本文關(guān)鍵詞：江蘇省2006-2012年副溶血弧菌分離株血清型分布調(diào)查及多位點(diǎn)序列分型研究

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【摘要】：副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus,簡稱VP),革蘭氏陰性、嗜鹽性短桿菌,是沿岸海水、河海交界以及魚蝦貝類等海產(chǎn)品中的常見菌株,已經(jīng)發(fā)展成為引發(fā)食源性疾病的主要細(xì)菌,其對人類的危害僅僅次于沙門氏菌。近年來,副溶血弧菌引發(fā)的食物中毒事件已成為全球范圍內(nèi)的極為嚴(yán)重的食源性公共衛(wèi)生問題,世界衛(wèi)生組織曾報道,從1997年以來副溶血弧菌引發(fā)的各種疾病呈現(xiàn)持續(xù)上升的趨勢,尤其高發(fā)于中國和日本等沿海國家。副溶血弧菌(VP)感染動物常引起地方流行性胃腸炎,有時還引起傷口感染和敗血癥等一系列嚴(yán)重的臨床癥狀,但副溶血弧菌的致病機(jī)制尚不是很明確,存在一些爭議。因此,本研究主要通過對江蘇省出入境檢驗(yàn)檢疫局菌種庫中的61株副溶血弧菌(VP)進(jìn)行血清型分型、多位點(diǎn)序列分型和毒力因子攜帶情況分析,了解江蘇省水產(chǎn)品副溶血弧菌的流行病學(xué)情況。1、副溶血弧菌的血清型分布調(diào)查：副溶血弧菌的抗原結(jié)構(gòu)極為復(fù)雜,分析副溶血孤菌環(huán)境分離株和臨床分離株的血清型分布情況及相互關(guān)聯(lián),對VP引起的一系列疾病的防治具有非常重要的意義。據(jù)流行病學(xué)調(diào)查情況發(fā)現(xiàn),近年來副溶血弧菌的血清型分布情況發(fā)生了較大的變化,調(diào)查人群與外環(huán)境中VP菌型分布情況及內(nèi)在聯(lián)系,對該病的防治具有重要意義。本研究中采用血清玻片凝集試驗(yàn)對2006-2012年收集的61株副溶血弧菌環(huán)境分離株的血清型的分布情況進(jìn)行了詳細(xì)的調(diào)查,監(jiān)測點(diǎn)涵蓋了揚(yáng)州、太倉、常州、常熟、淮安、昆山、江都、如東、泗洪、泰州、無錫等11個地區(qū),分離株來自于熟食和海產(chǎn)品,研究發(fā)現(xiàn)了四種新的血清型組合,分別為O1:K33、O1:K68、O2:K25、O11:K31,試驗(yàn)中有2株為O抗原未定型,24株K抗原未定型,分型率為98.36%,主要集中在O1、O2、O3、O4、O5、O8、O10和O11等8個血清型,其中01型占31.14%,02型占18.03%,05型占16.39%,未見優(yōu)勢菌型。2、副溶血弧菌的多位點(diǎn)序列分型研究：通過多位點(diǎn)序列分型對本研究中的副溶血弧菌分離株進(jìn)行分型,試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)了1個新的dnaE等位基因,4個新的gyrB等位基因,5個新的recA等位基因,2個新的pntA等位基因,4個新的pyrC等位基因,共有22個新的ST型,其中有部分菌株因個別等位基因不能被識別而不能完成完整分型。多位點(diǎn)序列分型具有較好的分辨率而在病原微生物的分型分析研究中得到廣泛的應(yīng)用,在菌株溯源和生物進(jìn)化方面的研究中具有重要的指導(dǎo)意義。3、副溶血弧菌的毒力基因分布情況分析：試驗(yàn)中通過對tdh、trh、toxRS/new三對基因設(shè)計(jì)引物并進(jìn)行PCR擴(kuò)增發(fā)現(xiàn),所有的環(huán)境分離株均不攜帶tdh和trh基因,而toxRS/new基因檢出率為24%,這為進(jìn)一步研究副溶血弧菌的致病機(jī)制具有重要的生物學(xué)意義。
【關(guān)鍵詞】：副溶血弧菌 血清分型 毒力相關(guān)基因 多位點(diǎn)序列分型 遺傳譜系
【學(xué)位授予單位】：南京農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R155.5
【目錄】：

