本文關(guān)鍵詞：酵母源金屬硫蛋白排鉛及對(duì)鉛致氧化損傷修復(fù)作用的研究

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【摘要】：金屬硫蛋白（Metallothionein，簡(jiǎn)稱(chēng)MT）是一類(lèi)低分子量、富含半胱氨酸的金屬結(jié)合蛋白，因其具有強(qiáng)抗氧化、螯合重金屬離子及解除重金屬毒性等生物學(xué)功能，已逐漸被應(yīng)用于排鉛藥物、功能性食品、飼料添加劑和化妝品等領(lǐng)域。 本課題組前期經(jīng)金屬誘導(dǎo)劑誘導(dǎo)酵母類(lèi)微生物，獲得具有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的酵母源金屬硫蛋白，較傳統(tǒng)哺乳動(dòng)物源金屬硫蛋白提取周期短，獲取技術(shù)便捷、成本低廉及安全性較高等優(yōu)點(diǎn)顯著，利于工業(yè)化生產(chǎn)和推廣示范應(yīng)用。本文以體外與體內(nèi)作用聯(lián)合評(píng)價(jià)方式對(duì)酵母源金屬硫蛋白排鉛及對(duì)鉛致氧化損傷修復(fù)作用進(jìn)行了以下四方面的研究： 首先，以VC與兔肝Zn-MT為對(duì)照，通過(guò)分光光度法測(cè)定兩種金屬硫蛋白亞型（MT-Ⅰ、MT-Ⅱ）對(duì)羥基自由基、超氧陰離子自由基及DPPH自由基清除效果及其總還原能力，以此對(duì)酵母源金屬硫蛋白體外抗氧化活性進(jìn)行初步評(píng)價(jià)。結(jié)果表明：在體外抗氧化活性方面，酵母源金屬硫蛋白抗氧化活性強(qiáng)于同濃度的VC，其中MT-Ⅰ體外抗氧化活性強(qiáng)于MT-Ⅱ。 以兔肝Zn-MT為對(duì)照，采用石墨爐原子吸收光譜法及SDS-PAGE凝膠電泳，測(cè)定兩種酵母源金屬硫蛋白亞型（MT-Ⅰ、MT-Ⅱ）在模擬胃腸環(huán)境中對(duì)鉛離子的螯合作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：模擬胃環(huán)境中，MT-Ⅰ與MT-Ⅱ?qū)︺U離子的螯合率顯著高于Zn-MT，胃蛋白酶對(duì)MT-Ⅰ和Zn-MT螯合鉛離子效果具有一定的減弱作用，而對(duì)MT-Ⅱ影響不明顯。模擬腸環(huán)境中，金屬硫蛋白螯合鉛離子能力關(guān)系為Zn-MT＞MT-Ⅰ＞MT-Ⅱ，胰蛋白酶較胃蛋白酶對(duì)金屬硫蛋白螯合鉛離子效果影響較小。結(jié)果表明：雖然模擬胃腸環(huán)境對(duì)酵母源金屬硫蛋白巰基具有一定程度的破壞作用，但MT-Ⅰ與MT-Ⅱ在模擬胃腸環(huán)境中均能顯著地螯合鉛離子，并在12h內(nèi)能較好的抵抗模擬胃腸環(huán)境的消化，保持其螯合鉛離子能力。 一次性腹腔注射醋酸鉛構(gòu)建急性鉛中毒小鼠模型，以DMSA與兔肝Zn-MT為對(duì)照，連續(xù)灌胃給予酵母源金屬硫蛋白14d后，測(cè)定小鼠血鉛水平、MDA、SOD及GSH-Px水平，期間記錄小鼠形態(tài)特征及體重變化。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與模型組比較，金屬硫蛋白及DMSA處理組小鼠血鉛水平顯著下降（P0.05），且呈顯著的量效關(guān)系（P0.05），MT-Ⅰ與Zn-MT排鉛效果無(wú)明顯差異（P0.05），但顯著高于MT-Ⅱ（P0.05），三種金屬硫蛋白處理組小鼠血清中MDA、SOD及GSH-Px水平驅(qū)于正常（P＜0.05），其中MT-Ⅰ與MT-Ⅱ處理組小鼠血清中MDA水平顯著低于Zn-MT（P0.05），SOD與GSH-Px水平無(wú)明顯差異性（P0.05），DMSA處理組小鼠MDA水平顯著高于高劑量金屬硫蛋白處理組（P0.05）。結(jié)果表明：兩種酵母源金屬硫蛋白亞型對(duì)急性鉛中毒小鼠具有顯著排鉛效果（與動(dòng)物源金屬硫蛋白效果類(lèi)似），并能顯著提高抗氧化酶活性，減少脂質(zhì)過(guò)氧化產(chǎn)物，修復(fù)鉛致機(jī)體氧化損傷。 以DMSA與兔肝Zn-MT為對(duì)照，醋酸鉛溶液致慢性鉛中毒小鼠連續(xù)灌胃給予MT35d后，測(cè)定小鼠體重、血鉛、部分血常規(guī)及肝功能指標(biāo)水平，觀察小鼠肝腎組織病變程度。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與模型組比較，金屬硫蛋白處理組小鼠體重?zé)o顯著變化（P＞0.05）；高劑量金屬硫蛋白處理組小鼠血鉛含量顯著下降（P＜0.05），白細(xì)胞、紅細(xì)胞平均體積及血紅蛋白水平顯著升高（P＜0.05），但各中毒組小鼠粒細(xì)胞計(jì)數(shù)水平無(wú)顯著差異性（P0.05）；各給藥組小鼠GPT水平均顯著下降（P＜0.05），同時(shí)高劑量金屬硫蛋白處理組小鼠GOT水平均顯著下降（P＜0.05），小鼠肝腎組織病變程度明顯改善，，其改善程度優(yōu)于DMSA組。結(jié)果表明，兩種酵母源金屬硫蛋白亞型對(duì)慢性鉛中毒小鼠均具有明顯的排鉛及肝腎功能保護(hù)作用，作用效果類(lèi)似于動(dòng)物源金屬硫蛋白。
【關(guān)鍵詞】：金屬硫蛋白 鉛中毒 氧化損傷 修復(fù)
【學(xué)位授予單位】：黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R135.11
【目錄】：

