本文關鍵詞：銅轉運相關蛋白在醋酸鉛致C6細胞銅蓄積中作用

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【摘要】：目的探討銅轉運蛋白和銅伴侶蛋白在醋酸鉛染毒致大鼠神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞株C6細胞銅蓄積中的作用。方法 1采用CCK-8實驗,以終濃度為0~50μmol/L醋酸鉛處理C6細胞24.0 h,篩選合適的后續(xù)實驗染毒劑量。2將C6細胞分為對照組和鉛染毒組,分別予終濃度為0和10μmol/L醋酸鉛處理24.0 h,再予濃度為2μmol/L的氯化銅培養(yǎng),于培養(yǎng)后0.0、0.5、1.0、2.0、4.0和8.0 h收獲細胞。以電感耦合等離子體-質(zhì)譜法檢測C6細胞內(nèi)銅和鉛水平,熒光實時定量聚合酶鏈式反應檢測C6細胞中銅轉運蛋白銅轉運體1(CTR1)、二價金屬轉運體1(DMT1)、銅轉運三磷酸腺苷酶α肽/β肽(ATP7A/ATP7B)和銅伴侶蛋白抗氧化蛋白1(ATOX1)、細胞色素C氧化酶17(COX17)、超氧化物歧化酶銅伴侶蛋白(CCS)的mRNA表達,以激光共聚焦檢測鉛染毒后細胞中CTR1和ATP7A的蛋白表達。結果 1CCK-8實驗結果顯示,濃度為10μmol/L的醋酸鉛對C6細胞增殖尚未造成有統(tǒng)計學意義的影響(P0.05),以該濃度作為后續(xù)鉛染毒劑量。2醋酸鉛染毒24.0 h后,鉛染毒組C6細胞中鉛和銅的水平均高于對照組(P0.01),但2組C6細胞存活率比較,差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。經(jīng)染銅處理后,鉛染毒組C6細胞存活率低于對照組(P0.01)。C6細胞中銅水平在鉛染毒處理和染銅時間的交互效應間有統(tǒng)計學意義(P0.01);其中,在染銅后0.5~8.0 h 5個時間點,鉛染毒組C6細胞中銅水平均高于對照組(P0.05);對照組C6細胞中銅水平在染銅后2.0 h時間點達到高峰,此后直至8.0 h時間點均維持在較為平穩(wěn)的水平;而鉛染毒組C6細胞中銅水平呈隨著染銅時間的增加而升高的時間-效應關系,在染銅后8.0 h時間點達到高峰。醋酸鉛染毒24.0 h后,與對照組比較,鉛染毒組C6細胞中CTR1和DMT1的mRNA相對表達水平分別上調(diào)113.00%和36.00%(P0.01),ATP7A mRNA相對表達水平下調(diào)25.00%(P0.01),CTR1蛋白表達水平上調(diào)76.04%(P0.01),ATP7A蛋白表達水平下調(diào)16.00%(P0.01)。2組C6細胞中ATP7B、ATOX1、COX17和CCS的mRNA相對表達水平分別比較,差異均無統(tǒng)計學意義(P0.05)。結論醋酸鉛染毒可導致C6細胞中銅水平呈隨時間增加而增加的時間-效應性蓄積;銅轉入蛋白CTR1表達的上調(diào)和銅轉出蛋白ATP7A表達的下調(diào)可能是醋酸鉛染毒后致細胞中銅蓄積的機制之一。
【作者單位】： 華北理工大學公共衛(wèi)生學院;
【基金】：國家自然科學基金(81373033) 973項目(2012CB525002)
【分類號】：R114
【正文快照】： 鉛是生產(chǎn)和生活環(huán)境中廣泛存在的神經(jīng)毒物之一,其作用機制尚未闡明。近年研究認為,鉛是影響兒童智力和學習記憶能力的重要因素之一[1],并與阿爾茨海默病(Alzheimer's disease,AD)和帕金森病等神經(jīng)退行性病變密切相關[2-3]。銅穩(wěn)態(tài)失調(diào)是目前AD發(fā)病機制的研究熱點之一[4-5]。有

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