【摘要】：研究背景:腸道病毒(enterovirus,EV)歸屬于小RNA病毒目小RNA病毒科中的腸道病毒屬。目前已經(jīng)報道的EV有116種血清型,分屬于15個組:EV-A至EV-L,以及鼻病毒A-C組。腸道病毒為無包膜病毒,在酸性環(huán)境中穩(wěn)定,對紫外線敏感,目前實驗室常用的EV滅活方式包括熱力滅活、紫外線照射、含氯消毒劑及甲醛熏蒸等方式。Echovirus 11作為EV-B的一員,是較常分離到的EV,疾病譜分布廣泛:從輕度非特異性癥狀到全身性疾病,如皮疹,發(fā)熱,手足口病(Handfoot,andmouthdisease,HFMD),葡萄膜炎(uveitis)和嚴重的神經(jīng)系統(tǒng)疾病,包括無菌性腦膜炎,腦炎和急性遲緩性麻痹(acute flaccid paralysis,AFP)等。特別是導致新生兒敗血癥樣癥狀(sepsis-likedisease)和多器官系統(tǒng)出血(multisystem hemorrhagic disease)的發(fā)生,其高病死率引起社會恐慌。文獻提示,有關(guān)E-11流行病學和基因特征及實驗室EV滅活效果評價方面的研究仍比較匱乏。僅有的E-11基因特征研究在地理分布和時間跨度上也較為局限,本實驗室曾經(jīng)對1999年西藏自治區(qū)和1999-2003年山東省AFP病例中分離得到的E-11毒株進行過相關(guān)研究,本研究在此基礎上依托HFMD網(wǎng)絡實驗室監(jiān)測技術(shù)平臺,首次對中國大陸分離得到的E-11毒株進行流行病學、基因特征及遺傳進化等方面的系統(tǒng)研究;并在EV生物安全二級實驗室(Biosafety laboratory-2,BSL-2)中首次對EV常用滅活方式進行了系統(tǒng)評價。研究目的:闡明我國E-11的流行規(guī)律,建立E-11 VP1全長及全基因組序列的測定方法,更新E-11基于VP1全長的基因分型結(jié)果,系統(tǒng)掌握E-11不同基因型別毒株在全球及全國范圍內(nèi)的分布及流行規(guī)律,完善對其基因重組及遺傳進化規(guī)律的認識,為E-11的進一步研究提供基礎數(shù)據(jù),為相關(guān)疾病的預警預測及預防控制提供科學依據(jù)。系統(tǒng)評價EV常用滅活方式的滅活效果,建立BSL-2實驗室表面消毒技術(shù),確保實驗操作人員安全,為生物安全管理提供可靠數(shù)據(jù)。研究方法:基于中國疾病預防控制中心病毒病預防控制所建立的中國大陸AFP、HFMD網(wǎng)絡實驗室監(jiān)測技術(shù)平臺,收集1999-2003年,2008-2017年中國大陸由E-11引起的共59例AFP及HFMD病例信息,并擴增全部E-11 VP1全長序列。同時收集篩選GenBank數(shù)據(jù)庫500條國內(nèi)外E-11 VP1編碼區(qū)全長序列,建立E-11 VP1區(qū)全長序列數(shù)據(jù)集;對從HFMD網(wǎng)絡實驗室檢測平臺獲得的17株E-11毒株進行全基因組測序,使用Sequencher、MEGA、Bioedit、Simplot軟件對其基因序列特征,重組情況和進化規(guī)律等特征進行系統(tǒng)分析。利用細胞培養(yǎng)技術(shù),將滅活處理后的病毒接種于細胞進行病毒滴度實驗,通過觀察細胞病變效應(CPE),并利用behrens-karber法計算滅活后EV的TCID5o,評價EV熱力滅活及常用消毒劑的滅活效果。研究結(jié)果:1.截止至2018年12月5日,共收集到國內(nèi)外E-11 VP1區(qū)核苷酸序列全長559條,其中包含分離至六大洲33個國家,時間跨度為1953-2014年度,來源于11種疾病類型的E-11 VP1區(qū)全長序列359條和分離至中國大陸1994-2017年12個省份(自治區(qū))的200條E-11VP1區(qū)核苷酸全長序列。其中59條為本實驗室分離株:41株來源于本實驗室前期基于AFP網(wǎng)絡實驗室監(jiān)測技術(shù)平臺,18株來源于HFMD網(wǎng)絡實驗室監(jiān)測平臺。HFMD來源的18株E-11毒株中有4株為重癥HFMD,分離至2012年廣東省,2010年湖南省,海南省和2017年河北省。2.基于VP1區(qū)核苷酸序列全長,按照腸道病毒基因型別劃分標準將E-11劃分為A-F六個基因型,基因型A,C和D可被進一步劃分為A1-A5,C1-C4和D1-D5基因亞型。