本文關(guān)鍵詞：MLL修飾H3K4me3在鋁致認(rèn)知功能障礙中的作用

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【摘要】：目的:通過體內(nèi)及體外實(shí)驗(yàn)探討三甲基化的組蛋白H3第4位賴氨酸K4(H3K4me3)及其甲基轉(zhuǎn)移酶MLL改變在鋁致認(rèn)知功能障礙中的作用。方法:體內(nèi)實(shí)驗(yàn):160只無特定病原體級(jí)健康雄性SD大鼠按體重隨機(jī)分為4批16組,每組10只,每批設(shè)對(duì)照組及低、中、高劑量鋁暴露組,采用飲水方式染毒,對(duì)照組給予飲用自來水,染鋁組每日分別給予劑量為2 mg/kg、12 mg/kg、72 mg/kg體重的AlCl3染毒,第一批連續(xù)染毒90天,第二批染毒180天,第三批染毒270天,第四批染毒360天。染毒結(jié)束后,采用曠場試驗(yàn)和Morris水迷宮試驗(yàn)測定大鼠的自主活動(dòng)、探索活動(dòng)和空間學(xué)習(xí)記憶能力,采用組蛋白甲基轉(zhuǎn)移酶活性/抑制性試劑盒測定海馬組織MLL酶活性,采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測定海馬組織H3K4me3蛋白表達(dá)量。體外實(shí)驗(yàn):選取同批次處于對(duì)數(shù)生長期的SH-SY5Y細(xì)胞,將其分為空白對(duì)照組、1 mM Al3+、2 mM Al3+、4 mM Al3+組,對(duì)照組不給予任何干預(yù)物,染鋁組給予相應(yīng)劑量的AlCl3,染毒48小時(shí)后測定相關(guān)指標(biāo)。采用CCK-8法測定細(xì)胞活力,采用流式細(xì)胞術(shù)測定細(xì)胞凋亡率,采用組蛋白甲基轉(zhuǎn)移酶活性/抑制性試劑盒測定MLL酶活性,采用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(qRT PCR)測定MLL相對(duì)表達(dá)量,采用免疫熒光化學(xué)法測定MLL蛋白相對(duì)表達(dá)量,采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測定H3K4me3蛋白表達(dá)量。結(jié)果:1.體內(nèi)實(shí)驗(yàn)曠場試驗(yàn)結(jié)果:(1)中央象限停留時(shí)間中央象限停留時(shí)間染鋁劑量與染鋁時(shí)間存在交互作用(p㩳0.05),其在染毒270天及360天時(shí)隨染鋁劑量的增高而延長(p㩳0.05),各劑量組中央象限停留時(shí)間隨染鋁時(shí)間的延長而增加(p㩳0.05),多重線性回歸分析得回歸方程y=-10.211+0.234x1+4.558x2(x1:染鋁劑量,x2:染鋁時(shí)間)(p㩳0.01)。(2)站立次數(shù)站立次數(shù)的染鋁劑量與染鋁時(shí)間的交互作用無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p㧐0.05),大鼠站立次數(shù)隨染鋁劑量的增高和染鋁時(shí)間的延長而減少(p㩳0.05),一般線性回歸分析得站立次數(shù)與染鋁劑量和染鋁時(shí)間的回歸方程分別為y=21.525-0.095x1、y=35.004-2.145x2(x1:染鋁劑量,x2:染鋁時(shí)間)(p1㩳0.01,p2㩳0.01)。(3)修飾次數(shù)大鼠修飾次數(shù)染鋁劑量與染鋁時(shí)間的交互作用無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p㧐0.05),大鼠修飾次數(shù)隨染鋁劑量的增高和染鋁時(shí)間的延長而減少(p㩳0.05),一般線性回歸分析得回歸方程分別為y=-10.899-0.053x1、y=-18.105-1.154x2(x1:染鋁劑量,x2:染鋁時(shí)間)(p1㩳0.01,p2㩳0.01)。