本文關(guān)鍵詞：花生過敏原酶聯(lián)免疫分析方法的建立

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【摘要】：本論文采用硫酸銨分級沉淀法提取制備了花生總蛋白和Ara h1過敏原蛋白,并免疫動物制備了兔、鼠多克隆抗體。針對花生總蛋白兔、鼠抗血清采用了免疫印跡法分析,證明兔多抗可識別分子量為63.5、61、57、17和15kDa的過敏原蛋白,鼠多抗可識別63.5、61、57kDa過敏原蛋白。 優(yōu)化建立了花生總蛋白的間接競爭酶聯(lián)免疫方法,IC5o為1.18μg/mL。 分別針對花生總蛋白和Ara h1過敏原蛋白優(yōu)化建立了雙抗體夾心酶聯(lián)免疫分析方法�；ㄉ偟鞍椎膬�(yōu)化條件為：捕獲抗體的包被量為0.075μg/孔,封閉液為0.5%脫脂乳粉,花生總蛋白從4μg/mL開始1.5倍梯度稀釋,共7個梯度,檢測抗體的稀釋倍數(shù)為1：25000,HRP標記羊抗鼠二抗1：10000倍稀釋,37℃顯色20mmin,檢測限為40.48ng/mL。且利用花生總蛋白抗體檢測Ara h1過敏原蛋白,建立了雙抗體夾心ELISA方法,檢測限為8.38ng/mL。 Ara h1過敏原蛋白的優(yōu)化條件為：捕獲抗體的包被量為0.075μg/孔,封閉液為0.5%脫脂乳粉,Ara h1過敏原蛋白從1μg/mL開始2倍梯度稀釋,共7個梯度,檢測抗體的稀釋倍數(shù)為1：40000,HRP標記羊抗鼠二抗1：10000倍稀釋,37℃顯色20mmin,檢測限為1.38ng/mL。這兩種雙抗體夾心免疫檢測方法與14種植物性蛋白均沒有交叉反應。 這兩種夾心ELISA方法的板間變異為2.02%-12.00%、板內(nèi)變異為0.68%-4.56%,說明所建立的ELISA方法具有良好的重現(xiàn)性。選擇餅干、面包和牛奶樣品,分別采用花生總蛋白和Ara h1過敏原蛋白雙抗體夾心ELISA方法檢測,樣品添加回收率分別達87.14%-154.80%、70.30～110.05%。
【學位授予單位】：天津科技大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R155.5

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 易海濤;劉志剛;閆浩;劉芳;趙郭存;夏立新;;花生過敏原Ara h2.02的克隆、表達及免疫學鑒定[J];江西師范大學學報(自然科學版);2010年05期

2 陳瑋;;液相芯片技術(shù)的原理與應用進展[J];成都醫(yī)學院學報;2008年03期

3 陳旭;齊鳳坤;康立功;李景富;;實時熒光定量PCR技術(shù)研究進展及其應用[J];東北農(nóng)業(yè)大學學報;2010年08期

4 余清;黃紅霞;劉紹文;;食品過敏原及其檢測分析技術(shù)[J];質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督研究;2009年02期

5 袁亞男;劉文忠;;實時熒光定量PCR技術(shù)的類型、特點與應用[J];中國畜牧獸醫(yī);2008年03期

6 何偉逸;吳序櫟;劉志剛;黃海珍;李瑤;葉燁;曹鶴瑤;;陰離子交換層析法分離純化花生主要過敏原Ara h1的研究[J];現(xiàn)代食品科技;2013年04期

7 徐宏;沈亮亮;胡章立;肖杰;肖華新;吳錦霞;李逸;魏波;倪卓;吳序櫟;劉志剛;;花生過敏原Ara h1的熱變性及其與還原糖相互作用的研究[J];光譜學與光譜分析;2013年08期

8 易海濤;劉芳;賈夢陽;湯慕瑾;曹小勇;夏立新;劉志剛;;經(jīng)基因工程改造的花生主要過敏原Ara h 2制備及其低致敏原性鑒定[J];江西農(nóng)業(yè)大學學報;2011年05期

9 鄒澤紅;何穎;阮林;孫寶清;陳惠芳;陳德;劉世明;楊曉光;陶愛林;;85種轉(zhuǎn)化基因的過敏原性生物信息學評價[J];科學通報;2012年16期

10 楊勇,闞建全,趙國華,付陳梅;食物過敏與食物過敏原[J];糧食與油脂;2004年03期

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本文編號：1228404