其中基因型F是本研究劃分的新基因型,D5基因亞型在HFMD中的檢出為國內(nèi)首次報道。3.除中國大陸外共獲得六大洲33個國家,時間跨度為1953-2014期間的359株E-11毒株,經(jīng)分型鑒定后分布于A4-A5、B、C2、C4、D1-D5和F基因(亞)型中。D5基因亞型為1998-2014年度國外流行的優(yōu)勢基因亞型,首次于1998年分離于Tunsia。4.中國大陸分離至1994-2017年度的200株E-11經(jīng)分型鑒定后,分布于A1-A3、B、C1、C3、D5和E基因(亞)型中,A1基因亞型為2008-2017年度中國大陸流行的優(yōu)勢基因亞型。A1基因亞型自2006年首次從AFP病例中被分離后,至2017年一直有持續(xù)性流行。5.將HFMD來源的可獲得全長序列的17株E-11毒株根據(jù)不同基因型別和不同疾病類型進行重組分析。本實驗分離到的輕、重癥病例D5基因亞型分離株的重組方式相同,表現(xiàn)為在3C區(qū)與EV-B100和EV-B111發(fā)生重組,在3D區(qū)與EV-B86發(fā)生重組;A1基因亞型輕、重癥病例分離株間的重組模式存在差異,輕癥病例A1基因亞型分離株的重組方式與D5基因亞型分離株相同,3株重癥病例A1基因亞型分離株存在兩種不同的重組模式,一種以HaN-2010-165和HuN-2010-112為代表,表現(xiàn)為5'-UTR與EV-B98發(fā)生重組,另一種以GD-2012-34為代表,表現(xiàn)為5'-UTR與EV-B74,3D區(qū)與EV-B86存在重組;除與EV-B原型株存在重組外,中國大陸E-11分離株還與近幾年流行的其他EV-B流行株發(fā)生重組,重組活動頻繁。6.腸道病毒熱力滅活方式顯示,56℃加熱滅活30min后可使EV-A71病毒的滅活對數(shù)值超過6,65℃加熱滅活30min,70℃加熱滅活10min后觀察不到CPE發(fā)生,建立滅活溫度和處理時間的多重線性回歸方程,結(jié)果顯示溫度每提高10℃,EV-A71病毒滴度下降約1.7個TCID50,滅活作用時間每提高10分鐘,EV-A71病毒滴度下降約0.2個TCID50;化學消毒劑滅活效果評價顯示,三氯異氰尿酸泡騰片,virkon消毒粉和新型消毒劑次氯酸分子可以有效滅活EV-A71病毒。研究結(jié)論:1、基于E-11 VP1編碼區(qū)全長序列,可將其劃分為A-F共六個基因型,其中F基因型為本研究劃分的新的基因型別,分離至非洲中西部的內(nèi)陸國家;D5基因亞型的E-11毒株在中國HFMD中的檢出為國內(nèi)首次報道。2、1994-2017年度中國大陸分離到的200株E-11毒株可以被劃分到A1-A3,B,C1,C3,D5,E基因型,存在多個E-11基因型的循環(huán),其中A1-A3為中國大陸本土流行株,暫未見其他國家報道。3、分子流行病學分析顯示,A1基因亞型是2008-2017年期間中國大陸流行的優(yōu)勢基因型別,以1999年和2008年為時間節(jié)點,中國大陸流行的E-11基因型別可能發(fā)生了較為明顯的轉(zhuǎn)變:持續(xù)流行的基因型別由C1轉(zhuǎn)變?yōu)锳2,再轉(zhuǎn)變?yōu)锳1基因亞型。4、除中國大陸外其他國家分離到的E-11毒株的基因型分布可能在1998年前后發(fā)生明顯轉(zhuǎn)變,由D4基因亞型轉(zhuǎn)變?yōu)镈5基因亞型的持續(xù)性流行,1998-2014年期間D5基因亞型是國外分離株的絕對優(yōu)勢基因型。5、基因重組:本研究提示中國大陸HFMD來源的E-11毒株在5'-UTR區(qū)和3D區(qū)與其他EV-B新型腸道病毒發(fā)生重組,A1基因亞型分離株重組方式較D5基因亞型多,可能在其成為優(yōu)勢基因亞型過程中起著重要作用;HFMD來源的E-11毒株與近年流行的其他EV-B流行株重組活動頻繁,且不乏與暴發(fā)事件分離株發(fā)生重組,成為其將來導致疾病暴發(fā)流行的潛在隱患。6、熱力和化學消毒劑對EV-A71的滅活效果與滅活溫度、消毒劑濃度和處理作用時間等因素有關(guān),研究化學消毒劑對EV-A71的滅活曲線對于指導化學消毒劑濃度和處理作用時間的選擇具有重要意義。
【學位授予單位】：中國疾病預防控制中心
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R197.21
【圖文】：

