本文關鍵詞：巨噬細胞對貧鈾顆粒的吞噬及吞噬后上清對支氣管上皮細胞的作用研究

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【摘要】：目的 建立肺巨噬細胞吞噬貧鈾（DU）顆粒的細胞模型，模擬人肺吸入DU顆粒后的吞噬廓清過程，觀察DU顆粒吞噬消解規(guī)律及在此過程中巨噬細胞的損傷效應，并對該效應致支氣管上皮細胞的作用進行研究，為貧鈾武器的損傷和醫(yī)學防護提供依據(jù)。 方法 以巨噬細胞（AM）為研究對象，采用難溶性貧鈾顆粒進行染毒。應用透射電鏡觀察巨噬細胞吞噬鈾顆粒的情況；采用酶聯(lián)免疫分析法測定吞噬過程中酸性磷酸酶（ACP）、溶菌酶（LZP）的變化；采用濕消化法測定巨噬細胞吞噬鈾顆粒后上清中可溶性鈾含量變化，明確AM對DU消化溶解的能力；通過液體懸浮芯片技術測定細胞培養(yǎng)上清IL-1β、IL-10、IL-6、GM-CSF、IL-5、IFN-γ、TNF-α、IL-2、IL-4、 IL-8等細胞因子的含量；采用CCK-8法測定巨噬細胞存活；化學/熒光發(fā)光儀檢測細胞內(nèi)活性氧變化，Griess Reagent法檢測活細胞內(nèi)活性氮（NO），DTNB法檢測谷胱甘肽水平改變。 采用吞噬DU顆粒的巨噬細胞培養(yǎng)上清作用于人支氣管上皮細胞系BEP-2D，通過CCK-8法測定支氣管上皮細胞BEP-2D存活、化學/熒光發(fā)光儀檢測支氣管上皮細胞BEP-2D細胞內(nèi)活性氧變化，模擬人肺巨噬細胞吞噬DU顆粒后對支氣管上皮細胞的作用。 結果 1、透射電鏡下觀察到，低濃度染毒時DU顆粒被一單層溶酶體膜包裹著，說明該顆粒是在溶酶體內(nèi)被吞噬消化的，但隨顆粒濃度的增加到40μg/cm2時，大量的DU顆粒便聚集在細胞內(nèi)，并以空泡狀存在巨噬細胞中，提示DU顆粒過多，超出溶酶體吞噬消化的能力。 2、巨噬細胞經(jīng)DU染毒后，細胞內(nèi)ACP酶含量隨時間及濃度的增加，，ACP酶的含量呈總體下降趨勢；而LZP酶含量隨時間與濃度的增加無上升或下降趨勢，表明巨噬吞噬消化DU顆粒時消耗ACP酶。 3、巨噬細胞經(jīng)DU染毒后，4小時后與正常對照組相比，上清中可溶性鈾含量顯著增加。12小時后，巨噬細胞上清中可溶性鈾含量細胞達到高峰，24小時后巨噬細胞上清液中可溶性鈾與12小時相比時沒有顯著升高，這可能是由于巨噬細胞吞噬DU顆粒的作用達到飽和，也可能是由于DU損傷巨噬細胞，導致吞噬能力下降，從而降低了對DU顆粒的消化溶解。 4、巨噬細胞經(jīng)DU染毒后，巨噬細胞存活率顯著下降，而細胞上清中IL-1β、TNF-α、IL-4、IL-8等炎性細胞因子明顯增加，同時細胞內(nèi)活性氧、活性氮上升，谷胱甘肽下降；以上結果表明，DU顆粒可能是通過產(chǎn)生炎癥因子及氧化應激機制來損傷巨噬細胞。 5、BEP-2D細胞經(jīng)吞噬DU顆粒后的巨噬細胞上清作用后，與正常上清組比較，BEP-2D細胞存活率顯著下降、ROS上升，提示巨噬細胞吞噬DU后釋放可損傷BEP-2D的物質(zhì)。 結論 DU經(jīng)巨噬細胞吞噬后在溶酶體中被溶解消化成可溶性鈾，并通過氧化應激這一機制損傷巨噬細胞；經(jīng)DU刺激巨噬細胞的上清作用于BEP-2D，可導致BEP-2D損傷。
【關鍵詞】：貧鈾 巨噬細胞 吞噬 可溶性鈾
【學位授予單位】：蘇州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R114
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-11
• 前言11-14
• 第一部分 THP-1 巨噬細胞的培養(yǎng)與鑒定14-20
• 1．實驗材料14-15
• 1.1 主要試劑及耗材14
• 1.2 儀器與設備14-15
• 1.3 主要試劑在配置15
• 2．實驗方法15-17
• 2.1 THP-1 細胞細胞培養(yǎng)，傳代15
• 2.2 THP-1 細胞的凍存與復蘇15-16
• 2.3 THP-1 巨噬細胞的鑒定16-17
• 3．結果17-18
• 3.1 經(jīng) PMA 誘導分化后光鏡下細胞形態(tài)17
• 3.2 免疫熒光法細胞染色后變化17-18
• 討論18-20
• 第二部分 巨噬細胞對 DU 顆粒的吞噬20-36
• 1．實驗材料21-22
• 1.1 主要試劑及耗材21
• 1.2 儀器與設備21
• 1.3 主要試劑配置21-22
• 2．實驗方法22-25
• 2.1 巨噬細胞的存活率22
• 2.2 透射電鏡觀察巨噬細胞的吞噬22-23
• 2.3 酸性磷酸酶的檢測23
• 2.4 溶菌酶的檢測23
• 2.5 巨噬細胞上清中可溶性鈾的測定23-24
• 2.6 上清中細胞因子測定24
• 2.7 巨噬細胞內(nèi)外活性氧的檢測24
• 2.8 巨噬細胞內(nèi) NO 的測定24-25
• 2.9 巨噬細胞內(nèi) GSH 檢測25
• 2.10 統(tǒng)計分析25
• 3．結果25-31
• 3.1 細胞存活實驗25-26
• 3.2 透射電鏡觀察巨噬細胞的吞噬26
• 3.3 巨噬細胞上清與細胞內(nèi)的酸性磷酸酶26-27
• 3.4 巨噬細胞上清與細胞內(nèi)的溶菌酶27-28
• 3.5 巨噬細胞上清中可溶性鈾含量28-29
• 3.6 DU 顆粒誘導的巨噬細胞因子29-30
• 3.7 貧鈾誘發(fā)巨噬細胞 ROS、NO 的增高，GSH 的下降30-31
• 4． 討論31-36
• 4.1 巨噬細胞吞噬 DU 顆粒31-32
• 4.2 肺巨噬細胞吞噬 DU 顆粒后引起可溶性鈾的釋放32
• 4.3 DU 顆粒促使炎癥因子分泌32-34
• 4.4 DU 顆粒引起巨噬細胞存活下降34-36
• 第三部分 巨噬細胞吞噬貧鈾顆粒后上清中細胞因子對 BEP-2D 細胞的影響36-41
• 1．實驗材料36
• 1.1 主要試劑及耗材36
• 1.2 儀器與設備36
• 1.3 主要試劑在配置36
• 2．實驗分組36-37
• 3．實驗方法37-38
• 3.1 BEP-2D 細胞存活率的測定37
• 3.2 BEP-2D 細胞內(nèi)外活性氧的探測37-38
• 4．結果38-40
• 4.1 BEP-2D 細胞存活率38-39
• 4.2 BEP-2D 細胞 ROS 的釋放39-40
• 討論40-41
• 結論41-42
• 參考文獻42-47
• 綜述：貧鈾細胞毒性的研究進展47-54
• 參考文獻51-54
• 碩士期間發(fā)表的論文54-55
• 英文縮寫詞索引55-56
• 致謝56-58

