本文關(guān)鍵詞：納豆菌糖肽對小鼠巨噬細胞的免疫調(diào)節(jié)作用及相關(guān)機理的研究

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【摘要】：本文研究了納豆菌糖肽(BNGP),對正常狀態(tài)及脂多糖(LPS)激活狀態(tài)巨噬細胞的免疫調(diào)節(jié)作用及其相關(guān)機制,采用不同濃度的BNGP單獨處理或LPS和不同濃度的BNGP共同處理RAW264.7巨噬細胞,檢測各項指標,研究結(jié)果如下:1、從小鼠腹腔中分離、培養(yǎng)小鼠腹腔巨噬細胞,采用噻唑藍(MTT)比色法檢測細胞增殖作用,中性紅吞噬試驗檢測吞噬能力,Griess試劑檢測細胞培養(yǎng)上清液中NO含量,酶聯(lián)免疫分析法(ELISA)檢測細胞培養(yǎng)上清液中細胞因子(IL-1β、TNF-α)、促炎介質(zhì)(PGE2)含量。試驗結(jié)果顯示:納豆菌糖肽(BNGP)在31.25-500μg/mL濃度范圍內(nèi)對小鼠腹腔巨噬細胞的代謝活力均有顯著提升作用,在62.5-500μg/m L濃度范圍內(nèi)對細胞分泌NO、IL-1β、TNF-α、PGE2有顯著的促進作用,并呈現(xiàn)出一定的劑量相關(guān)性,其中BNGP濃度為500μg/mL時促進作用最大。當細胞處于LPS激活狀態(tài)時,BNGP在62.5-500μg/m L濃度范圍內(nèi)能協(xié)同LPS增強巨噬細胞的吞噬能力,但能抑制IL-1β、TNF-α、PGE2的分泌,而對NO的分泌無顯著影響。2、培養(yǎng)RAW264.7巨噬細胞,采用噻唑藍(MTT)比色法檢測細胞增殖作用,中性紅吞噬試驗檢測吞噬能力,Griess試劑檢測細胞培養(yǎng)上清液中NO含量,酶聯(lián)免疫分析法(ELISA)檢測細胞培養(yǎng)上清液中細胞因子(IL-1β、TNF-α)、促炎介質(zhì)(PGE2)含量,Western Blot檢測COX-2和iNOS蛋白表達水平。試驗結(jié)果表明:BNGP在62.5-500μg/m L濃度范圍內(nèi)能提高正常狀態(tài)的RAW264.7巨噬細胞的代謝活力,增加NO、IL-1β、TNF-α、PGE2的分泌量,提高COX-2和iNOS的表達量,高濃度(125μg/mL)能增強巨噬細胞的吞噬能力;當細胞處于LPS激活狀態(tài)時,BNGP在62.5-500μg/mL濃度范圍內(nèi)能抑制IL-1β、TNF-α、PGE2的分泌,濃度為500μg/m L時可抑制NO的產(chǎn)生及iNOS的表達,高濃度(125μg/m L)則能下調(diào)COX-2的表達。3.采用流式細胞術(shù)分析BNGP對LPS-FITC與RAW264.7巨噬細胞表面受體結(jié)合的干擾作用,免疫熒光分析BNGP對NF-κB p65核轉(zhuǎn)位的影響,Western blot檢測BNGP對NF-κB p65在細胞質(zhì)及細胞核的表達,對NF-κB的抑制性蛋白IκB-α磷酸化的影響。結(jié)果顯示:(1)500μg/m L BNGP能極顯著減少FITC-LPS結(jié)合到巨噬細胞上的量。(2)62.5-500μg/m L BNGP組的發(fā)生核轉(zhuǎn)位的細胞比例均極顯著高于對白對照組;高濃度BNGP(500μg/mL)能顯著減少由LPS誘導發(fā)生核轉(zhuǎn)位的細胞比例,而低濃度BNGP(≤250μg/m L)則與LPS組無顯著差異。(3)BNGP單獨作用于細胞時,可劑量依賴性地激活NF-κB從胞質(zhì)轉(zhuǎn)移入核;BNGP與LPS共同作用時,能夠弱化由LPS刺激細胞引起的NF-κB劇烈的核轉(zhuǎn)位現(xiàn)象。(4)BNGP能促使細胞質(zhì)中與NF-κB結(jié)合的IκB-α蛋白發(fā)生磷酸化作用;BNGP與LPS共同作用時,能抑制由LPS引起的大量IκB-α蛋白發(fā)生磷酸化作用。
【學位授予單位】：江西農(nóng)業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R151

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本文編號：1211370