貴發(fā),王淑娥,郝鳳榮;葡萄籽提取物抗動脈粥樣硬化形成的實(shí)驗(yàn)研究[J];山東大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2003年01期

7 丁玉松;馬龍;王忠;劉濤;;葡萄籽提取物對小鼠急性化學(xué)性肝損傷保護(hù)作用的實(shí)驗(yàn)研究[J];新疆醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2007年11期

8 周靜;;加熱對葡萄籽提取物抗氧化活性的影響[J];國外醫(yī)藥(植物藥分冊);2007年05期

9 郭磊;楊靜玉;王芳;吳春福;;葡萄籽提取物化學(xué)成分及藥理活性的研究進(jìn)展[J];沈陽藥科大學(xué)學(xué)報(bào);2008年S1期

10 胡德良;;葡萄籽提取物有望用來治療血癌[J];生命與災(zāi)害;2009年03期

相關(guān)會議論文 前10條

1 豐佃娟;徐貴發(fā);;不同劑量的葡萄籽提取物對人體抗氧化能力的影響[A];山東營養(yǎng)學(xué)會營養(yǎng)產(chǎn)業(yè)與功能食品成分學(xué)術(shù)研討會論文匯編[C];2007年

2 郭磊;楊靜玉;王芳;吳春福;;葡萄籽提取物化學(xué)成分及藥理活性的研究進(jìn)展[A];兩岸三地藥理學(xué)與臨床藥理學(xué)術(shù)會議論文集[C];2008年

3 汪晨凈;景志敏;;葡萄籽提取物對大鼠心肌缺血再灌注損傷的保護(hù)作用[A];中國生理學(xué)會第21屆全國代表大會暨學(xué)術(shù)會議論文摘要匯編[C];2002年

4 李樹田;程義勇;耿占輝;王冬蘭;于志杰;石慧琳;;葡萄籽提取物抗氧化效果觀察[A];中國營養(yǎng)學(xué)會特殊營養(yǎng)第五屆學(xué)術(shù)會議論文摘要匯編[C];2002年

5 陳群;王冬;邢正;代博;周杰;;葡萄籽提取物的提取鑒定及抗紫外線損傷活性初探[A];中國化學(xué)會第28屆學(xué)術(shù)年會第3分會場摘要集[C];2012年

6 高軍濤;萬謙;李美芬;呼俊改;湯暢;趙保路;;葡萄籽提取物對鼠心肌線粒體膜的保護(hù)作用[A];第七屆全國生物膜學(xué)術(shù)討論會論文摘要匯編[C];1999年

7 張俊剛;徐穎;陳淑芬;楊衛(wèi)超;姜紅;郭金銘;;葡萄籽提取物復(fù)合物對溴代苯油造模小鼠抗氧化作用的研究[A];第四屆第二次中國毒理學(xué)會食品毒理學(xué)專業(yè)委員會與營養(yǎng)食品所毒理室聯(lián)合召開學(xué)術(shù)會議論文集[C];2008年

8 袁小英;劉瑋;范立英;信許亞;田燕;馬慧敏;;外用葡萄籽提取物原花青素對皮膚急性光損傷防護(hù)作用的研究[A];中華醫(yī)學(xué)會第14次全國皮膚性病學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2008年

9 周素娟;;葡萄籽提取物原花青素的研究概況及其在我國保健食品中的應(yīng)用分析[A];食物功效成分與健康——達(dá)能營養(yǎng)中心第九次學(xué)術(shù)年會會議論文集[C];2006年

10 矢部信良;上原靜香;;葡萄籽提取物高含量原青花素對黑色素生成的抑制效果[A];2008全國中西醫(yī)結(jié)合皮膚性病學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2008年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前3條

1 黎星;葡萄籽提取物能殺死白血病細(xì)胞[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2009年

2 鄭鵬遠(yuǎn);萊茵生物5億元定增募投項(xiàng)目被指夸大[N];中國醫(yī)藥報(bào);2014年

3 高小扁;別誤讀這些保健食品[N];21世紀(jì)藥店;2014年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前1條

1 劉潔;葡萄籽提取物原花青素對人膀胱癌細(xì)胞生長的抑制作用及機(jī)制研究[D];華中科技大學(xué);2009年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 朱旺;葡萄籽提取物減緩西雜肉�？漳c上皮細(xì)胞熱應(yīng)激反應(yīng)的功能與機(jī)制研究[D];西南大學(xué);2015年

2 沈曉喻;葡萄籽提取物對小麥粉饅頭的品質(zhì)、抗老化的影響及其機(jī)理研究[D];合肥工業(yè)大學(xué);2017年

3 劉沖沖;葡萄籽提取物合成銀/類石墨烯片狀納米復(fù)合材料及其抗菌性能研究[D];魯東大學(xué);2017年

4 王淑娥;葡萄籽提取物抗動脈粥樣硬化作用研究[D];山東大學(xué);2006年

5 豐佃娟;不同劑量葡萄籽提取物對過氧化損傷動物模型及人體抗氧化功能影響的研究[D];山東大學(xué);2008年

6 丁玉松;葡萄籽提取物對肝損傷保護(hù)作用的實(shí)驗(yàn)研究[D];新疆醫(yī)科大學(xué);2007年

7 唐紅;番茄紅素與葡萄籽提取物聯(lián)合降血脂作用的研究[D];新疆醫(yī)科大學(xué);2010年

8 李曉敏;葡萄籽提取物減緩肉牛熱應(yīng)激反應(yīng)的功能與機(jī)制研究[D];西南大學(xué);2014年

9 王夏青;葡萄籽提取物抗氧化物質(zhì)的閃式提取與分離及中外紅酒的質(zhì)量評價[D];遼寧中醫(yī)藥大學(xué);2009年

10 施桔紅;葡萄籽提取物促進(jìn)早期牙本質(zhì)焤損再礦化作用的體外研究[D];浙江中醫(yī)藥大學(xué);2015年

，

本文編號：1428320