• 摘要3-5
• Abstract5-10
• 符號(hào)說(shuō)明10-11
• 第一章 緒論11-23
• 1.1 鉛毒性及其氧化損傷11-12
• 1.2 排鉛物質(zhì)研究進(jìn)展及發(fā)展趨勢(shì)12-13
• 1.2.1 西藥排鉛12
• 1.2.2 中藥排鉛12
• 1.2.3 天然產(chǎn)物排鉛12
• 1.2.4 聯(lián)合應(yīng)用排鉛12-13
• 1.3 金屬硫蛋白概述13-23
• 1.3.1 金屬硫蛋白定義13
• 1.3.2 金屬硫蛋白的分類(lèi)及結(jié)構(gòu)13-16
• 1.3.3 金屬硫蛋白的生物學(xué)功能16-18
• 1.3.4 金屬硫蛋白排鉛解毒機(jī)制18-20
• 1.3.5 金屬硫蛋白在排鉛解毒產(chǎn)品中的應(yīng)用20-21
• 1.3.6 課題研究目的和意義21-22
• 1.3.7 課題研究的內(nèi)容22-23
• 第二章 酵母源金屬硫蛋白體外抗氧化活性初步評(píng)價(jià)23-29
• 2.1 材料與設(shè)備23-24
• 2.1.1 主要實(shí)驗(yàn)材料23
• 2.1.2 主要實(shí)驗(yàn)設(shè)備23-24
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法24-25
• 2.2.1 酵母源金屬硫蛋白對(duì)羥基自由基清除率24
• 2.2.2 酵母源金屬硫蛋白對(duì)超氧陰離子自由基清除率24
• 2.2.3 酵母源金屬硫蛋白對(duì) DPPH 自由基清除率24-25
• 2.2.4 酵母源金屬硫蛋白總還原能力的測(cè)定25
• 2.2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析25
• 2.3 結(jié)果與分析25-28
• 2.3.1 酵母源金屬硫蛋白對(duì)羥基自由基清除作用25-26
• 2.3.2 酵母源金屬硫蛋白對(duì)超氧陰離子自由基清除作用26-27
• 2.3.3 酵母源金屬硫蛋白對(duì) DPPH 自由基清除作用27
• 2.3.4 酵母源金屬硫蛋白總還原能力27-28
• 2.4 本章小結(jié)28-29
• 第三章 酵母源金屬硫蛋白在模擬胃腸環(huán)境中對(duì)鉛離子的螯合作用29-37
• 3.1 材料與設(shè)備29-30
• 3.1.1 主要實(shí)驗(yàn)材料29-30
• 3.1.2 主要實(shí)驗(yàn)設(shè)備30
• 3.2 實(shí)驗(yàn)方法30-31
• 3.2.1 構(gòu)建模擬胃環(huán)境30
• 3.2.2 構(gòu)建模擬腸環(huán)境30
• 3.2.3 酵母源金屬硫蛋白在模擬胃腸道環(huán)境中對(duì)鉛離子的螯合率30-31
• 3.2.4 酵母源金屬硫蛋白在模擬胃腸液中的降解作用31
• 3.2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析31
• 3.3 結(jié)果與分析31-35
• 3.3.1 酵母源金屬硫蛋白在模擬胃環(huán)境中對(duì)鉛離子的螯合作用31-32
• 3.3.2 酵母源金屬硫蛋白在模擬腸環(huán)境中對(duì)鉛離子的螯合作用32-34
• 3.3.3 螯合體系重金屬離子的遷移與轉(zhuǎn)化34
• 3.3.4 酵母源金屬硫蛋白在模擬胃腸液中的降解作用34-35
• 3.4 本章小結(jié)35-37
• 第四章 酵母源金屬硫蛋白對(duì)急性鉛中毒小鼠排鉛及氧化損傷修復(fù)作用37-43
• 4.1 材料與設(shè)備37-38
• 4.1.1 主要實(shí)驗(yàn)材料37
• 4.1.2 主要實(shí)驗(yàn)設(shè)備37-38
• 4.1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物38
• 4.2 實(shí)驗(yàn)方法38-39
