發(fā)布時(shí)間：2017-12-11 12:09

  本文關(guān)鍵詞：PM2.5中的礦物粉塵對(duì)V79細(xì)胞毒性研究

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【摘要】：目的：選取PM2.5中礦物主要成分方解石、鈉長(zhǎng)石、石英、絹云母等粉塵，將四種礦物粉塵分別作用于中國(guó)倉(cāng)鼠肺細(xì)胞（Chinese Hamster LungCell，V79細(xì)胞），研究其對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生的毒性作用，探討其產(chǎn)生毒性作用的相關(guān)機(jī)制。方法：（1）采用X射線熒光光譜分析法測(cè)定原礦物樣品化學(xué)組成，經(jīng)激光粒度分析儀分析四種礦物粉塵粒徑分布。（2）實(shí)驗(yàn)組選取處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的V79細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞濃度后分別加入50、100、200、400μg/ml的四種礦物粉塵懸液，設(shè)置陰性對(duì)照組加入相同劑量的細(xì)胞培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)24h后。用噻唑藍(lán)（MTT）實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞增殖情況，比較各組細(xì)胞的存活率。（3）瑞氏-吉姆薩(Wright-Giemsa)染色，油鏡下觀察各組細(xì)胞形態(tài)改變，計(jì)數(shù)微核細(xì)胞千分率。（4）彗星實(shí)驗(yàn)（SCGE）檢測(cè)各組細(xì)胞DNA的損傷程度。每種濃度隨機(jī)選取100個(gè)細(xì)胞彗星圖像，CASP彗星分析軟件分析彗星圖像，以尾矩(OTM)作為分析指標(biāo)。（5）直線相關(guān)分析方法分析V79細(xì)胞存活率同微核率、尾矩（OTM）值相關(guān)性。（6）酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測(cè)各組細(xì)胞上清液中白細(xì)胞介素-6（IL-6）含量，分析礦物粉塵產(chǎn)生毒性作用的相關(guān)機(jī)制。結(jié)果：（1）實(shí)驗(yàn)所選用礦物粉塵石英、絹云母、鈉長(zhǎng)石的化學(xué)組成成分中所含二氧化硅（SiO2）含量最高，而礦物粉塵方解石所含氧化鈣（CaO）含量最高；四種礦物粉塵經(jīng)檢測(cè)其平均粒徑均2.5um，符合實(shí)驗(yàn)要求。（2）同對(duì)照組相比較，四種礦物粉塵均能影響V79細(xì)胞存活率，隨礦物濃度的增高，細(xì)胞存活率降低，細(xì)胞存活率與礦物粉塵的濃度呈現(xiàn)劑量-效應(yīng)關(guān)系；與礦物鈉長(zhǎng)石、方解石相比較，礦物石英、絹云母導(dǎo)致細(xì)胞存活率下降更加明顯。（3）隨著四種礦物粉塵濃度的增加，，細(xì)胞微核率均有增加，其微核率從大到小順序?yàn)椋航佋颇福臼ⅲ锯c長(zhǎng)石＞方解石。各粉塵組在400ug/ml的高濃度時(shí)，其微核率同陰性對(duì)照組比較，均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05），鈉長(zhǎng)石、石英和絹云母三種礦物在此濃度的細(xì)胞微核率與陰性對(duì)照組更是有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.01）。（4）四種礦物粉塵對(duì)V79細(xì)胞的DNA損傷呈現(xiàn)劑量-效應(yīng)關(guān)系，礦物粉塵濃度越高，DNA損傷越明顯。鈉長(zhǎng)石、石英和絹云母高濃度暴露組的細(xì)胞OTM值與陰性對(duì)照組比較，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）。（5）暴露在不同礦物粉塵中的細(xì)胞存活率的變化同細(xì)胞微核率的變化均呈現(xiàn)負(fù)相關(guān)，細(xì)胞存活率的變化同細(xì)胞OTM值的變化同樣均呈現(xiàn)負(fù)相關(guān)。（6）四種礦物粉塵均能使V79細(xì)胞培養(yǎng)液上清液中的IL-6含量升高，其中石英和絹云母暴露組濃度升至100μg/ml及以上，其IL-6含量與陰性對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）。而鈉長(zhǎng)石、方解石兩種礦物同對(duì)照組相比，差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論：四種PM2.5中的主要礦物粉塵方解石、鈉長(zhǎng)石、石英、絹云母均能導(dǎo)致細(xì)胞毒性，其細(xì)胞毒性與礦物粉塵的濃度呈劑量-效應(yīng)關(guān)系；四種礦物粉塵均能增加細(xì)胞微核數(shù)量，對(duì)細(xì)胞DNA產(chǎn)生明顯的損傷效應(yīng)，進(jìn)一步證實(shí)礦物粉塵對(duì)細(xì)胞能產(chǎn)生毒性作用；四種礦物粉塵能刺激細(xì)胞炎性因子增加，由此推測(cè)炎癥因子激活可能是礦物粉塵對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生毒性的機(jī)制之一。
【學(xué)位授予單位】：瀘州醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R114

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前6條

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本文編號(hào)：1278388