本文關(guān)鍵詞：氯化甲基汞誘導(dǎo)的神經(jīng)免疫炎癥及α7煙堿型乙酰膽堿受體介導(dǎo)的抗炎作用

  更多相關(guān)文章： α7nAChR MeHgCl 小膠質(zhì)細(xì)胞 膽堿能抗炎通路

【摘要】：甲基汞可以引起神經(jīng)免疫炎癥反應(yīng),但其作用機(jī)理尚未闡明。小膠質(zhì)細(xì)胞是中樞神經(jīng)系統(tǒng)的主要免疫細(xì)胞,被激活可釋放多種細(xì)胞因子和炎癥介質(zhì),影響慢性炎癥引起的各種中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病的病程和轉(zhuǎn)歸。α7煙堿型乙酰膽堿受體(α7 nicotinic acetylcholine receptor,α7n ACh R)作為免疫細(xì)胞中膽堿能抗炎通路的關(guān)鍵分子,是調(diào)節(jié)小膠質(zhì)細(xì)胞活化和抑制炎癥發(fā)生的調(diào)控位點(diǎn)。研究目的:探討氯化甲基汞(methylmercury chlorid,Me Hg Cl)神經(jīng)免疫毒性作用機(jī)制及α7n ACh R抗炎通路的保護(hù)作用。研究方法:第一部分:甲基汞染毒模型的制備及煙堿的干預(yù)作用。實(shí)驗(yàn)動物隨機(jī)分為對照組、模型組、N干預(yù)組和N組,每組10只。模型組Me Hg Cl染毒,N干預(yù)組和N組給予煙堿(nicotine,Nic)治療,對照組給予等量生理鹽水,共12周。應(yīng)用免疫熒光法觀察Nic對Me Hg Cl暴露大鼠海馬齒狀回(dentate gyrus,DG)α7n ACh R與Iba-1陽性細(xì)胞表達(dá)的影響;采用q RT-PCR技術(shù)檢測Nic對Me Hg Cl暴露大鼠海馬α7n ACh R m RNA的表達(dá)水平影響;采用Dot-Blot法測定海馬IL-1β、IL-6和IL-10的水平;用ELISA法檢測血清IL-1β水平。第二部分:甲基汞染毒細(xì)胞模型的制備及Nic和MLA的干預(yù)作用。采用Me Hg Cl暴露致BV2細(xì)胞和PC12細(xì)胞染毒模型為研究對象,觀察Nic、甲基牛扁亭堿(methyllycaconitine,MLA)對Me Hg Cl暴露下BV2細(xì)胞和PC12細(xì)胞的影響。首先用MTT比色法動態(tài)觀察不同濃度Me Hg Cl對細(xì)胞活力的影響。然后,將實(shí)驗(yàn)隨機(jī)分為對照組、模型組、N干預(yù)組、M干預(yù)組、N組和M組。N干預(yù)組和M干預(yù)組分別給予Nic和MLA預(yù)處理后染毒,對照組給予等量PBS,處理12h、24h、48h后檢測各項指標(biāo)的改變。采用MTT法觀察細(xì)胞活力的改變。通過ELISA法動態(tài)檢測BV2細(xì)胞釋放IL-1β、IL-6和IL-10水平的變化。采用q RT-PCR技術(shù)測定BV2細(xì)胞α7n ACh R、NF-κB(p65)和COX-2 m RNA表達(dá)水平,觀察不同濃度Me Hg Cl對PC12細(xì)胞α7n ACh R m RNA表達(dá)水平的影響。采用細(xì)胞免疫組織化學(xué)法觀察小膠質(zhì)細(xì)胞α7n ACh R、EP3和p65蛋白,和PC12細(xì)胞α7n ACh R的表達(dá)。所有結(jié)果用?x±s表示。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS17.0軟件分析,各組間比較用單因素方差分析,兩兩比較采用LSD法,檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05,以P0.05表示有顯著性差異。結(jié)果在體實(shí)驗(yàn)部分:1、Nic對Me Hg Cl暴露大鼠海馬DG區(qū)α7n ACh R與Iba-1陽性細(xì)胞表達(dá)的影響。結(jié)果顯示,與對照組相比,模型組α7n ACh R陽性細(xì)胞減少,特異性表達(dá)Iba-1的小膠質(zhì)細(xì)胞增多,呈阿米巴樣;與模型組比較,N干預(yù)組α7n ACh R陽性細(xì)胞和小膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)量明顯增多,小膠質(zhì)細(xì)胞輪廓清晰,有突起。2、Nic對Me Hg Cl暴露大鼠海馬α7n ACh R m RNA表達(dá)水平的影響。結(jié)果顯示,與對照組相比,模型組α7n ACh R m RNA明顯降低(P0.001);與模型組相比,N干預(yù)組α7n ACh R m RNA水平顯著上升(P0.001)。3、Me Hg Cl暴露對大鼠海馬IL-1β、IL-6和IL-10的影響。與對照組相比,模型組IL-1β和IL-6含量明顯升高(P0.001,P0.001),IL-10無顯著差異(P0.05)。4、大鼠血清中IL-1β的影響。