morris水迷宮試驗(yàn)結(jié)果:(1)定位航行試驗(yàn)逃避潛伏期大鼠逃避潛伏期染鋁劑量與染鋁時(shí)間的交互作用無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p㧐0.05),大鼠逃避潛伏期隨染鋁劑量的增高和染鋁時(shí)間的延長而增加(p㩳0.05),一般線性回歸分析得回歸方程分別為y=-35.464+0.148x1、y=-26.075+1.738x2(x1:染鋁劑量,x2:染鋁時(shí)間)(p1㩳0.01,p2㩳0.01)。(2)空間探索試驗(yàn)?zāi)繕?biāo)象限停留時(shí)間大鼠目標(biāo)象限停留時(shí)間染鋁劑量與染鋁時(shí)間存在交互作用(p㩳0.05),各染毒階段目標(biāo)象限停留時(shí)間隨染鋁劑量的增高而降低(p㩳0.05),低、中、高劑量組隨染毒時(shí)間延長目標(biāo)象限停留時(shí)間減少(p㩳0.05),多重線性回歸分析得y=25.002-0.098x1-0.723x2(x1:染鋁劑量,x2:染鋁時(shí)間)(p㩳0.01)。(3)空間探索試驗(yàn)穿越平臺(tái)位置次數(shù)大鼠穿越平臺(tái)位置次數(shù)染鋁劑量與染鋁時(shí)間的交互作用無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p㧐0.05),且其隨染鋁劑量的增高和染鋁時(shí)間的延長而減少(p㩳0.05),一般線性回歸分析得y=-4.134-0.023x1、y=-4.583-0.130x2(x1:染鋁劑量,x2:染鋁時(shí)間)(p1㩳0.01,p2㩳0.01)。大鼠海馬組織mll酶活性測定結(jié)果:大鼠海馬組織mll酶活性染鋁劑量和染鋁時(shí)間的交互作用無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p㧐0.05),mll酶活性隨染鋁劑量的增高和染鋁時(shí)間的延長而降低(p㩳0.05),一般線性回歸分析得y=40.242-0.151x1、y=47.735-1.432x2(x1:染鋁劑量,x2:染鋁時(shí)間)(p1㩳0.01,p2㩳0.01)。elisa法測定大鼠海馬組織h3k4me3蛋白表達(dá)結(jié)果:大鼠海馬組織h3k4me3蛋白含量染鋁劑量與染鋁時(shí)間存在交互作用(p㩳0.01),且其在染毒270天及360天時(shí)隨染鋁劑量的增高而降低(p㩳0.05),低、中、高劑量組h3k4me3含量隨染鋁時(shí)間的延長而減少(p㩳0.05),多重線性回歸分析得y=29.376-0.095x1-1.212x2(x1:染鋁劑量,x2:染鋁時(shí)間)(p㩳0.01)。認(rèn)知能力試驗(yàn)指標(biāo)與mll酶活性及h3k4me3含量相關(guān)性分析:曠場試驗(yàn)中央象限停留時(shí)間及水迷宮試驗(yàn)逃避潛伏期與海馬mll酶活性下降呈負(fù)相關(guān)(p㩳0.05),曠場試驗(yàn)大鼠站立次數(shù)、修飾次數(shù)及水迷宮試驗(yàn)?zāi)繕?biāo)象限停留時(shí)間與mll酶活性下降呈正相關(guān)(p㩳0.05),各指標(biāo)與h3k4me3含量下降的相關(guān)性同mll酶活性。2.體外實(shí)驗(yàn)cck-8法測定細(xì)胞活力結(jié)果:sh-sy5y細(xì)胞活力隨染鋁劑量的增高而降低(p㩳0.05)。流式細(xì)胞術(shù)測定細(xì)胞凋亡結(jié)果:隨染鋁劑量的增高細(xì)胞凋亡率增高(p㩳0.05)。細(xì)胞mll酶活性測定結(jié)果:隨染鋁劑量的增高mll酶活性呈下降趨勢(p㩳0.05),一般線性回歸分析得mll酶活性與染鋁劑量的回歸方程為y=100.34-20.605x(p㩳0.01)。qrt-pcr測定細(xì)胞mll相對(duì)表達(dá)量結(jié)果:各組細(xì)胞mll相對(duì)表達(dá)未見明顯差異(p㧐0.05)。