本文關(guān)鍵詞：基于重鏈抗體的全氟辛酸免疫檢測(cè)的研究

  更多相關(guān)文章： PFOA 完全抗原 重鏈抗體 間接競(jìng)爭(zhēng)性ELISA

【摘要】：全氟辛酸(Perfluorooctanoic acid,PFOA)是一種對(duì)人體有潛在健康危害的全氟化合物(PFCs)。PFOA具有疏水疏油的特性,20世紀(jì)大量生產(chǎn)使用,對(duì)生態(tài)系統(tǒng)和人類健康的影響已經(jīng)引起人們的高度關(guān)注�，F(xiàn)在,PFOA的檢測(cè)主要依賴大型儀器,比如液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用儀(LC-MS/MS),檢測(cè)準(zhǔn)確性高,檢測(cè)限低,但是,這些方法有很大的局限性,儀器笨重,檢測(cè)昂貴,通量低,不適于現(xiàn)場(chǎng)的快速高通量檢測(cè)。本研究應(yīng)用抗原抗體特異性結(jié)合的原理,制備一種針對(duì)PFOA的特異性抗體,用于PFOA的高通量快速檢測(cè)。我們應(yīng)用碳二亞胺法,將PFOA與牛血清白蛋白BSA偶聯(lián),合成完全抗原,經(jīng)SDS-PAGE電泳和離子色譜儀定性檢測(cè),證明完全抗原合成成功。用三硝基苯磺酸法法測(cè)定偶聯(lián)比,計(jì)算得到偶聯(lián)比為9。以此完全抗原作為包被抗原,用重鏈抗體文庫(kù)進(jìn)行篩選,得到7株陽(yáng)性克隆,并對(duì)重鏈抗體基因進(jìn)行修飾,利用原核生物蛋白表達(dá)系統(tǒng)進(jìn)行蛋白表達(dá),得到5個(gè)抗體蛋白,以間接競(jìng)爭(zhēng)性ELISA方法對(duì)抗體蛋白進(jìn)行活性鑒定,獲得1個(gè)有活性的抗體,有望用于建立快速檢測(cè)不同介質(zhì)中PFOA的免疫學(xué)方法。
【學(xué)位授予單位】：上海交通大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R114

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