結(jié)果顯示,與對照組相比,模型組血清中IL-1β明顯升高(P0.001);與模型組相比,N干預(yù)組IL-1β水平顯著下降(P0.001)。離體實(shí)驗(yàn)部分:5、Nic與MLA對Me Hg Cl處理下細(xì)胞活力的變化。Me Hg Cl可顯著降低BV2和PC12細(xì)胞活力,并存在劑量依賴性(P0.05,P0.01,P0.001)和時間依賴性(P0.05,P0.01,P0.001)。與同一時間模型組相比,Nic與MLA干預(yù)組均可以不同程度改善細(xì)胞的存活率(P0.05,P0.01)。6、Nic與MLA對Me Hg Cl處理BV2細(xì)胞分泌炎癥因子的影響。與對照組相比,Me Hg Cl暴露致IL-6和IL-10的分泌增多,在24h時達(dá)高峰(P0.05,P0.001);而在對應(yīng)時間,N干預(yù)組和M干預(yù)組IL-6和IL-10水平均較模型組降低(P0.05,P0.001);IL-1β各時間點(diǎn)均無顯著變化(P0.05)。7、膽堿能抗炎通路中相關(guān)因子m RNA水平的變化。①M(fèi)e Hg Cl組COX-2 m RNA表達(dá)水平在12h上調(diào)(P0.05),隨著暴露時間延長后,其表達(dá)水平迅速降低,在24h和48h其水平明顯下降(P0.001)。Nic干預(yù)組和MLA干預(yù)組COX-2 m RNA表達(dá)水平在12h較模型組顯著升高(P0.001),在24h和48h仍然保持高水平。②Me Hg Cl組p65m RNA表達(dá)水平在12h顯著上升(P0.001),而Nic干預(yù)組和MLA干預(yù)組在12hp65m RNA表達(dá)水平顯著抑制(P0.001)。③不同濃度Me Hg Cl對PC12細(xì)胞α7 n Ach R m RNA水平均有顯著抑制作用(P0.001),Nic干預(yù)組和MLA干預(yù)組α7n Ach R m RNA水平明顯升高(P0.001)。8、膽堿能抗炎通路中相關(guān)因子蛋白水平的變化。與對照組比較,Me Hg Cl處理BV2細(xì)胞12h引起p65蛋白核內(nèi)表達(dá)升高;24hα7n ACh R表達(dá)降低(P0.01)和EP3表達(dá)增高(P0.01);與模型組比較,N干預(yù)組和M干預(yù)組α7n ACh R蛋白表達(dá)明顯增強(qiáng)(P0.05),p65核內(nèi)表達(dá)降低。Nic干預(yù)組EP3蛋白表達(dá)水平顯著高于模型組(P0.001),而MLA干預(yù)組與對照組比較無明顯變化。結(jié)論1、Me Hg Cl對BV2細(xì)胞和PC12細(xì)胞有直接細(xì)胞毒性作用,并存在時間依賴性和劑量依賴性,調(diào)控α7n ACh R可以抑制Me Hg Cl誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡。2、Me Hg Cl誘導(dǎo)神經(jīng)免疫炎癥與損害α7n ACh R介導(dǎo)的膽堿能抗炎信號通路的相關(guān)因子結(jié)構(gòu)和功能有關(guān)。3、Nic和MLA調(diào)節(jié)α7n ACh R蛋白表達(dá)和基因轉(zhuǎn)錄水平,引起α7n ACh R膽堿能通路有關(guān)信號因子NF-κB(p65)、COX-2和EP3表達(dá)水平改變,發(fā)揮抗炎作用。
【關(guān)鍵詞】：α7nAChR MeHgCl 小膠質(zhì)細(xì)胞 膽堿能抗炎通路
【學(xué)位授予單位】：寧夏醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R114
【目錄】：

• 摘要4-8
• ABSTRACT8-12
• 英文縮寫詞表12-14
• 前言14-16
• 第一部分：在體觀察MeHgCl誘導(dǎo)的免疫炎癥及α7nAChR介導(dǎo)的抗炎作用16-28
• 實(shí)驗(yàn)材料及方法16-24
• 結(jié)果24-28
• 第二部分：離體觀察MeHgCl誘導(dǎo)的神經(jīng)免疫炎癥以及α7nAChR介導(dǎo)的抗炎作用28-56
• 實(shí)驗(yàn)材料及方法28-41
• 結(jié)果41-56
• 討論56-61
• 結(jié)論61-62
• 參考文獻(xiàn)62-70
• 文獻(xiàn)綜述70-80
• 綜述參考文獻(xiàn)75-80
• 致謝80-81
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文81-82
• 個人簡歷82

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 張營麗;唐偉;;阿爾茨海默病的影響因素[J];中國實(shí)用神經(jīng)疾病雜志;2012年19期

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本文編號：1002185