• 4.2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組與飼養(yǎng)38
• 4.2.2 給藥劑量與方法38
• 4.2.3 動(dòng)物指標(biāo)測(cè)定38-39
• 4.2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析39
• 4.3 結(jié)果與分析39-41
• 4.3.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物一般情況39
• 4.3.2 酵母源金屬硫蛋白對(duì)急性鉛中毒小鼠體重的影響39-40
• 4.3.3 酵母源金屬硫蛋白對(duì)急性鉛中毒小鼠血鉛水平的影響40
• 4.3.4 酵母源金屬硫蛋白對(duì)急性鉛中毒小鼠血清 MDA、SOD 及 GSH-Px 水平的影響40-41
• 4.4 本章小結(jié)41-43
• 第五章 酵母源金屬硫蛋白對(duì)慢性鉛中毒小鼠排鉛及肝腎功能保護(hù)作用43-51
• 5.1 材料與設(shè)備43-44
• 5.1.1 主要實(shí)驗(yàn)材料43
• 5.1.2 主要實(shí)驗(yàn)設(shè)備43-44
• 5.1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物44
• 5.2 實(shí)驗(yàn)方法44-45
• 5.2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組與飼養(yǎng)44
• 5.2.2 給藥劑量與方法44
• 5.2.3 動(dòng)物指標(biāo)測(cè)定44-45
• 5.2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析45
• 5.3 結(jié)果與分析45-50
• 5.3.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物一般情況45
• 5.3.2 酵母源金屬硫蛋白對(duì)慢性鉛中毒小鼠體重的影響45
• 5.3.3 酵母源金屬硫蛋白對(duì)慢性鉛中毒小鼠血鉛水平的影響45-46
• 5.3.4 酵母源金屬硫蛋白對(duì)慢性鉛中毒小鼠血常規(guī)指標(biāo)的影響46-47
• 5.3.5 酵母源金屬硫蛋白對(duì)慢性鉛中毒小鼠肝功能指標(biāo)的影響47-48
• 5.3.6 酵母源金屬硫蛋白對(duì)慢性鉛中毒小鼠肝組織病理學(xué)觀察的影響48-49
• 5.3.7 酵母源金屬硫蛋白對(duì)慢性鉛中毒小鼠腎組織病理學(xué)觀察的影響49-50
• 5.4 本章小結(jié)50-51
• 第六章 結(jié)論與展望51-53
• 6.1 研究結(jié)果51-52
• 6.2 創(chuàng)新點(diǎn)52
• 6.3 問(wèn)題與展望52-53
• 參考文獻(xiàn)53-61
• 致謝61-63
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷63-64
• 個(gè)人情況63
• 教育背景63
• 科研經(jīng)歷63
• 在學(xué)期間發(fā)表論文63-64
• 在學(xué)期間專(zhuān)利申請(qǐng)64

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 安建平;王廷璞;鄒亞麗;焦成瑾;張春成;劉海霞;權(quán)永妮;;鎘誘導(dǎo)黃瓜金屬硫蛋白的分離、純化和鑒定[J];安徽農(nóng)業(yè)科學(xué);2008年18期

2 季清洲,王立波,周元,茹炳根;金屬硫蛋白結(jié)合鉛離子的競(jìng)爭(zhēng)反應(yīng)和置換反應(yīng)研究[J];北京大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2000年04期

3 趙紅光,王志成,杜翔,呂U

本文編號(hào)：1040418