本文關(guān)鍵詞：綠原酸、葛根黃酮、松針多糖及其復(fù)合物免疫調(diào)節(jié)作用的研究

  更多相關(guān)文章： 綠原酸 葛根黃酮 松針多糖 腹腔巨噬細(xì)胞 免疫調(diào)節(jié) 免疫印跡

【摘要】：綠原酸(Chlorogenic acid,CGA)、松針多糖(Polysaccharides from pine needles)及葛根黃酮(Pueraria flavone,RPI)是三種分布廣泛、較易獲得的天然產(chǎn)物,具有多種生理活性。為了研究其在免疫應(yīng)答中的作用,本文采用小鼠腹腔巨噬細(xì)胞為模型,研究了綠原酸、葛根黃酮、松針多糖及其復(fù)合物對靜息狀態(tài)及LPS激活狀態(tài)下小鼠腹腔巨噬細(xì)胞功能的影響及其機制。通過腹腔注射法提取小鼠腹腔巨噬細(xì)胞,MTT(噻唑藍(lán))比色法檢測細(xì)胞代謝活力,中性紅吞噬實驗檢測巨噬細(xì)胞的吞噬能力,Griess試劑盒法檢測細(xì)胞產(chǎn)生NO的量,酶聯(lián)免疫法(ELISA)檢測巨噬細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)上清液中促炎細(xì)胞因子IL-1β、TNF-α及抑炎細(xì)胞因子IL-10的分泌水平,RT-PCR法檢測細(xì)胞細(xì)胞因子及I型干擾素基因表達(dá)量,West-blot測定MAPK通路下p38MAPK、JNK和ERK以及各自的磷酸化蛋白含量的變化,探討復(fù)合物的免疫調(diào)節(jié)作用。研究結(jié)果如下:(1)不同濃度的CGA均能顯著促進(jìn)靜息狀態(tài)下小鼠腹腔巨噬細(xì)胞產(chǎn)生NO,在濃度為25~100μg/mL時可提高巨噬細(xì)胞代謝活力,高劑量(50~100μg/mL)的CGA可增強巨噬細(xì)胞的吞噬能力,促進(jìn)IL-1β、TNF-α的分泌并減少IL-10的產(chǎn)生,增強機體免疫力,且呈現(xiàn)劑量依賴性;當(dāng)巨噬細(xì)胞處于LPS刺激狀態(tài)時,在CGA濃度為25~100μg/mL可協(xié)同LPS增強其吞噬能力、促進(jìn)IL-1β的釋放;高劑量(50~100μg/mL)的CGA能增加促炎細(xì)胞因子TNF-α的釋放,減少抗炎細(xì)胞因子IL-10的分泌量。(2)不同濃度RPI均能促進(jìn)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞產(chǎn)生IL-10,在濃度大于12.5μg/mL時可抑制巨噬細(xì)胞產(chǎn)生NO及TNF-α,高濃度(50~100μg/mL)的RPI可抑制巨噬細(xì)胞的吞噬能力、促進(jìn)IL-10的釋放,且呈劑量依賴性;當(dāng)巨噬細(xì)胞處于LPS刺激狀態(tài)時,高濃度的RPI能抑制LPS對巨噬細(xì)胞中NO和IL-1β的產(chǎn)生,當(dāng)RPI濃度小于25μg/mL時,LPS加RPI共刺激對巨噬細(xì)胞產(chǎn)生IL-10和TNF-α無影響。(3)不同濃度的松針多糖均能促進(jìn)靜息狀態(tài)下小鼠腹腔巨噬細(xì)胞產(chǎn)生NO,當(dāng)其濃度大于25μg/mL時能增強巨噬細(xì)胞的吞噬能力,促進(jìn)TNF-α和IL-1β的釋放。高濃度的(100~200μg/mL)松針多糖能顯著抑制IL-10的產(chǎn)生;不同濃度的松針多糖均能協(xié)同LPS釋放大量TNF-α。當(dāng)松針多糖濃度大于50μg/mL時,LPS松針多糖共刺激組能顯著地增強巨噬細(xì)胞吞噬能力,促進(jìn)巨噬細(xì)胞釋放NO、促炎因子TNF-α和IL-1β,抑制IL-10的產(chǎn)生,并呈劑量依賴性。(4)通過對葛根黃酮、松針多糖及綠原酸三種物質(zhì)作為單因素進(jìn)行正交試驗,結(jié)果分析得出,當(dāng)復(fù)合物中CGA濃度為100μg/mL,RPI濃度為50μg/mL,松針多糖濃度為200μg/mL時協(xié)同效果最佳,能顯著增強巨噬細(xì)胞吞噬能力、產(chǎn)生促炎細(xì)胞因子及NO的量,且效果最佳。RT-PCR結(jié)果顯示,復(fù)合物能促進(jìn)靜息狀態(tài)及經(jīng)LPS刺激狀態(tài)下小鼠腹腔巨噬細(xì)胞釋放促炎細(xì)胞因子IL-1β、TNF-α和I型干擾素分泌表達(dá)量,抑制抑炎細(xì)胞因子IL-10基因表達(dá),且效果顯著。(5)復(fù)合物單獨刺激、LPS共刺激小鼠腹腔巨噬細(xì)胞一定時間(0h,4h,8h)后,檢測MAPK信號通路的p38MAPK、ERK、JNK及其磷酸化蛋白表達(dá)量,結(jié)果表明:復(fù)合物單獨刺激及LPS復(fù)合物共刺激組4h和8h時,ERK、p-ERK表達(dá)量下降,p38MAPK、p-p38MAPK、JNK、p-JNK表達(dá)量上升。
【學(xué)位授予單位】：江西農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R151

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 郭建平,孫其榮,姚康德,周全,成國祥,郭紅霞;葛根黃酮載藥系統(tǒng)表征[J];中國藥學(xué)雜志;2001年11期

2 陳迪華，斯建勇，常琪，沈連鋼;從生產(chǎn)葛淀粉的廢水液中回收葛根黃酮的研究──葛根黃酮生產(chǎn)新工藝[J];中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院學(xué)報;1996年01期

3 萬平,宛曉春,楊曉春,陸翠珍,稽躍琴;葛根黃酮生物合成的研究[J];安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報;1997年02期

4 郭U，

本文編號：1244529