本文關(guān)鍵詞：壬基酚對(duì)雄性SD大鼠生殖系統(tǒng)功能的影響

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【摘要】：目的：壬基酚（nonylphenol，NP）是一種廣泛使用的化工原料，主要用于合成洗滌劑、造紙、紡織印染、皮革化工、乳液聚合、農(nóng)藥等工業(yè)領(lǐng)域。隨著經(jīng)濟(jì)的飛速發(fā)展，我國(guó)每年都有大量的壬基酚通過(guò)工業(yè)“三廢”及生活污水進(jìn)入環(huán)境介質(zhì)。壬基酚具有擬雌激素活性，是典型的環(huán)境內(nèi)分泌干擾物。環(huán)境中極低濃度的壬基酚即可通過(guò)生物蓄積效應(yīng)和食物鏈傳遞，潛在危害生物體的內(nèi)分泌、生殖、免疫、神經(jīng)等多個(gè)系統(tǒng)機(jī)能。目前，關(guān)于雄性動(dòng)物成年期壬基酚染毒對(duì)生殖器官、性激素水平及精子受精功能影響的研究較少，特別是精子頂體相關(guān)指標(biāo)、附睪抗氧化狀態(tài)及凋亡等方面的研究尚未見報(bào)道。本課題通過(guò)對(duì)成年雄性SD大鼠灌胃染毒，研究壬基酚對(duì)大鼠睪丸、附睪和精子的損傷作用，探討其對(duì)雄性大鼠生殖功能的影響及其可能的毒作用機(jī)制。 方法：32只健康成年SPF級(jí)雄性SD大鼠，經(jīng)適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后，按體重隨機(jī)分為4組：溶劑對(duì)照組（玉米油）和低（40mg/kg）、中（100mg/kg）、高劑量（250mg/kg）壬基酚染毒組，每組8只。從大鼠12周齡開始，采取灌胃方式染毒，容量1.5ml/kg，隔天上午染毒1次，連續(xù)90d。（1）一般狀況及體重：每日觀察動(dòng)物的飲食和活動(dòng)情況，注意大鼠被毛、皮膚、眼睛、呼吸以及日常行為方面的變化。隔天稱重一次；（2）大鼠處死后，分離雙側(cè)睪丸、附睪和附睪尾，稱重，并計(jì)算相應(yīng)的臟器系數(shù)；（3）蘇木素-伊紅（HE）染色，觀察大鼠睪丸組織病理學(xué)改變；（4）腹主動(dòng)脈采血，分離血清，酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測(cè)血清睪酮水平；（5）制備附睪尾精子懸液，利用光學(xué)顯微鏡及活細(xì)胞工作站，計(jì)數(shù)精子濃度、畸形率和活動(dòng)度；（6）通過(guò)使用相應(yīng)熒光探針和流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)精子存活率、頂體完整性、線粒體膜電位（MMP）和游離鈣離子（[Ca2+]i）水平；（7）采用改良Kenndy法檢測(cè)精子頂體酶活性；（8）通過(guò)流式細(xì)胞儀和熒光染料（H2DCFDA）檢測(cè)附睪尾精子活性氧（ROS）水平；（9）利用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)附睪組織抗氧化物酶（（超氧化物歧化酶，SOD）和（過(guò)氧化氫酶，CAT））活性；（10）使用TUNEL法評(píng)估壬基酚對(duì)附睪凋亡誘導(dǎo)效應(yīng)。 結(jié)果：（1）染毒后，各劑量壬基酚染毒組大鼠均出現(xiàn)精神萎靡、稀便、被毛不舒展、毛發(fā)灰暗甚至脫毛現(xiàn)象，組間差異不明顯。高劑量組大鼠在灌胃時(shí)反抗較強(qiáng)烈，攻擊性行為在染毒后期明顯增強(qiáng)。各染毒組大鼠體重與溶劑對(duì)照組比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。（2）與溶劑對(duì)照組比較，僅低、高壬基酚染毒組大鼠的附睪重量顯著下降。各染毒組大鼠睪丸、附睪和附睪尾的臟器系數(shù)與溶劑對(duì)照組比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。