免疫熒光化學(xué)法測定mll蛋白相對(duì)表達(dá)結(jié)果:mll熒光強(qiáng)度隨染鋁劑量的增高而降低(p㩳0.05),一般線性回歸分析得mll熒光強(qiáng)度與染鋁劑量的回歸方程為y=986.115-110.753x(p㩳0.01)。elisa法測定細(xì)胞h3k4me3蛋白表達(dá)結(jié)果:h3k4me3蛋白含量隨染鋁劑量的增高而降低(p㩳0.05),一般線性回歸分析得h3k4me3蛋白含量與染鋁劑量的回歸方程為y=59.57-7.089x(p㩳0.01)。結(jié)論:1.慢性鋁暴露可致大鼠探索能力、學(xué)習(xí)記憶能力等認(rèn)知功能障礙,且存在劑量及時(shí)間依賴性;2.鋁暴露可致MLL酶活性下降,存在劑量及時(shí)間依賴性,鋁暴露可能會(huì)對(duì)MLL蛋白轉(zhuǎn)錄后修飾產(chǎn)生影響;3.鋁暴露可致H3K4me3蛋白表達(dá)量降低,且存在劑量及時(shí)間依賴性;4.認(rèn)知能力障礙與MLL酶活性及H3K4me3表達(dá)下降相關(guān)。綜上,鋁可能通過降低MLL酶活性引起H3K4me3含量降低,進(jìn)而影響認(rèn)知能力。
【關(guān)鍵詞】：鋁 認(rèn)知能力 MLL H3K4me3
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R114
【目錄】：

• 中文摘要6-10
• 英文摘要10-15
• 常用縮寫詞中英文對(duì)照表15-17
• 前言17-22
• 參考文獻(xiàn)20-22
• 第一部分 慢性鋁暴露對(duì)大鼠認(rèn)知能力及海馬組織MLL、H3K4me3的影響22-43
• 1 材料與方法22-28
• 1.1 實(shí)驗(yàn)材料22-23
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法23-28
• 2 結(jié)果28-43
• 2.1 大鼠基本情況28-29
• 2.2 曠場試驗(yàn)29-33
• 2.3 水迷宮試驗(yàn)33-39
• 2.4 大鼠海馬組織MLL酶活性測定39-40
• 2.5 ELISA法測定大鼠海馬組織H3K4me3蛋白含量40-41
• 2.6 認(rèn)知能力指標(biāo)與MLL酶活性及H3K4me3含量相關(guān)性分析41-43
• 第二部分 鋁染毒對(duì)SH-SY5Y細(xì)胞凋亡及MLL、H3K4me3的影響43-54
• 1 材料與方法43-49
• 1.1 實(shí)驗(yàn)材料43-45
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法45-49
• 2 結(jié)果49-54
• 2.1 SH-SY5Y細(xì)胞活力測定49
• 2.2 SH-SY5Y細(xì)胞凋亡率測定49-50
• 2.3 SH-SY5Y細(xì)胞MLL酶活性測定50-51
• 2.4 qRT-PCR測定SH-SY5Y細(xì)胞MLL相對(duì)表達(dá)量51-52
• 2.5 免疫熒光化學(xué)法測定SH-SY5Y細(xì)胞MLL蛋白相對(duì)表達(dá)量52
• 2.6 ELISA法測定SH-SY5Y細(xì)胞H3K4me3蛋白表達(dá)量52-54
• 討論54-59
• 結(jié)論59-60
• 參考文獻(xiàn)60-63
• 綜述63-71
• 參考文獻(xiàn)68-71
• 致謝71-72
• 在學(xué)期間承擔(dān)/參與的科研課題與研究成果72-73
• 個(gè)人簡歷73

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中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 亢盼;MLL修飾H3K4me3在鋁致認(rèn)知功能障礙中的作用[D];山西醫(yī)科大學(xué);2016年

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本文編號(hào)：1064779