Ｆｉｇｕｒｅ邋３、Ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ邋ｔｒｅｅ邋ｂａｓｅｄ邋ｏｎ邋ｔｈｅ邋ｃｏｍｐｌｅｔｅ邋ＶＰ１邋ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ邋ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ邋ｏｆ邋９４逡逑Ｅ－ｌｌ邋ｒｅｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｖｅ邋ｓｔｒａｉｎｓ逡逑４３逡逑

將２．１．２中所述的附表２中的２００條中國大陸序列用同樣的方法構(gòu)建基于Ｅ－１１全長逡逑區(qū)的系統(tǒng)進化樹，將２００８？２０１７年中國大陸的序列分支分別用不同的顏色進行標注，逡逑２００８年以前的中國大陸分離株不標注顏色，最終得到圖４中的系統(tǒng)進化樹，其分離株的逡逑樣本來源，分離時間和地區(qū)等信息歸納于表９中。逡逑表８、２００株中國大陸分離株的信息匯總表逡逑Ｔａｂｌｅ邋８．邋Ｓｕｍｍａｒｙ邋ｏｆ邋２００邋￡－１１邋ｓｔｒａｉｎｓ邋ｏｆ邋ｍａｉｎｌａｎｄ邋ｏｆ邋Ｃｈｉｎａ逡逑＿樣本分離來源丨基因（亞）型（數(shù)ｇ）邐分離時間邐省份逡逑Ａｌ（２０）邐２００６，邋２００８－２０１０邐山東，四川逡逑１９９９－２００１，２００３－２００４，山東，云南，四逡逑Ａ２（３７）邐２００６－２００７邐ＪＩＩ邐逡逑ＡＦＰ邐Ａ３（２）邐１９９４，邐１９９６邐Ｍ邐逡逑１９９４－１９９５，邋１９９７，逡逑Ｃｌ（１５）邐１９９９－２０００邐山東，西藏逡逑邐Ｅ（４）邐１９９９邐Ｍ邐逡逑云南，湖南陜逡逑西

中國大陸E一n與Ev-B原型株基于P2非結(jié)構(gòu)蛋白編碼區(qū)構(gòu)建系統(tǒng)進化樹

【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 王成宇;;感染腸道病毒71型的手足口病患兒相關(guān)免疫狀態(tài)變化[J];中國現(xiàn)代藥物應用;2016年23期

