本文關(guān)鍵詞：膽紅素致大鼠大腦皮質(zhì)和海馬神經(jīng)元毒性損害的比較研究

  更多相關(guān)文章： 膽紅素 皮質(zhì)神經(jīng)元 海馬神經(jīng)元 神經(jīng)毒性

【摘要】：目的：采用SD大鼠皮質(zhì)神經(jīng)元和海馬神經(jīng)元細(xì)胞原代培養(yǎng)技術(shù),從時(shí)間效應(yīng)關(guān)系和劑量效應(yīng)關(guān)系兩個(gè)維度比較膽紅素對大腦不同區(qū)域神經(jīng)元細(xì)胞之間的毒性損害程度上的差異,為進(jìn)一步闡明膽紅素的神經(jīng)毒性機(jī)制提供科學(xué)依據(jù)。方法：出生24小時(shí)以內(nèi)的SD大鼠乳鼠,仔細(xì)取出大腦組織,分離大腦皮層和海馬,經(jīng)胰酶消化獲得大腦皮層神經(jīng)元和海馬神經(jīng)元,采用無血清培養(yǎng)技術(shù)建立神經(jīng)細(xì)胞體外培養(yǎng)系統(tǒng)。采用神經(jīng)元特異性烯醇化酶(NSE)間接免疫熒光方法對原代培養(yǎng)的神經(jīng)元進(jìn)行鑒定,然后將培養(yǎng)的細(xì)胞暴露于不同劑量的膽紅素。實(shí)驗(yàn)分為一個(gè)對照組和三個(gè)膽紅素染毒組,暴露劑量以培養(yǎng)基中膽紅素終濃度表示,分別為25uM、50uM、100uM,對照組和染毒組分別于4h、12h、24h三個(gè)時(shí)間點(diǎn)觀察毒性損害。觀察指標(biāo)和采用的方法包括：細(xì)胞毒性檢測,采用MTT法；病理學(xué)觀察,HE染色法；細(xì)胞凋亡,采用Hoechst 33342熒光染色法；Caspase-3活性,Caspase-3活性檢測試劑盒；細(xì)胞內(nèi)鈣離子含量,熒光標(biāo)記法,采用Fluo-3熒光探針。結(jié)果：(1)HE染色顯示膽紅素導(dǎo)致海馬神經(jīng)元和皮質(zhì)神經(jīng)元細(xì)胞形態(tài)的改變,膽紅素染毒組與對照組比較,出現(xiàn)細(xì)胞間連接稀疏,突觸收縮變短,細(xì)胞胞體縮小,細(xì)胞核邊集、固縮、碎裂等改變,且皮質(zhì)神經(jīng)元HE染色結(jié)果中出現(xiàn)凋亡小體；(2) MTT實(shí)驗(yàn)顯示膽紅素導(dǎo)致海馬神經(jīng)元和皮質(zhì)神經(jīng)元細(xì)胞活性的降低,海馬神經(jīng)元與皮質(zhì)神經(jīng)元相比,細(xì)胞存活率更低；(3) Hoechst33342凋亡熒光染色并計(jì)數(shù)結(jié)果顯示,膽紅素染毒可引起神經(jīng)元細(xì)胞核發(fā)生邊集、固縮、碎裂等形態(tài)改變,膽紅素可以導(dǎo)致海馬神經(jīng)元和皮質(zhì)神經(jīng)元細(xì)胞凋亡率的升高,隨著染毒劑量的增加和染毒時(shí)間的延長,凋亡率的變化顯示出明顯的劑量依賴和時(shí)間依賴性,染毒24h時(shí),凋亡率最高,且海馬神經(jīng)元的凋亡率較皮質(zhì)神經(jīng)元更高；(4) Caspase-3活性檢測結(jié)果顯示,隨著染毒劑量的增加和染毒時(shí)間的延長,膽紅素染毒可以導(dǎo)致海馬神經(jīng)元和皮質(zhì)神經(jīng)元細(xì)胞Caspase-3活性顯著增強(qiáng),染毒到24h時(shí)Caspase-3活性最強(qiáng),且海馬神經(jīng)元Caspase-3活性變化率比皮質(zhì)神經(jīng)元更大；(5)膽紅素可以導(dǎo)致皮質(zhì)神經(jīng)元和海馬神經(jīng)元細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度增加,隨著染毒劑量的增加和染毒時(shí)間的延長細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度迅速增加,染毒24h時(shí)細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度最高,且海馬神經(jīng)元細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度變化率高于皮質(zhì)神經(jīng)元。結(jié)論：高膽紅素可導(dǎo)致體外培養(yǎng)皮質(zhì)神經(jīng)元和海馬神經(jīng)元毒性損害的發(fā)生,包括細(xì)胞形態(tài)改變,細(xì)胞活性降低,細(xì)胞凋亡率升高,細(xì)胞Caspase-3活性增強(qiáng),破壞鈣離子穩(wěn)態(tài)導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度增加,其毒性大小與劑量和染毒時(shí)間存在一定的相關(guān)關(guān)系,且不同部位神經(jīng)細(xì)胞對膽紅素的毒性損害敏感性存在一定差異,海馬神經(jīng)元比皮質(zhì)神經(jīng)元更敏感,提示海馬神經(jīng)元是膽紅素神經(jīng)毒性更重要的靶細(xì)胞。
【關(guān)鍵詞】：膽紅素 皮質(zhì)神經(jīng)元 海馬神經(jīng)元 神經(jīng)毒性
【學(xué)位授予單位】：蘭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R114
【目錄】：