• 摘要6-8
• ABSTRACT8-10
• 第一篇 文獻(xiàn)綜述10-24
• 第一章 副溶血弧菌的研究進(jìn)展10-18
• 1 副溶血弧菌的流行病學(xué)10-12
• 2 副溶血弧菌的致病機(jī)理12-18
• 2.1 溶血毒素(Helmolyxin)13-14
• 2.2 黏附因子(Adhesin)14
• 2.3 尿素酶(Urease)14-15
• 2.4 侵襲力(Invasion)15
• 2.5 Ⅲ型分泌系統(tǒng)15-17
• 2.6 攝鐵系統(tǒng)17-18
• 第二章 副溶血弧菌分型技術(shù)的研究進(jìn)展18-24
• 1 副溶血弧菌的傳統(tǒng)分型技術(shù)18-19
• 1.1 副溶血弧菌血清學(xué)分型18-19
• 1.2 副溶血弧菌噬菌體分型19
• 2 副溶血弧菌的分子分型技術(shù)19-24
• 2.1 MLST分型19-21
• 2.2 PFGE分型21-22
• 2.3 MLVA分型22
• 2.4 RAPD分型22-23
• 2.5 核糖體分型23-24
• 第二篇 試驗(yàn)研究24-52
• 第三章 副溶血弧菌的血清型分析24-34
• 摘要24-25
• 1 材料與方法25-28
• 1.1 試劑和儀器25-27
• 1.2 副溶血弧菌的分離鑒定27
• 1.2.1 副溶血弧菌的形態(tài)鑒定27
• 1.2.2 副溶血弧菌的生化鑒定27
• 1.3 血清型分型方法27-28
• 1.3.1 復(fù)蘇菌種27-28
• 1.3.2 K抗原檢測28
• 1.3.3 O抗原檢測28
• 2 結(jié)果28-31
• 2.1 副溶血弧菌的分離鑒定28-29
• 2.2 2006年-2012年江蘇省VP分離株血清型分布情況29-30
• 2.3 2006年-2012年江蘇省不同地區(qū)VP分離株血清型比例分布30
• 2.4 副溶血弧菌新菌型30-31
• 3 討論31-33
• ABSTRACT33-34
• 第四章 副溶血弧菌的MLST分析34-46
• 摘要34-35
• 1 材料與方法35-38
• 1.1 菌株與試劑35
• 1.2 模板DNA的提取35-36
• 1.3 方法36-38
• 1.3.1 引物設(shè)計(jì)36-37
• 1.3.2 PCR反應(yīng)體系與條件37
• 1.3.3 PCR產(chǎn)物凝膠電泳圖譜驗(yàn)證、測序及序列對比37
• 1.3.4 新序列賦值37-38
• 2 結(jié)果38-44
• 2.1 七位管家基因PCR電泳圖38-40
• 2.1.1 gyrB位點(diǎn)部分菌株電泳圖38
• 2.1.2 pntA位點(diǎn)部分菌株電泳圖38-39
• 2.1.3 pyrC位點(diǎn)部分菌株電泳圖39
• 2.1.4 七對看家基因電泳圖39-40
• 2.2 VP菌株的MLST分析40-43
• 2.2.1 VP菌株的MLST分型結(jié)果40-41
• 2.2.2 VP菌株的Phylodendron遺傳進(jìn)化分型結(jié)果41-43
• 2.3 新等位基因值及新STs43-44
• 3 討論44-45
• ABSTRACT45-46
• 第五章 副溶血弧菌的毒力基因分布情況分析46-52
• 摘要46-47
• 1 材料與方法47-48
• 1.1 材料47
• 1.1.1 菌株47
• 1.1.2 主要試劑47
• 1.2 方法47-48
• 1.2.1 引物設(shè)計(jì)47
• 1.2.2 PCR反應(yīng)體系與條件47-48
• 1.2.3 細(xì)菌DNA的提取48
• 2 結(jié)果48-49
• 3 討論49-51
• ABSTRACT51-52
• 參考文獻(xiàn)52-60
• 全文總結(jié)60-62
• 致謝62

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本文編號：1029243