本文關(guān)鍵詞：蘋果多酚對(duì)高劑量膽堿誘導(dǎo)的實(shí)驗(yàn)小鼠肝臟和血管內(nèi)皮損傷的保護(hù)作用研究

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【摘要】：蘋果口味酸甜可口,營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高。從古代開始,蘋果就已經(jīng)是人類飲食的一部分,同時(shí)也是全球最常消費(fèi)的水果種類之一。已有大量的研究表明,蘋果多酚有廣泛的生物體內(nèi)營(yíng)養(yǎng)學(xué)特性,如抗氧化、抗腫瘤活性等,同時(shí)它只有很小的副作用。隨著科學(xué)研究的深入,人們將蘋果多酚的應(yīng)用前景變得更加廣闊,除了蘋果多酚的提取、分離純化等方面,蘋果多酚也被廣泛應(yīng)用到食品和保健食品領(lǐng)域。因此,本研究選擇紅富士蘋果為材料,通過(guò)80%甲醇提取得到蘋果多酚提取物,利用HPLC法對(duì)提取物進(jìn)行定性、定量的分析,并選擇活性較高的果皮多酚作為營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)研究其對(duì)高劑量膽堿飲食誘導(dǎo)的肝臟損傷和血管內(nèi)皮損傷的營(yíng)養(yǎng)干預(yù)作用。主要進(jìn)行以下研究：(1)分別利用80%甲醇為提取溶劑,超聲輔助提取(頻率為40,kHz,功率為250 W,350C,超聲20 min),提取液旋蒸濃縮,冷凍干燥得提取物蘋果果皮多酚(APP)和果肉多酚(AFP)。計(jì)算多酚的提取率分別為8.6%和7.9%,比色法測(cè)定果皮和果肉中總的多酚含量分別為：557.5±20.1 mg GAE/100g和134.2±10.4mg GAE/100g：APP和AFP中總黃酮含量分別為：282.1±11.5 mg RE/100g和102.8±9.1 mg RE/100 g。(2)HPLC檢測(cè)法結(jié)果顯示,蘋果富含多酚,在APP中檢測(cè)到了8種組分,按照含量多少依次為：蘆丁(rutin),槲皮苷(quercitrin),金絲桃苷(11yperoside),綠原酸(chlorogenic acid),表兒茶素(epicatechin),槲皮素(quercetin),咖啡酸(caffeicacid),根皮素(phloretin),它們的含量依次為：65.3 mg/g,23.7 mg/g,8.7 mg/g,4.1mg/g,0.7 mg/g,0.5 mg/g,0.4 mg/g,0.1 mg/g；果肉多酚中只檢測(cè)到了6種組分,依 次為:1.8 mg/g chlorogenic acid,0.03 mg/g caffeic acid,0.1 mg/g epicatechin,1.0 mg/grutin,1.2 mg/g hyperoside,以及1.8 mg/g quercitrin。而在果皮中含量較高的槲皮素和根皮素并未檢測(cè)到。(3)膽堿造模實(shí)驗(yàn),與正常組相比,3%膽堿組血清谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)和谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)的酶活分別升高為8.821±2.01 mmol/L和8.109±1.623 mmol/L(p0.01),與肝臟的抗氧化和脂質(zhì)過(guò)氧化相關(guān)的物質(zhì)中,丙二醛(MDA)的水平升高至2.74±0.334 nmol/g prot,而超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)的活性降低為203.33±14.712 U/mg prot和8.39±0.9912 U/mg prot(p0.01),結(jié)合與模型組的對(duì)比后發(fā)現(xiàn),高劑量膽堿引起了肝組織活動(dòng)異常,造成了肝臟的損傷；小鼠血清中血脂的指標(biāo)檢測(cè)表明,在高劑量膽堿的干預(yù)下,血脂中的與總膽固醇(TC)、總甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL)含量均增加了1-1.5倍,相反具有保護(hù)作用的高密度脂蛋白(HDL)則是降低為原來(lái)的1/3(p0.01),這幾個(gè)指標(biāo)的異常證明膽堿的干預(yù)導(dǎo)致了機(jī)體的脂蛋白也代謝異常。同時(shí),一氧化氮(NO)和內(nèi)皮素-1(ET-1)比值升高(p0.01),白細(xì)胞介素-6(IL-6)的分泌量增加到1.8787±0.0013 mIU/L,與模型組表現(xiàn)了同樣的結(jié)果,證明了膽堿模型組小鼠的內(nèi)皮細(xì)胞分泌紊亂導(dǎo)致的內(nèi)皮損傷；病理組織學(xué)檢查結(jié)果均與生化指標(biāo)的結(jié)果結(jié)果相符合。(4)在高膽堿飲食誘導(dǎo)的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體內(nèi),分析發(fā)現(xiàn)3%膽堿可導(dǎo)致小鼠肝臟活性受損,出現(xiàn)了抗氧化性能降低和自由基增多的現(xiàn)象。采用APP對(duì)其進(jìn)行營(yíng)養(yǎng)干預(yù)以后的結(jié)果表明：APP對(duì)肝損傷有保護(hù)作用,且隨著濃度升高保護(hù)作用增強(qiáng),APP為900mg/kg·bw時(shí),效果最佳。與模型組對(duì)比,APP營(yíng)養(yǎng)干預(yù)后動(dòng)物血清中的谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)和谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)的活性分別降低為116.32±11.316 U/L和110.28±8.017 U/L(p0.01),肝臟勻漿中的丙二醛(MDA)水平降低(2.308±0.119 nmol/gprot),而超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽活性酶(GSH-Px)活性增加(分別為342.19±19.040 U/mg prot和103.57±9.503 U/mg prot).HE和Oil Red O染色更加直觀的顯示了和生化指標(biāo)相同的結(jié)果。(5)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物長(zhǎng)期飲食高劑量膽堿后,分析發(fā)現(xiàn)3%膽堿可導(dǎo)致小鼠血脂水平紊亂,血管內(nèi)皮細(xì)胞(VEC)受損,分泌紊亂；然而,在APP營(yíng)養(yǎng)干預(yù)以后,對(duì)比模型組,TC,TG,LDL的水平為不同程度降低,而HDL含量上升(p0.01)；內(nèi)皮細(xì)胞分泌的物質(zhì)中NO水平增加到2.527士0.0289 μmol/L,同時(shí)ET-1的水平下降到11.00±0.057pg/mL,TXB2水平降低至103.72±10.015pg/m L而6-keto-PGF1a則增加至80.14±14.113 ng/mL;此外,與VEC有關(guān)的分子標(biāo)志物CRP、TNF-α活性指標(biāo)含量分別降低為1.303±0.138 ng/mL和52.34±4.09 pg/mL(p0.01),并且有明顯量效關(guān)系,尤其是當(dāng)APP在最大劑量(900mg/kgg·bw)情況下,組織病理學(xué)顯示APP的營(yíng)養(yǎng)干預(yù)后,細(xì)胞壞死和凋亡現(xiàn)象減少,與生化指標(biāo)結(jié)果一致。
【學(xué)位授予單位】：陜西師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R151

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