• 中文摘要3-5
• Abstract5-9
• 前言9-13
• 第一章 材料與方法13-22
• 1.1 材料13-14
• 1.1.1 主要試劑13
• 1.1.2 主要儀器13-14
• 1.2 方法14-22
• 1.2.1 溶液配制14-15
• 1.2.2 實(shí)驗(yàn)方法與步驟15-21
• 1.2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理21
• 1.2.4 質(zhì)量控制21-22
• 第二章 結(jié)果22-41
• 2.1 海馬神經(jīng)元與皮質(zhì)神經(jīng)元原代培養(yǎng)及鑒定22-23
• 2.1.1 海馬神經(jīng)元原代培養(yǎng)與鑒定22
• 2.1.2 皮質(zhì)神經(jīng)元原代培養(yǎng)與鑒定22-23
• 2.2 膽紅素導(dǎo)致神經(jīng)元細(xì)胞形態(tài)改變23-25
• 2.2.1 膽紅素導(dǎo)致海馬神經(jīng)元形態(tài)改變23-24
• 2.2.2 膽紅素導(dǎo)致皮質(zhì)神經(jīng)元形態(tài)改變24-25
• 2.3 膽紅素導(dǎo)致神經(jīng)元細(xì)胞活性的變化25-28
• 2.3.1 膽紅素引起海馬神經(jīng)元細(xì)胞活性的變化25-26
• 2.3.2 膽紅素引起皮質(zhì)神經(jīng)元細(xì)胞活性的變化26-27
• 2.3.3 皮質(zhì)神經(jīng)元與海馬神經(jīng)元細(xì)胞活性比較27-28
• 2.4 膽紅素導(dǎo)致神經(jīng)元細(xì)胞凋亡率的改變28-33
• 2.4.1 膽紅素導(dǎo)致海馬神經(jīng)元凋亡率的改變28-29
• 2.4.2 膽紅素導(dǎo)致皮質(zhì)神經(jīng)元凋亡率的改變29-30
• 2.4.3 皮質(zhì)神經(jīng)元與海馬神經(jīng)元凋亡率比較30-33
• 2.5 膽紅素導(dǎo)致神經(jīng)元細(xì)胞Caspase-3活性變化的影響33-36
• 2.5.1 膽紅素導(dǎo)致海馬神經(jīng)元Caspase-3活性變化的影響33-34
• 2.5.2 膽紅素導(dǎo)致皮質(zhì)神經(jīng)元Caspase-3活性變化34-35
• 2.5.3 海馬神經(jīng)元與皮質(zhì)神經(jīng)元Caspase-3活性比較35-36
• 2.6 膽紅素對神經(jīng)元細(xì)胞內(nèi)鈣離子穩(wěn)態(tài)的影響36-41
• 2.6.1 膽紅素對海馬神經(jīng)元細(xì)胞內(nèi)鈣離子穩(wěn)態(tài)的影響37
• 2.6.2 膽紅素對皮質(zhì)神經(jīng)元細(xì)胞內(nèi)鈣離子穩(wěn)態(tài)的影響37-38
• 2.6.3 皮質(zhì)神經(jīng)元與海馬神經(jīng)元細(xì)胞內(nèi)鈣離子比較38-41
• 第三章 討論41-50
• 3.1 海馬神經(jīng)元與皮質(zhì)神經(jīng)元的原代培養(yǎng)與鑒定41-42
• 3.1.1 海馬神經(jīng)元與皮質(zhì)神經(jīng)元的原代培養(yǎng)41-42
• 3.1.2 神經(jīng)元細(xì)胞的鑒定及體外高膽紅素血癥模型的建立42
• 3.2 膽紅素導(dǎo)致神經(jīng)元形態(tài)改變42-43
• 3.3 膽紅素對皮質(zhì)神經(jīng)元和海馬神經(jīng)元細(xì)胞活性的影響43-45
• 3.4 膽紅素對皮質(zhì)神經(jīng)元和海馬神經(jīng)元凋亡率的影響45-46
• 3.5 膽紅素導(dǎo)致神經(jīng)元Caspase-3活性變化46-47
• 3.6 膽紅素導(dǎo)致神經(jīng)元內(nèi)鈣離子穩(wěn)態(tài)的改變47-50
• 第四章 結(jié)論50-51
• 4.1 主要結(jié)論50
• 4.2 研究展望50-51
• 參考文獻(xiàn)51-55
• 在學(xué)期間研究成果55-56
• 致謝56

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本文編號：1062807