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 楊陟華,范保星,陸穎,曹珍山,于水,樊飛躍,朱茂祥;貧鈾誘發(fā)人支氣管上皮細胞惡性轉化[J];癌癥;2002年09期

2 朱茂祥;周平坤;;貧鈾的健康影響研究進展[J];輻射防護通訊;2009年05期

3 李玉瑞;肺泡巨噬細胞[J];國外醫(yī)學參考資料(衛(wèi)生學分冊);1975年01期

4 呂建新,陳國榮,金麗琴,李東,楊開顏,王開發(fā),張玉蘭;蜂花粉對小鼠腹腔巨噬細胞酶活性的影響[J];免疫學雜志;1993年02期

5 曹珍山,朱茂祥,楊陟華,潘秀頡,李元敏;大鼠吸入貧鈾氣溶膠后主要器官的病理損傷特點[J];中國輻射衛(wèi)生;2005年02期

6 鄧冰;劉寧;王和義;蔣樹斌;;鈾的毒性研究進展[J];中國輻射衛(wèi)生;2010年01期

7 常強;馬迅;牛建鵬;王詠波;;CD68巨噬細胞在腰椎間盤突出組織中的分布及其意義[J];臨床醫(yī)藥實踐雜志;2008年05期

8 黃波;龍穎;李梓民;楊陟華;曹珍山;朱茂祥;;貧鈾對支氣管上皮細胞遺傳毒性及DMSO的保護作用[J];實用預防醫(yī)學;2009年03期

9 冷言冰;李蓉;艾國平;徐輝;粟永萍;程天民;;貧鈾長期接觸后在大鼠體內(nèi)的吸收分布特點[J];西北國防醫(yī)學雜志;2008年03期

10 于水;鄒曉穎;趙法;楊陟華;王勇;楊國山;朱茂祥;;貧鈾氣溶膠的理化特性研究[J];中華放射醫(yī)學與防護雜志;2003年05期

本文編號：1018029