2 張惠芬;袁惠;;腸道病毒71與小兒急性呼吸道感染相關(guān)性研究[J];山西醫(yī)藥雜志;2017年09期

3 黃先萍;余中紅;劉可心;;2015-2016年德陽市兒童腸道病毒71型感染手足口病的流行病學特點及防治分析[J];中國婦幼保健;2017年13期

4 錢慧莉;王秀霞;閻志新;張有起;謝菲;;腸道病毒71型危重癥手足口病多臟器損害的機制[J];臨床薈萃;2017年10期

5 張小康;咼生容;馬曉良;張大軍;;抗腸道病毒靶點藥物研究進展[J];中國醫(yī)藥生物技術(shù);2016年05期

6 郭靖;;重癥腸道病毒71型感染手足口病研究進展[J];中國藥業(yè);2015年05期

7 楊平;;寶寶得了手足口病,別慌[J];幼兒教育;2016年29期

8 梁輝;許燕;;手足口病可以預防嗎[J];健康博覽;2017年03期

9 彭紅飛;王停波;向方槐;李彩華;何錦屏;龔萍;;腸道病毒71型6例檢測報告及文獻復習[J];內(nèi)蒙古中醫(yī)藥;2014年12期

10 朱琥;韓曉群;;2012年武漢地區(qū)手足口病腸道病毒分型與臨床特征分析[J];武漢大學學報(醫(yī)學版);2014年04期

相關(guān)會議論文 前10條

1 劉亞靜;張群;朱利塞;魯海冰;胡俊英;李欣;何佳;王新平;;E種腸道病毒與羊腸道病毒間的抗原交叉性研究[A];中國畜牧獸醫(yī)學會動物傳染病學分會第九次全國會員代表大會暨第十七次全國學術(shù)研討會論文集[C];2017年

2 徐勇勝;;腸道病毒71型感染所致肺水腫的預測及干預的研究[A];中華醫(yī)學會第十七次全國兒科學術(shù)大會論文匯編（下冊）[C];2012年

3 徐勇勝;;腸道病毒71型感染所致肺水腫的預測及干預的研究[A];中華醫(yī)學會第十三屆全國兒科呼吸學術(shù)會議論文匯編[C];2012年

4 陳友鵬;梁旭競;;腸道病毒71型感染所致中樞神經(jīng)系統(tǒng)損害及其免疫發(fā)病機制[A];第四屆中國醫(yī)師協(xié)會感染科醫(yī)師大會暨傳染病診治高峰論壇、浙江省醫(yī)學會肝病、感染病學學術(shù)年會論文匯編[C];2011年

5 羅文英;趙衛(wèi);曹虹;劉建軍;張仁利;;腸道病毒71型感染人腦微血管內(nèi)皮細胞的比較蛋白質(zhì)組學研究[A];新發(fā)傳染病研究熱點研討會論文集[C];2012年

6 張欣;鄧小玲;管大偉;鄭煥英;郭雪;楊杏芬;柯昌文;;2008年廣東省腸道病毒71型分離株全基因組核苷酸序列分析[A];新發(fā)和再發(fā)傳染病防治熱點研討會論文集[C];2009年

7 吳亦棟;周俊;陳東;趙仕勇;韋翊;;腸道病毒核酸與抗體聯(lián)合檢測在手足口病病原早期診斷中的應用[A];2015浙江省檢驗醫(yī)學學術(shù)年會論文匯編[C];2015年

8 袁藝;宋國維;曹玲;崔小岱;錢淵;朱春梅;伏謹;馬連華;許崢;朱汝南;鄧潔;王芳;趙林清;;腸道病毒相關(guān)的小兒急性呼吸道感染的研究[A];中華醫(yī)學會第十四次全國兒科學術(shù)會議論文匯編[C];2006年

9 王彥霞;康鍇;黃學勇;陳豪敏;許汴利;;河南省2011年健康人群腸道病毒帶毒率監(jiān)測[A];中華醫(yī)學會全國新發(fā)和再發(fā)傳染病2012年學術(shù)研討會論文匯編[C];2012年

