發(fā)布時間：2017-12-11 05:05

  本文關鍵詞：博落回生物堿對豬腸上皮細胞增殖作用及胃泌素表達的影響研究

  更多相關文章： 博落回生物堿 豬腸上皮細胞(IPEC-1) 人類肝癌細胞(HepG2) 增殖 胃泌素

【摘要】：本論文通過體外細胞培養(yǎng)實驗,探討了博落回生物堿對腸上皮細胞IPEC-1增殖作用及胃泌素表達的影響。 首先,博落回生物堿對腸上皮細胞增殖試驗旨在研究博落回中血根堿、白屈菜紅堿、原阿片堿和別隱品堿在不同濃度、不同時間段對豬腸上皮細胞(IPEC-1)增殖的影響。IPEC-1預培養(yǎng)24h后,在培養(yǎng)基中分別加入不同濃度(4、2、1、0.5、0.25、0.1、0.05、0.025、0.0125、0.00625μg/mL的血根堿或白屈菜紅堿；100、50、25、12.5、6.25、3.125、1.5625μg/mL的原阿片堿或別隱品堿,各組不同濃度梯度均設8個重復)的博落回生物堿處理12或24h,4-甲基偶氮唑鹽(MTT)染色法檢測細胞增殖。結果表明：0.25～4μg/mL的血根堿、0.25～4μg/mL的白屈菜紅堿、100μg/mL的原阿片堿或別隱品堿對IPEC-1細胞的生長有顯著的抑制作用(P0.05)；而0.00625～0.1μg/mL的血根堿、0.00625～0.1μg/mL的白屈菜紅堿、3.125～25μg/mL的原阿片堿或1.5625～25μg/mL的別隱品堿對IPEC-1增殖具有明顯的促進作用(P0.05),隨著博落回生物堿濃度的不斷下降,這種促進作用又緩慢減弱；此外,延長博落回生物堿處理時間至24h,發(fā)現(xiàn)僅0.1μg/mL的白屈菜紅堿、25μg/mL的原阿片堿和25μg/mL的別隱品堿對IPEC-1增殖具有顯著促進作用(P0.05),其余各組與對照組相比均無顯著性差異(P0.05)。由此可見,博落回生物堿在一定濃度范圍可促進IPEC-1的增殖。這說明博落回生物堿提高動物生長性能可能是通過促進小腸細胞增殖分化更新,從而增強小腸消化、吸收、免疫屏障和應激反應等功能的途徑實現(xiàn)的。 其次,博落回對胃泌素及其受體表達影響的試驗旨在研究博落回中血根堿、白屈菜紅堿、原阿片堿和別隱品堿對正常IPEC-1、人肝癌HepG2的增殖影響,并探討胃泌素及其受體表達與細胞增殖和凋亡之間的關系。IPEC-1和HepG2細胞用不同濃度梯度的胃泌素(10-5～0-10mol/L)處理12h后,采用MTT染色法檢測細胞增殖情況。結果表明,10-7～10-10mol/L胃泌素對兩種細胞增殖都具有顯著的促進作用(P0.05),而經(jīng)高濃度10-5～10-6nol/L胃泌素處理的兩種細胞與對照組相比均無顯著性差異(P0.05)。通過回收細胞及上清液,用ELISA法檢測經(jīng)血根堿、白屈菜紅堿、原阿片堿和別隱品堿處理的IPEC-1和HepG2細胞中胃泌素及其受體的表達水平。結果顯示：以上博落回生物堿經(jīng)處理后的IPEC-1細胞中胃泌素及其受體的表達有顯著的上升(P0.05),而對HepG2細胞中胃泌素無顯著性(P0.05),但對其受體的表達表現(xiàn)出顯著的抑制作用(P0.05)。 然后,進一步用Western Blotting法檢測了各博落回生物堿(血根堿、白屈菜紅堿、原阿片堿和別隱品堿)處理HepG2細胞后,其胃泌素及其受體表達水平的影響。結果顯示：隨著血根堿、白屈菜紅堿、原阿片堿或別隱品堿的濃度上升,HepG2細胞中胃泌素及其受體的表達呈顯著的抑制增強趨勢(P0.05),這與ELISA法結果一致。說明博落回生物堿可能具有通過對胃泌素的調節(jié)作用促進胃腸道正常上皮細胞增殖并能抑制腫瘤細胞生長的效果。
【學位授予單位】：湖南農(nóng)業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R151

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本文編號：1277246