（3）病理學(xué)檢查發(fā)現(xiàn)，溶劑對(duì)照組大鼠睪丸曲細(xì)精管排列緊密、結(jié)構(gòu)完整，生精上皮基膜完整，各級(jí)生精細(xì)胞層排列規(guī)則、層次清楚；低劑量壬基酚染毒組曲細(xì)精管結(jié)構(gòu)相對(duì)規(guī)則、大小一致，管間隙略有增大，生精細(xì)胞層基本完整；中、高劑量壬基酚染毒組睪丸出現(xiàn)部分曲細(xì)精管萎縮、管間隙增大，生精細(xì)胞層變薄、結(jié)構(gòu)排列紊亂，管腔內(nèi)精子細(xì)胞數(shù)量減少，部分管腔可見脫落的上皮細(xì)胞碎片。（4）與溶劑對(duì)照組比較，低劑量壬基酚染毒組大鼠血清睪酮水平略有升高，中、高劑量組睪酮水平有所降低，但僅高劑量組睪酮水平降低明顯，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。（5）附睪尾精子計(jì)數(shù)、活動(dòng)度隨著染毒劑量的增加而逐漸降低，而精子畸形率隨著染毒劑量的增加而逐漸升高。與溶劑對(duì)照組比較，中、高劑量壬基酚染毒組大鼠附睪尾精子數(shù)量顯著減少、活動(dòng)度顯著降低、畸形率顯著增加。（6）流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果顯示，與溶劑對(duì)照組比較，中、高劑量壬基酚染毒組精子的（PI-/PNA+）%明顯升高；高劑量壬基酚染毒組大鼠精子hMMP%顯著降低；各劑量壬基酚染毒組大鼠精子存活率和[Ca2+]i水平均無(wú)明顯變化；隨壬基酚染毒劑量的升高，精子頂體完整性和MMP的水平呈逐漸降低的趨勢(shì)。（7）與溶劑對(duì)照組比較，高劑量壬基酚染毒組精子的頂體酶活力下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；隨著壬基酚染毒劑量的升高，精子頂體酶活力呈逐漸降低的趨勢(shì)。（8）與溶劑對(duì)照組比較，壬基酚染毒組大鼠精子細(xì)胞內(nèi)ROS水平均有所升高，但僅高劑量組精子ROS顯著升高。（9）與溶劑對(duì)照組比較，壬基酚染毒組大鼠附睪組織SOD和CAT活性均有所下降，其中低、高劑量組CAT活性以及高劑量組SOD活性均顯著下降。（10）TUNEL檢測(cè)結(jié)果顯示：各組大鼠附睪組織均見凋亡陽(yáng)性信號(hào)表達(dá)，且凋亡細(xì)胞主要是退化的附睪管上皮細(xì)胞，位于附睪管基底部；與溶劑對(duì)照組比較，低、高劑量壬基酚染毒組大鼠附睪組織凋亡陽(yáng)性細(xì)胞百分比顯著升高；高劑量組附睪組織凋亡陽(yáng)性細(xì)胞顯色強(qiáng)度呈強(qiáng)陽(yáng)性，其余劑量組凋亡陽(yáng)性細(xì)胞顯色強(qiáng)度呈陽(yáng)性。 結(jié)論：（1）壬基酚于大鼠成年期在體暴露，可使附睪重量明顯下降，提示壬基酚對(duì)附睪組織存在損害作用；同時(shí)壬基酚染毒對(duì)大鼠體重和睪丸重量則未顯現(xiàn)出明顯的影響。（2）組織病理學(xué)檢查提示，隨壬基酚染毒劑量的增加，睪丸曲細(xì)精管損傷程度逐漸加重。（3）壬基酚可導(dǎo)致血清睪酮水平明顯降低，提示壬基酚能擾亂內(nèi)分泌激素水平，從而對(duì)雄性生殖系統(tǒng)產(chǎn)生毒性作用。（4）壬基酚暴露可使大鼠附睪尾精子數(shù)量顯著減少、畸形率顯著增加，提示壬基酚可能造成成年雄性生精障礙。（5）壬基酚暴露可影響精子活動(dòng)度、MMP、頂體完整性及頂體酶活性，表明壬基酚對(duì)精子受精功能具有一定損傷作用；但是壬基酚對(duì)精子存活率和[Ca2+]i沒(méi)有明顯的影響作用，提示NP對(duì)精子受精功能的影響可能不是通過(guò)改變[Ca2+]i水平而發(fā)揮作用的。（6）壬基酚暴露可升高大鼠附睪尾精子ROS水平，造成精子氧化應(yīng)激增加。提示，壬基酚所致精子ROS增加可能是影響精子受精功能的機(jī)制之一。（7）壬基酚暴露可影響附睪組織SOD和CAT活性，，也可誘導(dǎo)附睪組織發(fā)生凋亡。提示壬基酚對(duì)附睪組織具有一定毒性，可能是造成臟器重量降低及精子功能變化的原因之一。
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R114

【參考文獻(xiàn)】

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