10 錢澄懷;熊華;;嬰幼兒糞便標本中晶格樣結(jié)構(gòu)物與腸道病毒的關(guān)系[A];第五次全國電子顯微學會議論文摘要集[C];1988年

相關(guān)重要報紙文章 前10條

1 方舟子;手足口病有那么可怕嗎？[N];中國青年報;2011年

2 本報見習記者 程唯珈;用模型預測腸道疫情暴發(fā)[N];中國科學報;2018年

3 本報見習記者 卜葉;夏季來臨 小心B族腸道病毒[N];中國科學報;2019年

4 北京地壇醫(yī)院主任醫(yī)師 蔡fg東;柯薩奇A6病毒來襲 怎么防[N];健康報;2016年

5 本報記者 燕聲;別輕視你遇到的小腹瀉[N];保健時報;2017年

6 本報記者 董超;夏天到了，手足口病“蠢蠢欲動”[N];保健時報;2017年

7 胡德榮;中美科研合作結(jié)碩果：ECHO30腸道病毒基因測序完成[N];中國醫(yī)藥報;2005年

8 林湘艷;春天,警惕孩子患上手足口病[N];中國中醫(yī)藥報;2009年

9 朱本浩;小兒腸道病毒疾病知多少[N];科技日報;2005年

10 周立民邋熊潤頻;阜陽腸道病毒EV71感染者升至915例[N];新華每日電訊;2008年

相關(guān)博士學位論文 前10條

1 王冬音;穿心蓮內(nèi)酯抑制腸道病毒D68復制的作用機制研究[D];吉林大學;2019年

2 李兆龍;腸道病毒71（EV71）與宿主限制因子相互作用分子機制的研究[D];吉林大學;2019年

3 杜娜;白藜蘆醇抗腸道病毒71型至手足口病的作用機制研究[D];吉林大學;2019年

4 韓陽;SIRT1干擾腸道病毒71型復制的機理[D];武漢大學;2017年

5 張暢;小鼠免疫系統(tǒng)發(fā)育對腸道病毒71型易感性影響研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學院;2018年

6 羅震;聚胞嘧啶結(jié)合蛋白1調(diào)控腸道病毒71型基因表達和復制的分子機制研究[D];武漢大學;2014年

7 楊小丹;腸道病毒71型抑制經(jīng)典應激顆粒形成的機理研究[D];武漢大學;2018年

8 周世力;腸道病毒71型基因組研究和SARS冠狀病毒結(jié)構(gòu)蛋白的鑒定與分析[D];華中農(nóng)業(yè)大學;2004年

9 潘文勝;新型病原體的探索研究[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學科學院;1999年

10 張文清;RT-PCR對水中腸道病毒滅活效果及機制的評價研究[D];第四軍醫(yī)大學;1996年

相關(guān)碩士學位論文 前10條

1 劉陽陽;腸道病毒C組96型的分子特征分析及B細胞表位篩選鑒定[D];桂林醫(yī)學院;2019年

2 曹觀華;載脂蛋白L1在腸道病毒A71復制中作用的初步研究[D];南方醫(yī)科大學;2019年

3 姜棋予;國內(nèi)腸道病毒流行株全基因組序列擴增方法的建立與評價[D];軍事科學院;2019年

4 郭靚驊;大熊貓及小熊貓腸道病毒群落初步研究[D];上海交通大學;2017年

5 李婕;�？刹《�11型多個基因型在中國大陸的循環(huán)及腸道病毒的實驗室生物安全研究[D];中國疾病預防控制中心;2019年

6 萬俊凱;腸道病毒D組68型溶瘤活性的初步探索及其新型中和實驗方法建立[D];廈門大學;2018年

7 張仲文;應激顆粒及小分子化合物法匹拉韋抗人腸道病毒D68研究[D];天津大學;2018年

8 李玉靜;以結(jié)構(gòu)為基礎的腸道病毒71型2A蛋白酶抑制劑設計[D];廈門大學;2017年

9 楊雨露;EV71型病毒蛋白酶抑制劑的開發(fā)及結(jié)構(gòu)研究[D];廈門大學;2018年

10 胡卓;2125例手足口病臨床特征的調(diào)查研究[D];廣西醫(yī)科大學;2019年

本文編號：2791112