發(fā)布時(shí)間：2017-10-12 09:44

  本文關(guān)鍵詞：巨噬細(xì)胞對(duì)貧鈾顆粒的吞噬及吞噬后上清對(duì)支氣管上皮細(xì)胞的作用研究

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【摘要】：目的 建立肺巨噬細(xì)胞吞噬貧鈾（DU）顆粒的細(xì)胞模型，模擬人肺吸入DU顆粒后的吞噬廓清過(guò)程，觀察DU顆粒吞噬消解規(guī)律及在此過(guò)程中巨噬細(xì)胞的損傷效應(yīng)，并對(duì)該效應(yīng)致支氣管上皮細(xì)胞的作用進(jìn)行研究，為貧鈾武器的損傷和醫(yī)學(xué)防護(hù)提供依據(jù)。 方法 以巨噬細(xì)胞（AM）為研究對(duì)象，采用難溶性貧鈾顆粒進(jìn)行染毒。應(yīng)用透射電鏡觀察巨噬細(xì)胞吞噬鈾顆粒的情況；采用酶聯(lián)免疫分析法測(cè)定吞噬過(guò)程中酸性磷酸酶（ACP）、溶菌酶（LZP）的變化；采用濕消化法測(cè)定巨噬細(xì)胞吞噬鈾顆粒后上清中可溶性鈾含量變化，明確AM對(duì)DU消化溶解的能力；通過(guò)液體懸浮芯片技術(shù)測(cè)定細(xì)胞培養(yǎng)上清IL-1β、IL-10、IL-6、GM-CSF、IL-5、IFN-γ、TNF-α、IL-2、IL-4、 IL-8等細(xì)胞因子的含量；采用CCK-8法測(cè)定巨噬細(xì)胞存活；化學(xué)/熒光發(fā)光儀檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)活性氧變化，Griess Reagent法檢測(cè)活細(xì)胞內(nèi)活性氮（NO），DTNB法檢測(cè)谷胱甘肽水平改變。 采用吞噬DU顆粒的巨噬細(xì)胞培養(yǎng)上清作用于人支氣管上皮細(xì)胞系BEP-2D，通過(guò)CCK-8法測(cè)定支氣管上皮細(xì)胞BEP-2D存活、化學(xué)/熒光發(fā)光儀檢測(cè)支氣管上皮細(xì)胞BEP-2D細(xì)胞內(nèi)活性氧變化，模擬人肺巨噬細(xì)胞吞噬DU顆粒后對(duì)支氣管上皮細(xì)胞的作用。 結(jié)果 1、透射電鏡下觀察到，低濃度染毒時(shí)DU顆粒被一單層溶酶體膜包裹著，說(shuō)明該顆粒是在溶酶體內(nèi)被吞噬消化的，但隨顆粒濃度的增加到40μg/cm2時(shí)，大量的DU顆粒便聚集在細(xì)胞內(nèi)，并以空泡狀存在巨噬細(xì)胞中，提示DU顆粒過(guò)多，超出溶酶體吞噬消化的能力。 2、巨噬細(xì)胞經(jīng)DU染毒后，細(xì)胞內(nèi)ACP酶含量隨時(shí)間及濃度的增加，，ACP酶的含量呈總體下降趨勢(shì)；而LZP酶含量隨時(shí)間與濃度的增加無(wú)上升或下降趨勢(shì)，表明巨噬吞噬消化DU顆粒時(shí)消耗ACP酶。 3、巨噬細(xì)胞經(jīng)DU染毒后，4小時(shí)后與正常對(duì)照組相比，上清中可溶性鈾含量顯著增加。12小時(shí)后，巨噬細(xì)胞上清中可溶性鈾含量細(xì)胞達(dá)到高峰，24小時(shí)后巨噬細(xì)胞上清液中可溶性鈾與12小時(shí)相比時(shí)沒(méi)有顯著升高，這可能是由于巨噬細(xì)胞吞噬DU顆粒的作用達(dá)到飽和，也可能是由于DU損傷巨噬細(xì)胞，導(dǎo)致吞噬能力下降，從而降低了對(duì)DU顆粒的消化溶解。 4、巨噬細(xì)胞經(jīng)DU染毒后，巨噬細(xì)胞存活率顯著下降，而細(xì)胞上清中IL-1β、TNF-α、IL-4、IL-8等炎性細(xì)胞因子明顯增加，同時(shí)細(xì)胞內(nèi)活性氧、活性氮上升，谷胱甘肽下降；以上結(jié)果表明，DU顆粒可能是通過(guò)產(chǎn)生炎癥因子及氧化應(yīng)激機(jī)制來(lái)?yè)p傷巨噬細(xì)胞。 5、BEP-2D細(xì)胞經(jīng)吞噬DU顆粒后的巨噬細(xì)胞上清作用后，與正常上清組比較，BEP-2D細(xì)胞存活率顯著下降、ROS上升，提示巨噬細(xì)胞吞噬DU后釋放可損傷BEP-2D的物質(zhì)。 結(jié)論 DU經(jīng)巨噬細(xì)胞吞噬后在溶酶體中被溶解消化成可溶性鈾，并通過(guò)氧化應(yīng)激這一機(jī)制損傷巨噬細(xì)胞；經(jīng)DU刺激巨噬細(xì)胞的上清作用于BEP-2D，可導(dǎo)致BEP-2D損傷。
