本文關鍵詞：砷暴露對As3MT基因表達及甲基化的影響

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【摘要】：目的：通過實時熒光定量PCR (qPCR)檢測職業(yè)暴露工人和非職業(yè)性砷暴露人群尿中砷化合物形態(tài)和含量,評價其機體砷負荷情況；通過qPCR和甲基化特異性PCR (MSP),檢測砷暴露對As3MT表達及甲基化的影響,以及As3MT mRNA表達量與尿砷形態(tài)和含量之間的關系。方法：采用典型抽樣的方法,抽取某砒霜廠79名職業(yè)性砷暴露工人和24名砒霜廠外工人,收集其尿液樣本和外周血液樣本；選用HG-oldtrap-AAS法測定尿中TiAs、iAs、MMA、DMA四種形態(tài)的砷含量,并計算iAs%、MMA%、DMA%、 PMI、SMI等砷甲基化指標,分析砷暴露對As3MT mRNA表達量的影響；運用離心柱法提取外周血液樣本基因組DNA,使用MSP檢測砷暴露對As3MT甲基化的影響；選擇t檢驗(t'檢驗),分析砷暴露對As3MT表達及甲基化的影響,選擇Pearson相關(Spearman相關)分析尿砷形態(tài)及甲基化程度對As3MT mRNA表達量的影響。結果：暴露組工人尿中iAs、MMA、DMA和TiAs濃度的中位數(最小值,最大值)分別為103.52 (5.38,971.11) μg/ml、151.12 (5.84,1361.35) μg/ml、523.48 (35.73,4258.11) μg/ml和822.39 (54.28,5981.34) pg/ml,明顯高于ACGIH最新制定的尿總砷生物接觸限值35μg/ml。對照組工人尿中iAs、MMA、DMA和TiAs濃度的中位數(最小值,最大值)分別為1.43 (0.30,6.20) μg/ml、1.54 (0.00,3.96) μg/ml,14.14 (1.28,32.70) μg/ml和16.88 (2.69,40.07)在尿總砷生物接觸限值以下。暴露組工人和對照組工人尿中iAs、MMA、DMA和TiAs濃度存在差異(P0.05)。As3MT和P53mRNA在暴露組中的表達量明顯高于對照組中的表達量(P 0.05)。 As3MT的表達量與iAs、MMA、 DMA之間存在正相關關系(r=0.340,0.382,0.421), P53mRNA的表達量與iAs、MMA、DMA之間存在正相關關系(r=0.342,0.356,0.401), As3MT和P53 mRNA的表達量與PMI無相關關系(P0.05),與SMI之間存在負相關關系(r=-0.266,-0.241)。結合MSP實驗結果,暴露組和對照組的非甲基化率存在差異(P0.05),暴露組的非甲基化率明顯高于對照組。iAs、MMA、DMA和TiAs在非甲基化分組中的均數明顯高于甲基化分組(包含部分甲基化)。結論：通過qPCR檢測發(fā)現砷暴露使得As3MT mRNA的表達量升高,且砷暴露水平越高,As3MT mRNA的表達量越高,但是砷暴露后尿砷甲基化程度越深,As3MT mRNA的表達量越低。結合MSP實驗結果,發(fā)現砷暴露后,砷和砷化合物的濃度越高,As3MT mRNA的表達量越高,甲基化水平越低。本次典型抽樣研究中,職業(yè)性砷暴露工人體內砷與砷化合物濃度明顯升高,砷暴露工人可能已經存在潛在的職業(yè)損傷。
【關鍵詞】：As3MT 砷暴露 尿砷 甲基化
【學位授予單位】：昆明醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R135
【目錄】：

• 中文摘要7-9
• Abstract9-12
• 中英文縮略詞12-13
• 1 引言13-16
• 2 材料和方法16-29
• 2.1 技術路線16-17
• 2.2 研究對象和實驗材料的采集17
• 2.2.1 研究對象的選擇17
• 2.2.2 實驗材料的采集17
• 2.3 實驗試劑和器材17-19
• 2.3.1 主要試劑和試劑盒18-19
• 2.3.2 主要實驗儀器19
• 2.4 方法步驟19-29
• 2.4.1 尿砷含量的測定19-20
• 2.4.2 淋巴細胞提取20
• 2.4.3 RNA提取、逆轉錄及熒光定量20-23
• 2.4.4 DNA甲基化的檢測23-29
• 2.5 數據處理29
• 3 結果29-39
• 3.1 研究對象一般情況29-30
• 3.2 尿砷形態(tài)熒光定量結果30-33
• 3.3 尿中iAs、MMA、DMA和TiAs水平33-36
• 3.4 As3MT和P53 mRNA的表達36-37
• 3.5 暴露組和對照組差異性檢驗37-38
• 3.6 暴露組中甲基化和非甲基化樣本間砷化合物的差異38-39
• 4 討論39-42
• 4.1 研究對象尿砷化合物水平的討論40-41
• 4.2 As3MT和P53 mRNA在暴露組和非暴露組中表達差異的討論41
• 4.3 暴露組和對照組甲基化和非甲基化結果的比較討論41
• 4.4 暴露組中甲基化和非甲基化樣本間砷化合物的差異討論41-42
• 5 結論42-43
• 6 參考文獻43-47
• 綜述47-57
• 參考文獻54-57
• 攻讀碩士學位期間發(fā)表論文情況57-58
• 致謝58-59

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本文編號：1059053