【關(guān)鍵詞】：貧鈾 巨噬細(xì)胞 吞噬 可溶性鈾
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R114
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-11
• 前言11-14
• 第一部分 THP-1 巨噬細(xì)胞的培養(yǎng)與鑒定14-20
• 1．實(shí)驗(yàn)材料14-15
• 1.1 主要試劑及耗材14
• 1.2 儀器與設(shè)備14-15
• 1.3 主要試劑在配置15
• 2．實(shí)驗(yàn)方法15-17
• 2.1 THP-1 細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)，傳代15
• 2.2 THP-1 細(xì)胞的凍存與復(fù)蘇15-16
• 2.3 THP-1 巨噬細(xì)胞的鑒定16-17
• 3．結(jié)果17-18
• 3.1 經(jīng) PMA 誘導(dǎo)分化后光鏡下細(xì)胞形態(tài)17
• 3.2 免疫熒光法細(xì)胞染色后變化17-18
• 討論18-20
• 第二部分 巨噬細(xì)胞對(duì) DU 顆粒的吞噬20-36
• 1．實(shí)驗(yàn)材料21-22
• 1.1 主要試劑及耗材21
• 1.2 儀器與設(shè)備21
• 1.3 主要試劑配置21-22
• 2．實(shí)驗(yàn)方法22-25
• 2.1 巨噬細(xì)胞的存活率22
• 2.2 透射電鏡觀察巨噬細(xì)胞的吞噬22-23
• 2.3 酸性磷酸酶的檢測(cè)23
• 2.4 溶菌酶的檢測(cè)23
• 2.5 巨噬細(xì)胞上清中可溶性鈾的測(cè)定23-24
• 2.6 上清中細(xì)胞因子測(cè)定24
• 2.7 巨噬細(xì)胞內(nèi)外活性氧的檢測(cè)24
• 2.8 巨噬細(xì)胞內(nèi) NO 的測(cè)定24-25
• 2.9 巨噬細(xì)胞內(nèi) GSH 檢測(cè)25
• 2.10 統(tǒng)計(jì)分析25
• 3．結(jié)果25-31
• 3.1 細(xì)胞存活實(shí)驗(yàn)25-26
• 3.2 透射電鏡觀察巨噬細(xì)胞的吞噬26
• 3.3 巨噬細(xì)胞上清與細(xì)胞內(nèi)的酸性磷酸酶26-27
• 3.4 巨噬細(xì)胞上清與細(xì)胞內(nèi)的溶菌酶27-28
• 3.5 巨噬細(xì)胞上清中可溶性鈾含量28-29
• 3.6 DU 顆粒誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞因子29-30
• 3.7 貧鈾誘發(fā)巨噬細(xì)胞 ROS、NO 的增高，GSH 的下降30-31
• 4． 討論31-36
• 4.1 巨噬細(xì)胞吞噬 DU 顆粒31-32
• 4.2 肺巨噬細(xì)胞吞噬 DU 顆粒后引起可溶性鈾的釋放32
• 4.3 DU 顆粒促使炎癥因子分泌32-34
• 4.4 DU 顆粒引起巨噬細(xì)胞存活下降34-36
• 第三部分 巨噬細(xì)胞吞噬貧鈾顆粒后上清中細(xì)胞因子對(duì) BEP-2D 細(xì)胞的影響36-41
• 1．實(shí)驗(yàn)材料36
• 1.1 主要試劑及耗材36
• 1.2 儀器與設(shè)備36
• 1.3 主要試劑在配置36
• 2．實(shí)驗(yàn)分組36-37
• 3．實(shí)驗(yàn)方法37-38
• 3.1 BEP-2D 細(xì)胞存活率的測(cè)定37
• 3.2 BEP-2D 細(xì)胞內(nèi)外活性氧的探測(cè)37-38
• 4．結(jié)果38-40
• 4.1 BEP-2D 細(xì)胞存活率38-39
• 4.2 BEP-2D 細(xì)胞 ROS 的釋放39-40
• 討論40-41
• 結(jié)論41-42
• 參考文獻(xiàn)42-47
• 綜述：貧鈾細(xì)胞毒性的研究進(jìn)展47-54
• 參考文獻(xiàn)51-54
• 碩士期間發(fā)表的論文54-55
• 英文縮寫詞索引55-56
• 致謝56-58

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1018029